3个黑龙江烟区烟草花叶病毒分离物的全基因组序列测定与分析

为明确黑龙江烟区烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到HEB1、HEB2和MDJ三个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,3个分离物全长均为6395核苷酸（GenBank登录号分别为MH595919、MH595920和MH595921）。HEB1和MDJ与辽宁分离物Beipiao（HE818412）一致率最高,分别为98.9%和99.6%;HEB2与云南分离物Chuxiong1（HE818417）一致率最高,为97.1%。HEB1是MDJ和HEB2的重组体。在根据全基因组序列构建的系统进化树中,TMV分为3个组,其中HEB1和MDJ均属I（U1）组,HEB2属Ⅱ（Rakkyo）组。TMV的4个基因均处于负选择,其中衣壳蛋白基因的选择压力最大。      

马铃薯Y病毒两个黑龙江烟草分离物的全基因组序列分析

为明确黑龙江烟区马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到Harbin和MDJ两个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,2个分离物(GenBank登录号分别为MH933741和MH933742)基因组全长均为9699核苷酸。Harbin与MDJ和比利时分离物GBVC 26(JQ969039)一致率最高,为98.5%;MDJ与Harbin和GBVC 26一致率最高,为98.5%。Harbin是美国分离物Oz和瑞士分离物N-605的重组体,MDJ是美国分离物CW和N-605的重组体。利用全基因组序列构建的系统进化树显示,PVY分离物分为9个组,Harbin和MDJ均属PVYN-Wi组。PVY的11个基因均处于负选择,其中NIa蛋白基因的选择压力最大。      

贵州烟草上一株PVY坏死株系全序列测定与分析

2007年从贵州省贵定烟区采集一株呈典型马铃薯Y病毒坏死株系(Potato virus Y vein necrosis strain,PVYN)的烟草病毒病样,经PVY鉴别寄主枸杞(Lycium barbarum L.)单斑分离纯化后,于枯斑三生烟(Samsun NN)株上保存,得到PVY分离物Guiding-3。以GenBank中已有的PVY全序列为基础,设计了3对PVY特异引物。通过总RNA提取、RT-PCR及序列测定,发现所测得的PVY分离物Guiding-3全长基因组序列(NCBI登录号为HM590405)包括9 699个碱基,整条序列仅包含一个由9 186个碱基组成的开放读码框(ORF),编码一条包含3 061个氨基酸的多聚蛋白。利用MEGA软件对所测得的PVY全序列与GenBank中已有的PVY全序列进行系统进化分析,发现Guiding-3分离物的序列与PVYN、PVYNTN、PVYN:O、PVYO、PVYNNP株系的一致性分别为98%、97%、94%、92%、85%,在已有的PVY株系中,Guiding-3分离物与PVYN株系具有较高的进化亲缘关系。另外,还对PVY的分子变异进行了初步讨论。     

烟草脉带花叶病毒云南分离物全基因序列分析

应用电子显微镜负染色法在烟草叶片斑驳、脉间褪绿病样中观察到马铃薯Y病毒属病毒粒子,通过马铃薯Y病毒属兼并引物扩增获得目的片段,序列分析表明病样中病原物为TVBMV,命名为YN-YX-TVBMV。根据GenBank已知序列,分别合成引物,对YN-YX-TVBMV进行克隆及测序,得到一条6047 bp的不完整的病毒基因组核苷酸序列,将该序列与国内报道的TVBMV全基因序列进行对比分析发现该分离物与报道的TVBMV其他分离物具有明显的地域分布差异,即云南获得的分离物均独立聚为一簇。     

