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1.
黄曲霉毒素B_1(AFB_1)具有极强的毒性和致癌性,严重危害人和动物健康。通过富集培养、初筛和复筛从土壤中筛选到能降解黄曲霉毒素的菌株,鉴定降解效率最高菌株并研究其降解特征。结果表明,筛选出多株能降解AFB_1菌株,其中菌株A12降解效率最高,通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因系统进化分析鉴定菌株A12为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis subsp. InaquosorumA12。研究发现枯草芽孢杆菌A12上清液、菌悬液、胞内液能分别降解87.6%、17.3%和10.8%的AFB_1,表明菌株A12分泌至胞外活性物质主导生物降解作用。菌株A12上清液降解AFB_1的最适反应温度为37℃,最适p H为7.0。将该菌接种到AFB_1污染的花生样品,能显著降低AFB_1的含量。为枯草芽孢杆菌A12应用于AFB_1的生物脱毒奠定了基础。 相似文献
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目的:在易被黄曲霉毒素B_1(AFB_1)污染的不同环境中,筛选能够降解AFB_1的菌株。方法:以香豆素为唯一碳源和能源进行AFB_1降解菌株的初筛,得到生长良好的菌株,分别与AFB_1标品(2.5μg/m L)共同作用进行复筛。对降解率最高的菌株通过形态以及16S r DNA序列分析,进行初步鉴定;并对胞外粗提液、菌细胞、胞内裂解物降解AFB_1进行研究。结果:从腐烂朽木中筛选出的菌株XY1降解AFB_1能力达71.91%。根据XY1菌株形态、16S r DNA序列同源性分析,初步确定菌株XY1为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)。胞外粗提液降解率为70.23%,菌细胞悬液降解率为8.26%,胞内裂解物的降解率为3.18%,表明菌株XY1的降解活性与胞外粗提液有关。结论:筛选到能高效降解AFB_1的克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)XY1,XY1降解毒素的活性物质主要存在于胞外粗提液。 相似文献
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《食品与发酵工业》2019,(22):246-252
该文建立了花生油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)快速准确的检测方法。利用交流电动作用对AFB_1进行加速和富集,然后在敏感元件微芯片上与固定的抗AFB_1单克隆抗体发生免疫反应从而导致电容规律性变化,构建AFB_1免疫传感器。结果表明,该方法可在30 s内完成加样、孵育和检测,实现对食用花生油中AFB_1的高灵敏度定量分析。该方法针对测试液中AFB_1浓度的线性范围为10~(-6)~10~(-2)μg/m L(R~2=0. 993 6);相对标准偏差(n=5)为6. 63%~15. 60%,最低检出限为2. 01×10-7μg/m L(3σ/S),定量限为2. 35×10~(-7)μg/m L(10σ/S),平均加标回收率为85. 20%~97. 70%,对AFB_2、AFM_1、AFG_1、OTA、DON、ZEN等可能共存毒素具有抗干扰性。 相似文献
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目的建立一种快速、灵敏的超高效液相色谱法,同时测定动物性食品中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1和M_2。方法甲醇-水(80∶20,V/V)提取粉碎或匀浆动物性食品中的黄曲霉毒素,取部分样液经过免疫亲和柱层析净化,经C_(18)色谱柱(3.0 mm×50 mm,1.7μm)分离,荧光检测器检测。保留时间定性,峰面积定量。结果5 min内完成分离,黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2、M_1和M_2检出限分别为0.038、0.010、0.062、0.010、0.110、0.016μg/kg。标准曲线线性范围分别为AFB_1:1.28~20.4μg/L;AFB_2:0.32~5.08μg/L;AFG_1:1.26~20.2μg/L;AFG2:0.31~5.00μg/L;AFM_1:1.25~20.0μg/L;AFM_2:1.25~20.0μg/L,相关性在0.999 7~0.999 9之间。不同浓度水平6种黄曲霉毒素平均加标回收率在73.2%~94.1%之间,精密度在0.2%~3.8%之间。结论该方法可同时、快速、高效、准确测定动物性食品中6种黄曲霉毒素的含量。 相似文献
