直接竞争酶联免疫吸附法用于糖浆类保健食品中西地那非检测的研究

建立了一种在保健食品中检测西地那非的直接竞争酶联免疫吸附分析法(dc ELISA)。经优化最佳反应条件为:包被浓度为100ng/m L,酶标抗体稀释倍数为70倍,标准品稀释液为p H=9,0.01mol/L PBST溶液,抗体竞争反应50min。本方法的半抑制浓度IC50为1.47ng/m L,线性范围(IC20~IC80)为0.12~17.65ng/m L,检测限IC15为0.0845ng/m L,批内批间变异系数均小于20%,保健食品补肾糖浆的添加回收率在86.0%~111.0%之间,满足实际样品的快速筛检需求。     

基于单链抗体的呋喃唑酮酶联免疫检测方法的建立

目的:为快速检测呋喃唑酮(furazolidone,FZD)在动物性食品中的残留量。方法:基于单链抗体的间接竞争酶联免疫吸附实验法建立了FZD检测方法。结果:最佳抗原工作质量浓度为2μg/m L,最佳抗体稀释倍数为1∶500,一抗最佳反应时间为60 min,二抗最佳反应时间为45 min,四甲基联苯胺最佳显色时间为20 min。FZD检测试剂盒在10~100 ng/m L范围具有较好的线性关系,IC50值为13.01 ng/m L,检出限为1.28 ng/m L,回收率为73.38%~84.52%。结论:与抗FZD单克隆抗体相比,所建立的检测试剂盒检测范围更广,且具有很高的灵敏度以及很好的特异性和稳定性。     

直接竞争化学发光酶免疫方法检测克伦特罗残留

建立了克伦特罗的直接竞争化学发光酶免疫检测方法,并考察了方法的特异性、灵敏度。最佳反应条件为:包被抗原浓度为25 ng/mL;酶标抗体稀释80 000倍;0.02 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)(pH 7.0),竞争反应时间30 min。方法的IC50为0.09 ng/mL;检出限为0.01 ng/mL;线性范围0.02⁷.59 ng/mL;对尿样、猪肉、肝脏以及饲料样品检测的平均回收率分别为94.5%7.59 ng/mL;对尿样、猪肉、肝脏以及饲料样品检测的平均回收率分别为94.5%⁹5.3%、90.7%95.3%、90.7%⁹4.1%,批内和批间相对标准偏差均小于15%。该方法与HPLC方法的相关性良好,说明其具有较高的灵敏度和特异性,可用于实际样品的检测。     

白酒中邻苯二甲酸二乙酯的化学发光酶联免疫分析方法

以邻苯二甲酸二乙酯(diethyl phthalate,DEP)为研究目标,以4-氨基邻苯二甲酸二乙酯为半抗原,通过重氮法偶联载体蛋白并免疫动物,制备针对DEP的特异性兔多克隆抗体。通过棋盘滴定法和单因素实验确定最佳的实验参数,即包被抗原浓度为50 ng/m L,4℃环境下包被12 h;抗体用T液稀释;药物缓冲液选用p H 5.4、0.005 mol/L的PBS缓冲液;酶标二抗用P液稀释,稀释度为1/3000;反应时间是:一抗∶二抗=30 min:40 min。基于此建立了间接竞争化学发光酶联免疫法检测DEP。该方法对DEP的最低检测限(LOD)为3.09 ng/m L,检测范围(IC20~IC80)为5.93~42.03 ng/m L,半抑制浓度(IC50)值为16.57 ng/m L,与14种结构类似物及功能类似物交叉反应均远低于0.5%,通过对白酒样品添加回收率的测定,证明了该方法的准确性,适用于白酒中DEP的快速检测。     

HPLC-MS/MS法测定大鼠血浆中酸枣仁皂苷A含量及其药动学研究

建立高效液相色谱-质谱串联(HPLC-MS/MS)法检测大鼠血浆中酸枣仁皂苷A的含量,并应用于药动学研究。大鼠静注(4 mg/kg)或灌胃(20 mg/kg)给药,不同时间取血,血浆样品经处理后,采用HPLC-MS/MS法测定酸枣仁皂苷A含量,色谱柱为Waters YMCTM ODS-AQ S-5 120A(2.0×100 mm)分析柱,以电喷雾离子化串联质谱(ESI)及多反应监测扫描模式(MRM)进行检测,流动相为甲醇-水(0.1%甲酸)=50∶50,流速为0.3 m L/min,柱温为30℃,根据测定结果求算药物的药动学参数。酸枣仁皂苷A在40 ng/m L~4 000 ng/m L的浓度范围内线性关系良好(r2=0.999 1),各浓度水平的精密度及稳定性的RSD均小于15%,提取回收率均大于85%。大鼠注射给药后主要药动学参数分别为Ke0.28/h,t1/22.55 h,AUC0→t2 839.89 h·ng/m L,AUC0→∞3 201.51 h·ng/m L,灌胃给药后主要药动学参数分别为Ke0.51/h,t1/21.35 h,AUC0→t206.02 h·ng/m L,AUC0→∞211.13 h·ng/m L。经计算,酸枣仁皂苷A在大鼠体内的生物利用度为1.32%。本试验所建立的检测方法快速简便、精密度好、灵敏度高及稳定性好,适用于酸枣仁皂苷A在大鼠体内血药浓度测定及药代动力学的研究。     

