应用鲎试剂凝胶法监测人免疫球蛋白生产过程中热原质

目的建立检测人免疫球蛋白细菌内毒素的方法。方法采用鲎试剂凝胶法对人免疫球蛋白生产过程中的阶段产品进行细菌内毒素的限量检测和监控,并经家兔法复核。结果连续监控9批人免疫球蛋白制品,鲎试剂凝胶法与家兔法热原质试验符合率100％。结论应用鲎试剂凝胶法对人免疫球蛋白生产过程中的阶段产品进行细菌内毒素的限量检测和控制是快速、准确、可行的。     

细菌内毒素检查法在肺炎球菌结合疫苗研制中的应用及验证

目的应用细菌内毒素检查法(动态浊度法)检测13价肺炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量,并对该方法进行验证。方法用《中国药典》三部(2010版)载录的动态浊度法检查疫苗原辅材料、疫苗过程产物及疫苗细菌内毒素含量,并进行肺炎球菌结合疫苗原液和成品的细菌内毒素含量检测,验证方法的可行性及准确性。结果 13价肺炎球菌结合疫苗生产使用试剂、相关原辅材料和磷酸铝佐剂对细菌内毒素检查无影响;该方法线性、专属性、准确性、精密度、耐用性良好,检定范围初步定为0.08~10 EU/ml,定量限度暂定为0.03 EU/ml;可准确测定疫苗原液和成品中细菌内毒素含量,重复性和准确性良好。结论动态浊度法检测13价肺炎球菌结合疫苗中细菌内毒素含量,结果准确、稳定,符合方法验证的要求,可为该疫苗的质量控制提供稳定可靠的检测方法。     

吸附无细胞百白破联合疫苗的细菌内毒素检查

目的分析吸附无细胞百白破联合疫苗(adsorbed diphtheria-tetanus-acellular pertussis combined vaccine,DTa P)细菌内毒素检查方法的可行性。方法确定供试品最大有效稀释倍数(maximum valid dilution,MVD),并将两个厂家的鲎试剂(λ=0.25 EU/ml)进行灵敏度复核试验后,按照《中国药典》三部(2010版)附录ⅫE细菌内毒素检查法要求,采用稀释法进行供试品干扰试验,确定无干扰稀释倍数;采用凝胶限量试验对13批DTa P进行细菌内毒素检测,并采用动态显色法定量检测其中6批DTa P细菌内毒素含量。结果供试品MVD为800倍;两个厂家鲎试剂灵敏度均在0.125~0.5(0.5~2λ)范围内,符合《中国药典》三部(2010版)规定的标准。将DTa P稀释400倍可排除干扰。13批DTa P凝胶限量试验结果均12 EU/剂,其中6批DTa P动态显色法结果均2.5 EU/剂,相同6批疫苗两种检测方法的结果趋势一致。结论凝胶限量试验与动态显色法均可用于DTa P细菌内毒素检查,但凝胶限量试验更经济,操作更简便,适用范围更广。     

药用辅料苯甲醇细菌内毒素检查方法学研究

建立药用辅料苯甲醇的细菌内毒素检查方法。参照《中国药典》2015年版第四部1143"细菌内毒素检查法"进行干扰试验,同时利用凝胶半定量方法测定苯甲醇细菌内毒素的含量。结果:当鲎试剂灵敏度为0.125EU/m L时,苯甲醇的最低不干扰浓度为4.188 mg/m L,此时苯甲醇稀释了250倍;利用凝胶半定量法测得苯甲醇的细菌内毒素0.06EU/mg。苯甲醇可以通过直接稀释法进行细菌内毒素检测,且最低不干扰浓度为4.188 mg/m L。     