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采用原位复合法制备出高效复合的碳量子点/银复合材料(CDs/Ag),研究了黄曲霉毒素B_1(AFB_1)对CDs/Ag荧光强度的影响。结果表明:AFB_1与CDs/Ag溶液相互作用后,体系的荧光强度增强,由此建立测定食用油中AFB_1的新方法。在p H 7.6的硼酸-硼砂缓冲溶液中,CDs/Ag和AFB_1在25℃反应30 min时,体系荧光强度(F)与AFB_1质量浓度(c)呈良好线性关系,线性范围为0.01~0.8μg/m L,线性方程为F=1 902c+309.3,R~2为0.998 4,检出限为7.4×10~(-3)μg/m L。采用该方法测定了食用油中AFB_1的含量,回收率为95%~106%。 相似文献
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目的建立酶联免疫法检测酱油中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的分析方法。方法酱油样本经纯乙腈(料液比=1:2,V:V)提取,再做1:9稀释,通过酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定样本中AFB_1。结果当加标浓度为2μg/kg和5μg/kg时,纯乙腈对酱油中AFB_1的提取回收率结果分别为121.3%和106.5%;方法检出限为1μg/kg。与国标方法检测结果的相对标准偏差小于10%。结论本方法准确、灵敏度高,可适用于酱油中AFB_1的检测。 相似文献
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目的:针对花生中强毒性污染物黄曲霉毒素B_1(AFB_1)建立了一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。方法:制备了AFB_1包被抗原,包被量为0.1μg/孔;抗体稀释64 000倍;选用0.1%脱脂乳粉为方法封闭液,0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)为样品稀释液;结果:在最优的试验条件下,建立的ic-ELISA对目标物AFB1的检测线性范围为0.0097~0.088μg/L(R2=0.999);灵敏度(IC50)和检出限(IC15)分别达到0.027μg/L和0.0066μg/L。板内变异系数(n=6)为0.29%~16.9%,板间变异系数(n=6)为0.22%~21.19%。在花生样品中AFB_1的检测灵敏度(IC50)为1.04μg/kg,回收率为96.67%~106.51%。结论 :本研究建立的ic-ELISA方法操作相对简便,检测灵敏度高、准确性好,可稳定地用于花生样品中AFB_1污染物的定量分析检测。 相似文献
9.
在印刷电极表面涂覆一层壳聚糖(Chit)膜,在膜上同时固定四羧基酞菁铁(Ⅲ)(FePc)和HRP酶标黄曲霉毒素B_1抗体(HRP-Ab-AFB_1)包被纳米金,制备了可用于小麦粉中黄曲霉素B_1(AFB_1)快速检测的新型安培免疫传感器(SPCI Chit/FePc/Au/HRP-Ab-AFB_1).FePc对H_2O_2的还原具有催化作用,可作为HRP酶与电极之间电子传递媒介体.当该传感器在含AFB_1样品的30℃溶液中温育8 min后,AFB_1与Ab-AFB_1的免疫结合导致HRP的活性中心与FePc之间的电子传递被部分阻碍,使HRP对H_2O_2电催化氧化电流I_0降低.△I_0与AFB_1浓度在1.0~200μg/L成线性关系,标准样品的组内和组间变异系数<3.5%;回收率97%~104%,检测限为0.3μg/L.该传感器检测AFB_1温育时间短,一步测定免分离,为小麦粉中的AFB_1现场分析提供了新技术. 相似文献
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研究微波结合酶解法组合技术对米糠多肽制备过程中黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1)的影响,为染毒米糠的脱毒提供新途径。在单因素试验的基础上,将料液比(X1)、微波时间(X2)、碱性蛋白酶酶解时间(X3)、酶解p H(X4)因素进行组合,应用Design Expert软件和Box-Behnken中心组合试验方法对AFB1降解条件进行了优化,测定米糠多肽AFB1的降解量。初始米糠中AFB1浓度为100.14μg/kg,运用响应面分析确定了其最佳工艺条件:微波功率750 W、微波时间9.56 min;碱性蛋白酶酶解温度50℃、酶解p H 10.74、酶解时间1.57 h、加酶量0.4%;料液比1:9.96,在此条件下,米糠中AFB1的降解率为98.68%,所制备的米糠多肽残留浓度为1.85μg/kg,符合国家标准(≤10μg/kg)。通过响应面优化微波结合酶法制备多肽工艺发挥协同作用,能有效降低米糠多肽AFB1含量满足国家标准限量要求。微波结合酶解处理条件温和,降解效率高、操作方便,可推广应用于受黄曲霉毒素的降解的粮油制备中。 相似文献
