溶氧状况对黑曲霉DB056产柚苷酶的影响研究

以α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶的酶活为评价指标,从装液量、玻璃珠数量、氧载体这3个方面来研究黑曲霉DB056摇瓶发酵产柚苷酶的溶氧条件。通过单因素优化得到的摇瓶发酵条件为:装液量35mL、玻璃珠添加个数为3个(直径4mm)、最适氧载体为1%正己烷,在此条件下α-鼠李糖苷酶活力最大可达787.8U/mL,柚苷酶活力最大可达232.5U/mL。     

黑曲霉S-05产柚苷酶液态发酵培养条件的优化

以黑曲霉(Aspergillus niger S-05)菌株作为实验材料,采用摇瓶发酵方法,以α-L-鼠李糖苷酶、β-D-葡萄糖苷酶、柚苷酶三酶酶活为评价指标,对其液态发酵条件进行了研究.优化后的培养条件为:2.0%豆粉、0.5%蔗糖、0.05%柚苷、0.6%MgSO4·7H2O、0.2%吐温-80、培养温度26℃、pH5.0,250mL三角瓶装量30mL、转速190r/min.此时柚苷酶酶活达到429.09U/mL,比优化前的基础培养基(137.78 U/mL)提高了2.1倍.     

黑曲霉DB056发酵α-鼠李糖苷酶和柚苷酶培养基的优化研究

目的:优化黑曲霉DB056产α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的培养基,提高这两种醇的产量.方法:以α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力为指标,研究碳源、氯源和乳化剂Triton X-100对α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力的影响,优化黑曲霉DB056摇瓶发酵α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的培养基.结果:碳氮源的种类与浓度,乳化剂Triton X-100的浓度对黑曲霉DB056产α-鼠李糖苷酶和柚苷酶有重要影响;黑曲霉DB056产酶的优化培养基是:柚皮苷3.5 g/L,玉米浆4g/L,MgSO4·7H2O 1.0g/L,KH2PO41.0g/L,KCl 0.5 g/L,无水CaCl20.1 g/L,乳化剂Triton X-1001.0%.此时α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力分别为994U/mL和276U/mL,分别比发酵初始培养基提高了42.3%和147.8%.结论:通过培养基优化,大幅度提高了黑曲霉DB056液态深层发酵α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力.     

柚苷酶的生产及其在食品工业中的研究进展

柚苷酶体系由α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶组成,不同来源的柚苷酶性质不同,现在柑橘加工的主要产品柑橘汁的主要面临问题是蜜柚中的苦味物质,柚苷酶可以水解柚皮苷使果汁苦味减轻,是果汁脱苦的关键酶,但是目前国内关于柚苷酶方面的研究报道甚少,而且我国缺乏适合工业化生产的高产酶菌株,这就极大限制了应用,本文主要介绍柚苷酶的酶学性质、微生物生产方法以及在食品工业中的应用。     

黑曲霉产柚苷酶的发酵条件优化

利用高效液相色谱法,检测发酵液中α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的活力,考察碳源、pH值、搅拌转速、发酵温度对柚苷酶产量的影响,对黑曲霉DB056产柚苷酶的7L罐发酵工艺进行优化.研究结果表明,以20g/L柚皮苷为唯一碳源,发酵黑曲霉DB056产柚苷酶的效果最佳.发酵过程的pH值、搅拌转速和发酵温度的最优控制值分别为6.0、700 r/min和32℃,此时产酶效果最理想,发酵过程α--鼠李糖苷酶和柚苷酶最大酶活力分别达到1 133.00和788.42U/mL.将优化的发酵工艺放大到200 L发酵罐进行试验,α-鼠李糖苷酶和柚苷酶的最大酶活力分别为1 069.30 U/mL和727.44 U/mL.中试放大效果良好.     

聚乙烯醇和海藻酸钠固定化柚苷酶的制备及其性质

以聚乙烯醇、海藻酸钠为载体,固定化柚苷酶;以戊二醛为交联剂,考察固定化工艺条件对酶活的影响,研究固定化酶的部分酶学性质。用高效液相色谱法分析柚苷酶的α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶活力,结果表明:最佳载体组合为11%聚乙烯醇与0.5%海藻酸钠;当缓冲液p H 4、戊二醛含量1%、交联时间0.5 h、吸附时间3 h、加酶量141 U/m L、硼酸4%、Ca Cl21%时,固定化酶活力达到最大值。柚苷酶固定化后,α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶活力的最适温度提高5℃,最佳活性p H值提高1.0,p H稳定性基本不变,温度稳定性下降5℃。α-L-鼠李糖苷酶、柚苷酶的米氏常数(Km)固定化后都增大;α-L-鼠李糖苷酶的最大反应初速度(Vmax)经固定化后减小,柚苷酶的Vmax增大。将固定化柚苷酶重复使用7次后,它的α-L-鼠李糖苷酶和柚苷酶残余活力分别保持71%与80%。     