新型高灵敏赭曲霉毒素A间接竞争化学发光免疫分析法

建立了一种测定赭曲霉毒素A的新型高灵敏化学发光间接竞争酶联免疫分析方法。以酶标赭曲霉毒素A二抗上的辣根过氧化物酶催化过氧化脲氧化3-(4-羟苯基)丙酸,生成具有荧光的3-(4-羟苯基)丙酸二聚体。并利用乙腈介质中双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯和过氧化脲在增强剂咪唑的作用下反应产生强化学发光,以发光强度确定待检物中赭曲霉毒素A含量。结果表明,在最佳条件下IC50为0. 55 ng/m L,在0. 05～6. 08 ng/m L范围内有良好的线性关系,最低检出限为0. 01 ng/m L。样品加标回收实验显示葡萄干和葡萄汁样品的平均回收率分别为84. 55%～91. 36%和73. 32%～87. 64%,批内与批间变异系数均小于10%,精密度良好。该新型化学发光方法检测赭曲霉毒素A时发光强度更大、发光时间更长,可用于食品中赭曲霉毒素A的高灵敏度痕量检测。     

胶体金免疫层析法快速检测赭曲霉毒素A在谷物及饲料中的研究

正应用胶体金免疫层析技术,建立一种快速检测谷物和饲料中赭曲霉毒素A的方法,其中包括胶体金的制备、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。测试结果表明赭曲霉毒素A快速检测试纸条对谷物类样品检测限为5 ng/m L,对饲料样品检测限为100ng/m L,检测时间为10 min,试纸条特异性好,假阳性率小于5%,假阴性率为0。该法使用简单方便,非常适合现场快速检测谷物和饲料中的赭曲霉毒     

直接竞争化学发光酶免疫法检测谷物中的伏马菌素B1

建立1种检测谷物中伏马菌素B1的直接竞争化学发光酶免疫方法。该方法的最佳检测条件为:抗原包被质量浓度0.4μg/mL,酶标抗体3000倍稀释,竞争反应时间20min;检测限为0.13ng/mL,半抑制浓度(IC50)为1.43ng/mL,批内变异系数2.4%,批间变异系数9.2%,以玉米为样品的加标回收率达到100.2%～115.4%。谷物盲样的检测结果显示,该方法与酶联免疫吸附检测试剂盒、高效液相色谱检测结果的相关系数分别为0.9793、0.9851,三者之间无显著性差异,所建立的直接竞争化学发光酶免疫方法可用于谷物样品中伏马菌素B1的大规模快速筛查。     

响应面试验优化动物源性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测的衍生条件

利用响应面法优化酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测呋喃西林代谢物前处理的衍生条件。根据Box-Behnken试验设计原理,在单因素试验基础上,以呋喃西林代谢物回收率为响应值,应用响应面分析法研究衍生剂体积、衍生剂浓度、衍生温度和衍生时间各因素间的交互作用及对呋喃西林代谢物回收率的影响。最终确定ELISA方法线性检测范围为0.13~10.51 ng/m L,IC50为1.17 ng/m L;在选取样品质量为2 g时,最佳衍生条件为衍生剂体积415μL、衍生剂浓度15 mmol/L、衍生温度57℃、衍生时间50 min,实际回收率为98.57%~103.76%;衍生产物与呋喃西林原药交叉反应率为7.63%,与其他结构类似物、功能类似物及衍生剂交叉反应率均小于0.17%;加标回收率为93.45%~103.21%,批内变异系数为1.86%~6.15%,批间变异系数为3.88%~8.84%。该衍生条件高效,检测方法准确可靠,适用于动物源性食品中呋喃西林代谢物的快速筛查。     

用于检测牛奶中雌二醇的酶热传感技术研究

目的建立一种用于检测牛奶中雌二醇的酶热传感技术。方法羧基化雌二醇经1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(EDC)与β-内酰胺酶偶联。酶热传感器中装SPG酶柱,通过ELISA原理使游离雌二醇与结合雌二醇竞争结合雌二醇抗体,从而检测基质中的雌二醇浓度。优化酶热传感检测体系中的反应底物、系统流速、抗原抗体稀释比例等实验因素。结果磷酸盐缓冲液(PBS)基质中测定IC50值为10.2 ng/m L,线性检测范围:5.1~19.4 ng/m L,最低检测限2.8 ng/m L,变异系数为3.4%,与多种雌激素类结构类似物之间均无交叉反应,特异性良好。牛奶样品中测定IC50值:0.45 ng/m L,线性检测范围:0.24~0.79 ng/m L,最低检测限0.12ng/m L。结论酶热传感技术可以快速检测牛奶中的雌二醇残留,操作便捷、样品前处理简单,是一种高效、经济的适用于食品安全工作现场检测的方法。     