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对黄曲霉毒素B1(AFB1)降解菌株NMO-3 进行发酵培养基和培养条件优化,以期提高AFB1 降解率。方法:研究不同碳源、氮源、金属离子对AFB1 降解率的影响,最后选出最佳碳源、氮源和金属离子,通过正交回归试验,最后得出三者配方比。培养条件研究主要包括:初始pH 值、接种量、温度、种龄和降解时间等因素。结果:最终确定优化发酵培养基配方:果糖1.0%、胰蛋白胨1.0%、MgCl2 0.05mmol/L、其他发酵条件:起始pH 值为7.5、装液量25ml/300ml、接种量5%(V/V)、种子液培养时间为12h、控制降解温度为35℃、摇床转速140r/min、降解时间为72h。结论:经培养基成分和发酵参数的优化,AFB1 的降解率达到94.29%。 相似文献
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以重组漆酶lac3基因同源性最高的3KW7作为模板进行同源模建,采用分子对接预测漆酶与黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的结合模式,结果显示漆酶与AFB1可以相互作用,氢键是其关键作用力,漆酶可用于黄曲霉毒素的降解。随后,通过实际的降解实验进行验证,响应面优化获得AFB1降解率最优的条件为底物AFB1 1 μg、孵育时间15 h、孵育温度34 ℃、酶活力2 U,降解率可达91.08%。在此条件下利用超高效液相色谱-飞行时间串联质谱分析AFB1降解产物结构,发现4 个主要降解产物,根据其二级质谱信息和精确分子质量,推测出降解产物的分子式分别为C16H22O4、C14H16N2O2、C7H12N6O和C24H30O6。 相似文献
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该实验主要研究了嗜盐四联球菌(Tetraphylococcus halophila)对黄曲霉毒素B1(AFB1)的降解。研究嗜盐四联球菌不同接种量及不同浓度AFB1对降解效果的影响,检测嗜盐四联球菌上清液不同处理条件及金属离子对AFB1降解效果的影响,并利用扫描电镜(SEM)观察了嗜盐四联球菌在AFB1毒素环境中的微观形态。结果表明,嗜盐四联球菌接种量为1%,发酵72 h时对AFB1的降解率可达到70.11%,降解活性物质主要存在于上清液中,且具有一定的耐热性。Ca2+抑制上清液对AFB1的降解,AFB1降解率降至40.32%;Zn2+促进上清液对AFB1的降解,AFB1降解率提高至75.52%,扫描电镜结果表明,与AFB1共培养72 h后,嗜盐四联球菌细胞壁褶皱转好。 相似文献
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该研究采用香豆素筛选模型,从酒醅、大曲、榨菜、酸豆角等样品中分离筛选降解黄曲霉素B1(AFB1)菌株,通过形态学观察及分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定,并以黄曲霉毒素B1降解率为评价指标,采用单因素及正交试验对筛选菌株的发酵条件进行优化。结果表明,共初筛出23株可利用香豆素菌株;采用高效液相色谱(HPLC)法复筛出1株AFB1高效降解菌,其降解率最高,为86.22%,菌株编号为HB022。菌株HB022被鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis),其最优发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH 7.2、接种量5%、发酵时间72 h。在此优化条件下,AFB1的降解率为91.13%。 相似文献
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作者从花生土壤和花生粕中筛选能去除黄曲霉毒素B1(AFB1)的菌。利用营养特异性方法进行去除AFB1菌株的初筛,之后将初筛的7株菌的细胞和发酵上清液作用于质量浓度为200μg/L的AFB1。结果表明:筛选得到的TRS-3菌株,其活细胞和死细胞对AFB1的去除率分别达到48.26%和53.56%,其发酵上清液降解AFB1的能力达到78.55%,均明显高于其它菌株。通过对TRS-3菌株的鉴定,最终确定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。 相似文献