烟草脉带花叶病毒基因组序列分析

为了探明烟草脉带花叶病毒危害和流行的机制,使用RT-PCR技术扩增获得TVBMV云南分离物YN9.1基因组全序列,并进行了基因组结构、序列同源性、氨基酸保守基序、系统进化和重组分析。结果表明:(1)YN9.1基因组具有Potyvirus属病毒典型特征,含有在Potyvirus属病毒中较为少见的NIb/CP切割位点Q/N;(2)YN9.1与其它分离物核苷酸序列同源性为90.5-91.1%,氨基酸序列同源性为95.2-96.2%。与YND核苷酸和氨基酸序列同源性最高;(3)对HC-Pro和CP保守基序进行了分析。YN9.1具有RITC、PTK、DAG等病毒蚜虫传播保守基序,其中RITC在Potyvirus属病毒中常见形式为KITC;(4)系统进化树分析结果显示,TVBMV进化形成2个组,云南分离物独立进化形成一组,TVBMV进化与地域具有明显的相关性;(5)重组分析发现PY为ZC1和YN的组内重组体,重组位点位于HC-Pro 3'末端和NIb 5'端。      

绒毛状烟草和林烟草全基因组序列图谱完成

绒毛状烟草和林烟草全基因组序列图谱已经由中国烟草完成。绒毛状烟草和林烟草是栽培烟草的两个祖先种,绒毛状烟草和林烟草全基因组序列图谱的完成,具有重要的科学价值和战略意义。该工作根据烟草基因组重复序列含量较高和基因组较大等特点,通过Illumina第二代高通量测序技术,采用     

烟草甲线粒体基因组序列测定与分析

为进一步获取烟草甲线粒体基因组信息,以期为烟草甲分类鉴定、系统发育和种群遗传等方面的深入研究奠定基础,采用二代测序技术测定了烟草甲线粒体基因组序列。结果表明:烟草甲线粒体基因组全长15 009 bp,包含13个蛋白质编码基因、2个核糖体RNA基因、22个转运RNA基因和1个控制区,基因组排列的顺序和组成与鞘翅目储粮害虫线粒体基因组相似。烟草甲线粒体基因组的A+T含量为78.7%,13个蛋白质编码基因除cox2基因的起始密码子是TTG外,其余蛋白质编码基因的起始密码子均为通用密码子ATN;典型的TAA或TAG为9个基因的终止密码子,而cox3、nad5、nad4以不完全的T作为终止密码。烟草甲的22个tRNA均能折叠成三叶草结构,但tRNA^Asp、tRNA^Leu和tRNA^His的二级结构中缺少TψC环,tRNA⁽ser(AGN))的DHU(Dihydorouridine,二氢尿嘧啶)臂缺失,因而不能形成典型的三叶草式二级结构。     

烟草青枯病抗性的全基因组关联分析

为发掘并定位烟草青枯病抗性遗传位点,利用RAD简化基因组重测序技术（RAD-seq）,以219份遗传多样性较高的国内外烟草品种作为供试自然群体,利用田间病圃鉴定供试材料的青枯病抗性,通过全基因组关联分析（GWAS）,发掘抗病基因组区段,并进行抗病候选基因预测。结果表明,筛选鉴定到8个高抗青枯病的烟草品种,获得了384 904个高质量的SNP位点,对烤烟群体的基因组连锁不平衡衰减（LD）距离进行了估算,平均为256 kb。在烟草基因组内发掘到1个与烟草青枯病抗性变异显著关联的区段,峰值SNP在17号染色体的23 977 382 bp处,p=6.196×10^-7,能解释14.29%的表型变异,在该区段内预测到4个抗病候选基因。本研究为烟草青枯病抗病基因克隆及分子育种提供了较为明确的基因组定位信息。     