破伤风抗毒素细菌内毒素检查方法的建立

目的建立破伤风抗毒素细菌内毒素的检测方法。方法确定内毒素限值和供试品溶液的最大有效稀释倍数,制备供试品溶液;用细菌内毒素工作标准品作鲎试剂灵敏度复核试验,用供试品溶液在最大有效稀释倍数下作干扰试验,在前者试验有效,且后者试验无干扰作用时,在该浓度下对供试品进行凝胶限量试验,并与热原检查法比较。结果检测的10批破伤风抗毒素细菌内毒素的限量与热原检查法热原的限度完全相符。结论凝胶限量法可以替代热原检查法,对破伤风抗毒素进行细菌内毒素的限量检测。     

盐酸法舒地尔注射液细菌内毒素方法学验证

建立盐酸法舒地尔注射液细菌内毒素检查法,保证检测结果符合质量标准要求。采用《中国药典》2010年版附录ⅪE细菌内毒素检查法要求进行试验,结果表明,将盐酸法舒地尔注射液稀释至0.5 mg/mL,用灵敏度为0.25 EU/mL的鲎试剂做干扰试验,无干扰影响;确定盐酸法舒地尔注射液细菌内毒素限值为5.0 EU/mg,应用鲎试剂可以进行细菌内毒素法的检查。     

动态显色法检测白喉毒素突变体CRM197的细菌内毒素含量

目的建立检测白喉毒素突变体CRM197细菌内毒素(bacterial endotoxin)含量的动态显色法(kinetic chromogenic assay,KCA)。方法按照《中国药典》三部(2010版)要求,用细菌内毒素检查用水(bacterial endotoxin,BET)稀释细菌内毒素工作标准品制备细菌内毒素标准曲线系列溶液,各浓度均设3个平行孔,分别与动态显色鲎试剂(kinetic chromogenic analysis tachypleus amebocyte lysate,KCA TAL)反应,绘制标准曲线,验证标准曲线的可靠性,确定最佳线性范围、测定范围及最低检测限(limit of quantitation,LOQ),验证方法的精密性和准确性,并进行初步应用。结果标准曲线的回归方程为:y=-0.263 x+2.741,R2=0.997,相关系数的绝对值∣r∣≥0.980,阴性对照的反应时间大于标准曲线最低点的反应时间,各复孔的变异系数(CV)<10%;内毒素浓度在0.02².50 EU/ml时,线性关系良好,LOQ为0.02 EU/ml;3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素检测结果的CV均<5%,加入高、中、低3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素的3批供试品检测结果的CV均<10%,回收率在95%2.50 EU/ml时,线性关系良好,LOQ为0.02 EU/ml;3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素检测结果的CV均<5%,加入高、中、低3个浓度(2.50、0.50、0.02 EU/ml)标准内毒素的3批供试品检测结果的CV均<10%,回收率在95%¹43%之间;采用建立的方法检测10批次CRM197样品的细菌内毒素含量,回收率在77%143%之间;采用建立的方法检测10批次CRM197样品的细菌内毒素含量,回收率在77%¹18%之间,其中8批样品的内毒素含量合格。结论动态显色法检测CRM197中内毒素的含量精密性和准确性良好,能快速、定量检测样品中的内毒素含量,抗干扰能力强,可用于CRM197研制过程中的质量控制。     

超滤技术去除羟基喜树碱中细菌内毒素的研究

考察了超滤技术去除羟基喜树碱原料药中细菌内毒素的效果。采用10 kDa截留分子量超滤膜对羟基喜树碱原料药溶解液进行超滤,以动态浊度法定量检测超滤前后羟基喜树碱中细菌内毒素的含量。结果表明:样液超滤前细菌内毒8.103 5 EU/mL,超滤后为0.307 6 EU/mL,内毒素去除率为96.20%,其有效成分羟基喜树碱的透过率为96.1%。超滤技术可以很好的去除羟基喜树碱原料药溶解液中细菌内毒素,有效成分损失极其微少,可提高其用药安全性。     

细菌内毒素法检查5%果糖注射液

目的研究果糖注射液细菌内毒素检查(BET)的干扰实验,建立果糖注射液细菌内毒素检查法。方法根据《中国药典》2005版二部收载的细菌内毒素检查法的要求进行实验。结果该药原液对细菌内毒素和鲎试剂的反应无干扰作用。结论该药可采用细菌内毒素检查法控制药品质量。     