黑曲霉DB056分泌的柚苷酶分离纯化及酶学性质研究

对黑曲霉DB056发酵产生的柚苷酶进行分离纯化并研究其基本特性。粗酶液经硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析分离,所得柚苷酶的比活力为1716.41U/mg蛋白,纯化倍数为17.52倍。柚苷酶具有4个相对分子质量的组分,较适pH值范围4.0～5.0,最稳定的pH4.5;该酶适宜的作用温度范围45～55℃,温度50℃时酶活力最大,45℃和50℃条件下可以分别稳定4h和2h,55℃时柚苷酶1h失活50%;Ag+、Hg2+对柚苷酶具有强烈的抑制作用,其它金属离子对柚苷酶的影响随离子浓度的不同而不同,如0.1mmol/LCa2+、K+、Al3+、Mn2+、Cu2+可提高柚苷酶的活力,而5.0mmol/LFe2+、Al3+对柚苷酶显示抑制作用。     

黑曲霉液态发酵产柚苷酶的分离纯化及其性质研究

本文针对黑曲霉液态发酵所产柚苷酶的分离纯化工艺及其酶学性质进行研究。将黑曲霉液态发酵所产酶液,依次通过30%~70%硫酸铵盐析、膜透析和DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析后得到高纯度柚苷酶。经SDS-PAGE凝胶电泳仅得到一条清晰条带,分子量约为65.10 ku。纯化获得的柚苷酶比酶活可达6932.54 U/mg,纯化倍数和酶活回收率分别为13.82倍和13.30%,并且能有效水解柚皮苷。进一步研究发现,该酶的最适反应p H为4.5,最适作用温度为50℃,在20℃~50℃及p H 3.0~6.0范围内有良好的稳定性。在一定浓度范围内,K+、Ca2+和Na+对柚苷酶活性有促进作用,而Fe3+、SDS和EDTA-Na2对其活性有明显的抑制作用。本研究为深入理解柚苷酶分离纯化过程,明确其酶学性质,进一步探索柚苷酶应用于天然活性产物生物转化过程的相关机制提供了基础数据,具有非常重要的科学意义和潜在的应用价值。     

产柚苷酶黑曲霉SL2K发酵条件优化

该研究以黑曲霉（Aspergillus niger）SL2K为研究对象,对其产柚苷酶的液态发酵条件进行优化。 通过单因素试验对碳源、氮 源、诱导物、接种量、初始pH值和培养时间进行考查,在单因素基础上,选取麸皮粉添加量、蛋白胨添加量、接种量、初始pH值4个因素 进行4水平正交试验优化。 结果表明,优化后的产酶发酵条件为麸皮粉添加量3%,蛋白胨添加量5%,接种量8%,初始pH值为5.0,鼠李 糖0.08%、KH2PO4 1 g/L,KCl 0.5 g/L,MgSO·4 7H2O 0.5 g/L,FeSO4 0.01 g/L,装液量为100 mL/250 mL,摇床转速180 r/min,培养温度28 ℃, 培养时间96 h。 在此优化条件下,柚苷酶活力为233.89 U/mL,是优化前的2.13倍。     

黑曲霉TC-01产柚苷酶对柚皮苷酶解作用的研究

柚皮苷是一类主要的类黄酮物质,它是引起柚类和葡萄果实苦味的主要来源,去除柚皮苷会使果汁苦味减轻,而柚皮苷酶能在不影响柑橘果汁品质的前提下较好地去除苦味。但是由于不同来源的柚苷酶的结构不同,其催化特性也不尽相同,本文通过利用前期筛选的黑曲霉(Aspergillus.niger TC-01)产柚苷酶对柚皮苷酶解作用进行研究,实验采用高效液相色谱法测定柚皮苷、普鲁宁和柚皮素的三者之间含量变化,确定酶解最适温度、时间、pH及酶用量,并测定TC-01产柚苷酶的米氏常数以确定酶解反应的最佳条件。结果表明,TC-01产柚苷酶酶解最适温度为60℃、酶解最适时间为30-40min,最适pH4.0,酶最佳用量为24u/mL。米氏方程为Y=0.0018X-3.0×10-6,其中Km值为598.8ug/mL,Vmax=2.06g/(min.mL)。此研究结果为柚苷酶的应用提供了理论依据。     