烟草黄瓜花叶病毒湖北分离物全基因组序列分析及亚组鉴定

为明确我国湖北烟区烟草黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)的亚组类型,对湖北地区侵染烟草的CMV HB24株系进行基因组全长克隆和序列分析。结果表明,HB24株系RNA1(GenBank序列号:KC019299)全长为3363个核苷酸(nt),编码993个氨基酸的1a蛋白;RNA2(GenBank序列号:KC019300)全长为3049nt,编码859个氨基酸的2a蛋白和111个氨基酸的2b蛋白;RNA3(GenBank序列号:KC019301)全长为2216nt,编码279个氨基酸的3a蛋白和218个氨基酸的CP蛋白。核苷酸序列同源性分析表明,HB24与Fny,SD和Q株系RNA1同源性分别为91.6%,91.1%和75.9%,RNA2同源性分别为91.8%,97.8%和69.5%,RNA3同源性分别为92.1%,93.4%和73.2%;与同属花生矮化病毒(Peanut stunt virus,PSV)ER株系RNA1,RNA2和RNA3的同源性分别为65.5%,56.7%和54.1%,与同属番茄不孕病毒(Tomato aspermy virus,TAV)V株系同源性分别为66.9%,57.7%和51.5%。HB24 RNA3 5′NTR(Nontranslated region)的结构分析以及RNA3 5′NTR和CP基因核苷酸序列系统进化树的分析表明,HB24属于CMV亚组IB。     

烟草COMT蛋白序列的分析

为分析烟草COMT蛋白序列,采用Prabi、Swissmodel和Protscale分析烟草COMT的二级结构、空间结构和疏水性的分析。结果表明,NtCOMT1、NtCOMT2和NtCOMT3的二级结构均以α-螺旋为主,分别为43.84%、44.78%和43.96%;烟草COMT空间结构由两条多肽链组成,呈中心对称,β-折叠主要空间结构的上下端;NtCOMT1和NtCOMT2为亲水性蛋白,NtCOMT3为疏水性蛋白。     

烟草中生物碱的提取和分析方法研究进展

综述了国内外烟草中生物碱的提取和分析方法,主要有蒸馏法、超临界流体法、离子交换法、光度法、色谱法、毛细管电泳法等,并对各种方法的优缺点进行了分析。     

常用烤烟等级质量相似性分析

利用专家评分的方法确定各个等级的质量指数,采用多元统计的方法分析了卷烟配方中常用的25个烤烟等级相似性.结果表明:常用的25个等级烤烟在外观质量指数、内在质量指数、物理特性指数、化学成分指数和总质量指数方面,烟叶的类间平方和均大于机误均方,都达到了显著或极显著的水平,说明其分类是合理的;在卷烟的配方设计过程中可以根据对烟叶各项质量指标的要求进行有尺度的选取替代的级别;在对这25个等级烤烟进行反判时外观质量指数和内在质量指数的总判对率达到了92%,卡方检验也达到了极显著的水平;在选取外观质量、物理特性和化学成分3个指标结合进行判别时,除C3F(由原来的第4类调整为第3类)外,其他24个等级均未误判,其判对率达到98%.     

白肋烟品种资源的聚类分析

为充分了解白肋烟种质资源之间的相似性,根据19个性状数据应用聚类分析软件NTSYS2.10e对来自国内外的149个白肋烟品种资源进行系统的聚类分析。结果表明,在相异系数为0.0375处所有白肋烟品种资源可分为6个大类群及2个小亚群:品种类群I（内含25个品种）,品种类群II（内含22个品种）,品种类群III（内含23个品种）,品种类群IV（内含2个品种亚群,18个品种）,品种类群V（内含24个品种）,品种类群VI（内含37个品种）。所有白肋烟品种资源总的相异系数在0.01-0.53之间,表明各白肋烟品种资源之间存在着一定的差异。      

湖北烟区烤烟质量综合评价及典型相关分析

对湖北烤烟外观质量、化学成分和感官质量状况进行分析,并与津巴布韦烤烟进行比较,结果表明:1)湖北烤烟颜色柠檬黄-橘黄,结构疏松,身份适中;香气质好量足,杂气较轻,余味较舒适,配伍性强.与津巴布韦烤烟相比较,外观及感官质量仍有一定差距:在颜色、成熟度和刺激性上的差异达到0.05显著水平;在结构、香气质、香气量、杂气和余味上的差异达到0.01显著水平;化学成分含量及其比值与津巴布韦烤烟差别不大.2)烤烟外观质量与感官质量关系密切,两者间的典型相关主要是由外观质量中的颜色、成熟度、结构、身份、油分和色度及感官质量中的香气质、香气量和杂气相关决定的.化学成分与感官质量的典型相关主要是由化学成分中的烟碱、总氮、糖碱比和氮碱比与感官质量中的香气质、刺激性和余味相关决定的.     