鲎试验检测土霉素注射液中细菌内毒素的方法

通过干扰试验探讨土霉素注射液对细菌内毒素试验的干扰情况和干扰性质,采用凝胶鲎试验对样品中的细菌内毒素进行检测,土霉素注射液在使用λ值为0.25EU·ml-1的鲎试剂时,其最大无干扰浓度为0.625 mg·ml-1,最小无干扰稀释倍数为320倍.所建立方法检查土霉素注射液的细菌内毒素可行.     

无菌原料药头孢噻肟钠细菌内毒素的控制

细菌内毒素是热原的一种,当噻肟钠注射剂中含有过量的内毒素时会引起一系列的不良反应,所以在噻肟钠原料药中要严格控制内毒素的量。从内毒素的危害着手,验证了用0.06 EU/mL的鲎试剂凝胶法检验头孢噻肟钠中内毒素残留时,不干扰检测的浓度范围为1.25～5.0 mg/mL,确定了日常检测头孢噻肟钠溶液浓度为1.5 mg/mL。并根据内毒素的特性,结合生产实际,研究在生产过程中应从工艺用水,原辅料和日常的容器,工具清洗,工艺操作等方面控制细菌内毒素的产生。     

重组人干扰素α2b内毒素检查法的研究

目的研究鲎试剂法与家兔法检测重组人干扰素α2b内毒素结果的相关性,并参照家兔热原试验的阈值量,来确定本制品质量标准中内毒素的限量标准。方法分别用不同浓度的内毒素溶液和含不同浓度内毒素的供试品溶液进行家兔热原质试验,确定供试品内毒素限值,并在此限值下进行内毒素检测,方法均参照2000年版《中国药典》和2000年版《中国生物制品规程》进行。结果在含不同浓度内毒素溶液的家兔热原质试验中,致热阈值小于5.0EUml。在含不同浓度内毒素供试品溶液的家兔热原质试验中,致热阈值小于1.25EUml。以此确定本品内毒素限值,检测该制品的内毒素含量,结果均符合规定。结论本品在内毒素含量小于3.5EU500万单位dose的范围内,根据具体的对照实验及制品的用途来规定细菌内毒素限值,可用鲎试剂法代替家兔法检测注射用重组人干扰素α2b冻干制剂的热原质。     

应用鲎试剂法检测人用纯化狂犬病疫苗的内毒素

<正>为了解人用狂犬病疫苗中内毒素的含量,我们应用鲎试剂法对纯化地鼠肾细胞人用狂犬病疫苗进行了检测,现将结果报道如下。     

检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制

目的　检测疫苗残余牛血清ELISA试剂的质量控制。方法　将用于生产的 10批牛血清混合后 ,免疫家兔制备抗血清 ,以纯化抗牛血清兔IgG作为包被抗体、HRP 酶标抗体作为指标抗体 ,采用ELISA双抗体夹心法进行线性范围、精密度、准确度、特异性评价等一系列检测。结果　兔抗牛免疫血清双扩效价可达 1∶16 ,免疫血清、纯化抗体和酶标抗体均含有抗牛血清白蛋白及牛IgG等多种蛋白成分的抗体 ;检测疫苗中残余牛血清含量最佳线性范围为 0 78～ 2 5ng/ml,精密度 (回收率为 80 %～ 112 . 5 % ,CV为 2 . 5 %～ 9 0 % )和准确度 (回收率为 96 . 7%～112 . 5 % ,CV为 1. 4 %～ 9 .4 % )良好 ,检测限度为 1 5ng/ml,检测限量为 3ng/ml;与正常马、兔、豚鼠血清以及不同病毒性疫苗基质液均无交叉反应 ,可定量检测不同病毒性疫苗中的残余牛血清。结论　所制备的ELISA试剂特异性强 ,灵敏度高 ,重复性好 ,适用于常规疫苗中残余牛血清的检测。     