黑曲霉DB056柚苷酶制剂对琯溪蜜柚果汁的脱苦效果

采用高效液相色谱法测定琯溪蜜柚果汁中柚皮苷及其降解产物的变化,研究黑曲霉DB056柚苷酶制剂脱苦琯溪蜜柚果汁的优化条件;并且在此优化条件下,使用该柚苷酶制剂对琯溪蜜柚鲜柚汁、浑浊浓缩柚汁和澄清浓缩柚汁进行脱苦。结果表明：黑曲霉DB056柚苷酶制剂催化琯溪蜜柚果汁中柚皮苷水解成普鲁宁和柚皮素;该柚苷酶制剂在40～55℃、果汁自然pH值条件下对琯溪蜜柚鲜柚汁进行脱苦,酶用量90U/mL、处理时间80min,柚皮苷脱除率达到89%;处理不同浓缩程度的浑浊浓缩柚汁,脱苦率约为80%左右。结果说明黑曲霉DB056柚苷酶制剂对琯溪蜜柚果汁具有良好的脱苦作用。     

黑曲霉HY-M27产果胶酶固态发酵条件的优化

以黑曲霉HY-M27为菌株,麸皮和豆粕为发酵主料,采用固态发酵法来生产果胶酶,通过单因素实验和响应曲面分析(RSM)实验确定了黑曲霉HY-M27的最佳培养条件。实验结果表明:诱导物橘皮粉的添加量为1.28g/10.5g干基、初始pH为5.15、接种量为2.7×106个/g干基,在此优化条件下,果胶酶活力可达到6839.86U/g。在果醋中加入果胶酶后,其澄清度有较大提高。     

黑曲霉固态发酵啤酒糟生产纤维素酶的研究

以啤酒糟为主要原料,采用黑曲霉(Aspergillus niger sp.)固态发酵生产纤维素酶,对培养基的组成和培养条件进行了优化。实验结果表明,适宜的培养基组分为:500 mL三角瓶中装入啤酒糟和棉粕20g,配料比8:2,料水比1:1.5,于30℃发酵66 h,滤纸酶活和羧甲基纤维素酶活分别达到(759.9±51.7)u/g和(14187.8±579.1)u/g(干物质);而在含氮量相等的条件下,试验所用的几种无机氮对酶活影响不显著;KH_2PO_4和CaCl_2在所研究的添加范围内对产酶影响也不显著。     

柚苷酶产生菌Penicillium sp.1523分批发酵动力学研究

分析柚苷酶产生菌青霉(Penicillium sp.)1523在5 L自控发酵罐中的分批发酵动力学。探讨了青霉1523在5 L罐分批发酵过程中菌体生长、柚苷酶合成及基质消耗的变化规律,结果表明:菌体生长呈典型S型曲线,酶的合成与菌体生长趋势呈现部分相关性,属于部分偶联型。基于这些过程曲线的变化规律,结合Logistic方程和Luedeking-Piret方程,建立了柚苷酶产生菌青霉1523分批发酵过程的动力学模型,并通过数学推导和非线性拟合获得了模型中各参数的最佳取值,最终确定了能够较好表征青霉1523分批发酵过程中菌体生长、产物柚苷酶合成以及基质消耗的动力学方程。     

局限曲霉产β-葡聚糖酶发酵特性的研究

研究了局限曲霉(Aspergillusrestrictus)QY-003产β-葡聚糖酶的条件。结果表明,最适碳源为大麦粉,氮源为硫酸铵;最适初始发酵pH为6.0;最适接种量为每瓶1ml孢子悬液(孢子悬液的浓度为2.5×107cell/ml);最适的发酵温度为32℃;500ml三角瓶发酵液的装量为80ml;发酵周期为72h,酶活达到1898.52u/ml,比初始的产酶水平提高了3倍。     

黑曲霉产壳聚糖发酵条件的研究

利用黑曲霉进行发酵生产壳聚糖.以工业化生产为目标,在前期研究中确定了培养基成分,此次实验分别探讨了不同接种量、pH、装液量对发酵效果的影响.在单因素的基础上,将接种量、pH、装液量进行正交试验.结果表明:最佳发酵条件接种量为5％、pH为5.5、装液量为23％,其菌体干重为21.61 g/L.     

重组黑曲霉产大豆异黄酮糖苷酶发酵条件的研究

通过单因素试验和正交试验,探讨野生型黑曲霉重组菌株产大豆异黄酮糖苷酶的最佳条件.结果表明:在培养基组分为麸皮4％、玉米芯2％、豆饼粉2％、NH4Cl2％、KH2PO40.1％,pH为6.0,接种量为10％,培养温度为28℃,72 h的条件下培养可获得较高的产酶活性,可达2.463×1010 kat/mL.