湖南烟区烤烟钾含量变化及聚类分析

采集湖南主产烟区上、中、下3个部位烤烟样本946份,采用连续流动法测定烟叶钾含量,研究了湖南烟区烤烟钾含量的变化特征并进行了聚类分析。结果表明:湖南主产烟区上、中、下3个部位烟叶钾含量均值分别为2.11%、2.34%、2.71%,其中含量小于2.0%的样本分别占43.6%、21.0%、5.5%,部分上部烟叶钾含量偏低;上、中部烟叶钾含量年度间存在极显著差异,下部烟叶钾含量年度间差异不显著;主栽的3个品种烟叶钾含量表现为K326>云烟87>云烟85,但差异不显著;生态区域间烟叶钾含量差异极显著,表现为湘中烟区高于湘西北烟区和湘南烟区;地区之间烟叶钾含量差异极显著,长沙市最高,娄底市最低,相对较高的地区有邵阳市、怀化市、衡阳市、常德市、郴州市和永州市;在空间变化上,由西南向东北表现为先降低后升高的趋势,由南向西北表现为降低趋势。根据聚类分析结果可将湖南烟区烤烟钾含量大体分为中钾、高钾、中偏低钾3大类型。     

烟草抗PVY育种材料的筛选与应用

马铃薯Ｙ病毒对东北烟区烟草生产危害日趋严重。通过病圃发病情况调查和温室接种鉴定,初步筛选出ＣＶ９１、８７４１４、８０２１三份常规抗马铃薯Ｙ病毒材料,其中ＣＶ９１在田间调查和温室接种鉴定中表现为高抗马铃薯Ｙ病毒;转基因抗马铃薯Ｙ病毒材料８５－２、８６－１,８７－２,８９－１、９４－１、９５－１、９８－１温室接种鉴定结果为对ＰＶＹ免疫,利用ＣＶ９１育成了中抗ＰＶＹ的新品系９１１１－２１。     

卷烟烟丝化学指标的逐步判别分析

采用逐步判别分析法以卷烟烟丝化学指标为自变量对不同品牌的卷烟进行判别分析,构建判别函数,并对判别函数的判别效果进行检验。结果表明,总糖、pH值、总挥发碱、果糖、葡萄糖、蔗糖、马来酸、柠檬酸、油酸、己酸、辛酸、苯甲酸、癸酸、3-羟基－2－丁酮、2-羟基-3-甲基-2-环戊烯-1-酮、氧化异佛尔酮、金合欢基丙酮、寸拜醇等18个变量进入判别函数,由判别函数的方差分析可知判别函数具有显著意义;用自身验证法和交互检验法对原样品进行回判,回判准确率均为100%,新样品的判别准确率达到100%,判别效果良好。      

烟草病毒病综合防治技术研究

在种子消毒,培育无毒烟苗,大田配套防治技术,化学药剂防治和研制中草药制剂等方面,开展了烟草病毒病综合防治技术研究.结果表明,采用5%的肥皂水消毒种子、罩40目尼龙网育苗、5%石灰水消毒育苗土壤、育苗土壤消毒的营养杯直播育苗或直播塑料托盘浅水育苗、苗期和大田前期喷施中药剂除病毒9803、5%石灰水穴内浇施、沟土高培免中耕等综防技术,发病期推迟30 d,相对防效80%左右,上等烟提高4.3-11.3个百分点,产量增加250-300 kg/hm2,产值增加3 000元/hm2左右.     

烟草农药多残留分析方法研究进展

阐述了烟草农药残留分析中的分离和检测技术现状,以及最近出现的一些农药残留分析新技术,内容涵盖了微波辅助萃取、超临界流体萃取、基质固相分散、固相微萃取、搅动棒吸附萃取、加速溶剂萃取和固相萃取等前处理技术,以及气质和液质联用技术、二维气相色谱、超临界色谱、毛细管电泳和酶分析等检测技术。