人血白蛋白细菌内毒素的检查法

作者应用鲎试剂检测人血白蛋白制剂中的细菌内毒素。通过试验确定0.0167EU/mg 为内毒素实际限值,即>0.0167EU/mg 为鲎试验不合格,<0.0167EU/mg 为鲎试验合格。经检测72份人血白蛋白样品。家兔法合格63份,鲎试验法合格59份,说明鲎试验法较家兔法敏感。     

抗肝癌基因疫苗内毒素去除方法的建立

目的建立去除抗肝癌基因疫苗pVAX1-aLCGV内毒素的方法。方法采用Triton X-114液相分离法去除抗肝癌基因疫苗中的内毒素,鲎试剂法检测疫苗中的内毒素含量,家兔法复试,ELISA法检测内毒素入血前后血浆中细胞因子TNF-α和IL-8的含量及疫苗的免疫原性,并比较处理前后的基因疫苗转染SMMC-7721和HepG2细胞的转染效率。结果经Triton X-114处理后,基因疫苗的内毒素含量及热原检测均合格;内毒素入血后,血浆中TNF-α和IL-8的含量均明显升高;疫苗的免疫原性与处理前比较,差异无统计学意义;处理后疫苗质粒的细胞转染效率增高。结论 Triton X-114能有效去除基因疫苗pVAX1-aLCGV中的内毒素,为其临床应用奠定了基础。     

安琪酵母浸出物FM 902中内毒素含量检测方法的建立

目的建立安琪酵母浸出物FM902中内毒素含量检测方法。方法采用干热程序有效性试验、灵敏度复核试验、FM902凝胶法干扰试验和FM902凝胶半定量试验检测FM902中的内毒素含量。结果 FM902浸出物中所含内毒素为5 EU/mg,符合《中国药典》三部(2015版)的限量标准。结论成功建立了酵母浸出物FM902中内毒素含量检测方法,该方法操作简便,重复性好,可作为酵母浸出物中内毒素含量的评估方法。     

鲎试验检测肿节风注射液热原的实验研究

目的 建立肿节风注射液细菌内毒素检查法.方法 用两个厂家的鲎试剂时四批样品进行干扰试验.结果 对样品进行15 稀释,用0.25 Eu.ml-1鲎试剂进行试验可消除干扰.结论 可以应用细菌内毒紊检查法对肿节风注射液进行热原检查.     

黄芪注射液中细菌内毒素与热原相关性研究及限度的确定

建立了黄芪注射液细菌内毒素与热原之间的关系,并确定其细菌内毒素的限度。用稀释16倍的黄芪注射液配成含不同浓度梯度的细菌内毒素系列样品,分别用动态浊度法和家兔法测定细菌内毒素和家兔最大升温值。结果表明,细菌内毒素方法建立中,黄芪注射液在稀释8～64倍后测定无干扰;细菌内毒素浓度与家兔体温升高值有相关性,回归方程为Y=0.448+e3.221 X(r2=0.997);进一步考虑热原检查法的偏差,黄芪注射液的细菌内毒素限度应不超过2.31EU/mL。因此,采用动态浊度法可对黄芪注射液中细菌内毒素进行测定并建立可靠的限度标准。对中药无菌制剂采用细菌内毒素测定法提供一种研究思路,同时为快速反映中药无菌制剂的热原情况提供一种有效的转换方法,尤其有利于中药无菌制剂中间体热原的控制。     

卡巴他赛注射液细菌内毒素检查法的研究

为建立卡巴他赛注射液的细菌内毒素检查方法。参照《中国药典》2010年版二部附录细菌内毒素检查法--凝胶法进行试验。结果表明将卡巴赛注射液用其注射用溶剂振摇混匀后,稀释40倍时对细菌内毒素检查无干扰作用。所以卡巴他赛注射液可采用细菌内毒素检查法--凝胶法进行细菌内毒素检测。