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目的 筛选、鉴定一株高效降解黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1, AFB1)菌株,并对其降解特性和降解酶基因进行分析。方法 通过形态学观察、生理生化鉴定及同源性分析,对具有高效降解AFB1能力的菌株进行鉴定。通过菌株发酵液、上清液、细胞悬液、胞内提取物对AFB1降解能力的不同确定降解活性部位,使用冷冻干燥方法探索其粗酶制剂对AFB1降解效果。结合全基因组分析进行降解酶基因的挖掘。结果 通过鉴定,菌株HNGD-B3为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株上清液对AFB1降解效果最好,72 h降解率为88.24%±2.02%。上清液蛋白酶K处理后,对AFB1降解效果大幅下降,热处理后上清液降解效果基本无变化,判断其降解活性成分为胞外酶。粗酶制剂可显著提高AFB1降解效率,结合全基因组分析与Blastp比对筛选得到3条具有AFB1降解潜力的候选基因序列。结论 菌株HNGD-B3对AFB1具有良好降解效果,在生物降解真菌毒素具有较大潜力。 相似文献
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目的分析鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)的降解能力,阐述LGG对由AFB_1引起的肝损伤的保护作用。方法利用LGG培养液、LGG上清液组、LGG菌体、热处理后上清液和热处理后LGG菌体处理AFB_1,利用高效液相色谱法测定AFB_1的残留量,分析LGG对AFB的降解能力。利用低、中和高剂量的LGG菌液灌胃由AFB_1引起肝损伤的大鼠,并以空白和阳性作为对照组,测定大鼠的血清肝功能及肝组织抗氧化指标,分析LGG对肝损伤的保护作用。结果 AFB_1降解实验表明LGG菌液对AFB_1具有显著的降解作用(P0.05),36 h能够降解(92.01±2.02)%的AFB_1。降解作用是由菌体和LGG的代谢产物共同作用的结果。大鼠血清肝功能及肝组织抗氧化指标结果表明低、中和高剂量的LGG灌胃给药均能显著改善因AFB_1引起的大鼠肝功能和肝组织抗氧化指标异常(P0.05)。结论 LGG对AFB_1具有良好的降解作用,且能够有效抑制因AFB_1引起的肝损伤。 相似文献
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施氏假单胞菌F4能高效降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)。研究了F4的AFB1降解活性、降解动力学以及蛋白酶K和SDS对其降解性能的影响。F4细胞悬液与毒素共培养72 h后降解率达80.03%;蛋白酶K处理对降解率没有影响,SDS处理的细胞悬液基本丧失了降解活性。不同时间点的降解液上清液仍能有效降解残留AFB1,其中以60 h的降解液上清液活性较好,与残留AFB1继续作用48 h后降解率达84.30%;而经蛋白酶K处理后降解率仅为45.42%。低浓度AFB1诱导对菌体的降解活性没有影响。上述结果提示,F4通过胞内酶作用降解AFB1。高效液相色谱对产物分析表明,F4可将AFB1酶解为至少2种产物。 相似文献
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目的:研究挤压工艺参数对黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)降解率的影响,为建立粮食产品中AFB1的挤压降解技术提供依据。方法:采用双螺杆挤压机挤压膨化污染AFB1的糙米,分析挤压温度、物料水分、喂料速率和螺杆转速对糙米中AFB1降解率的影响,并通过优化工艺得到最佳工艺条件。结果:单因素试验机筒温度170 ℃时,AFB1降解率最高为37.1%;物料水分24%时,AFB1降解率最高为37.2%;喂料速率30 g/min时,AFB1降解率最高为37.8%;螺杆转速200 r/min时,AFB1降解率最高为39.2%;挤压降解糙米中AFB1正交试验的最佳工艺条件为机筒温度180 ℃、物料水分24%、喂料速率30 g/min、螺杆转速160 r/min,其降解率为48.6%。挤压过程中机筒温度极显著影响AFB1降解,物料水分显著影响AFB1降解,喂料速率和螺杆转速对AFB1降解的影响不显著。结论:挤压膨化加工能有效降解糙米中的AFB1。 相似文献