Specific Monoclonal Antibody-Based Enzyme Immunoassay for Sensitive and Reliable Detection of <Emphasis Type="Italic">Alternaria</Emphasis> Mycotoxin Iso-Tenuazonic Acid in Food Products

In this paper, we report the development of a sensitive and specific monoclonal antibody-based immunodiagnostic method for the detection of iso-tenuazonic acid (ITeA), an Alternaria mycotoxin, in food samples. The ITeA was derivatized with hydrazine hydrate to produce the antigen (E)-3-(1-hydrazonoethyl)-4-hydroxy-5-isobutyl-1H-pyrrol-2(5H)-one (ITeAH) which was further reacted with glyoxalic acid to generate the hapten (E)-2-((Z)-(1-(4-hydroxy-5-isobutyl-2-oxo-2,5-dihydro-1H-pyrrol-3-yl)ethylidene) (ITeAHGA) which was used as an immunogen after conjugation to bovine serum albumin (BSA). A highly specific monoclonal antibody selectively binding to ITeAH was generated via the hybridoma technique and subsequently used to construct a heterologous indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (icELISA) using ITeAH as the competitive antigen for the detection of ITeA with a limit of detection (LOD) of 0.5 ng/mL. Under the optimum conditions, the developed icELISA is highly sensitive (IC₅₀ = 7.8 ng/mL) with recovery rates ranged from 82.3 to 109.8% for spiked food samples. The comparative analysis of results revealed a good correlation between the icELISA and the standard HPLC-MS/MS method, confirming the suitability of the developed icELISA for screening and detection of mycotoxin ITeA in food samples.     

基于金纳米颗粒信号放大ELISA检测食品中恩诺沙星

以金纳米颗粒（gold nanoparticles,AuNPs）为信号放大载体,利用辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP）标记的二抗为信号探针,建立一种基于AuNPs的信号放大酶联免疫检测方法（AuNPs signal amplification enzyme-linked immunosorbent assay,AuNPs-HRP-IgG ic-ELISA）,检测食品中恩诺沙星（enrofloxacin,ENR）。该方法对ENR的检测限（IC15）为5×10－4?ng/mL,半数抑制浓度（IC50）为0.24?ng/mL,检测范围为0.16～500?ng/mL,与建立的传统ELISA方法（IC50=8.76?ng/mL）相比,显著提高了检测灵敏度,并且该方法与环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星交叉反应率均小于0.1%,具有良好的特异性。该AuNPs-HRP-IgG?ic-ELISA方法的实用性得到了样品添加回收实验和商业化ELISA检测试剂盒的验证,其在牛奶样品中的加标回收率可达80.52%～102.66%,适用于实际牛奶样本中ENR的快速灵敏检测,也为建立其他食品危害物质的精准检测技术开发提供参考。     

进口葡萄酒中赭曲霉毒素A的含量分析

为了解进口葡萄酒中赭曲霉毒素A的含量和污染状况,本研究建立了无需净化、浓缩,直接进样,采用液相色谱-串联质谱联用法(LC-MS/MS)测定葡萄酒中赭曲霉毒素A的方法。赭曲霉毒素A空白基质标准溶液在1.0～20.0 ng/mL浓度范围内线性良好,方法检测限达到0.05 ng/mL,添加浓度为2.0 ng/mL质控样品的回收率为98.7%～113.2%,精密度<5.7%。应用该方法测定了84个进口葡萄酒样品中赭曲霉毒素A的含量,结果表明,赭曲霉毒素的检出率为100%,含量为0.14～1.10 ng/mL,平均含量为0.32 ng/mL。     

时间分辨荧光免疫层析法定量检测谷物中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮残留

建立了一种快速定量检测谷物产品中黄曲霉毒素(Aflatoxin B1,AFB1)和玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)的时间分辨荧光免疫层析方法。采用时间分辨荧光微球标记黄曲霉毒素B1抗体和玉米赤霉烯酮抗体,研究了如p H值、标记抗体浓度、荧光探针使用量、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等因素对时间分辨荧光免疫层析方法灵敏度的影响。结果表明:AFB1的检出限为0.80 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为0.81~5.67 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为2.15 ng/mL。在ZEN检出限为4.58 ng/mL,线性范围(IC20~IC80)为4.76~85.60 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为20.19 ng/mL。方法特异性良好,与T-2毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、伏马毒素、赭曲霉毒素A多种真菌毒素交叉率小于10%。通过选择玉米、麦麸、大豆、小麦进行添加回收试验,AFB1的添加回收率在97.1%~108.7%之间,ZEN的添加回收率在92.8%~109.1%之间,相对标准偏差小于15%。选取经HPLC-MS/MS检测过的FAPAS标准质控样本进行测试,检测结果与其结果一致。在实际产品检测对比中,与市售胶体金免疫层析卡,ELISA试剂盒的检测结果基本一致。本方法操作简单快速、可定量,检测过程约25 min,适用于谷物样品中黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮的现场快速筛。     

高效液相色谱-串联质谱法测定猪肉及猪肉制品中牛磺酸含量

建立猪肉及猪肉制品中牛磺酸含量的高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)检测方法.样品经水超声提取后,经乙腈沉淀蛋白,正己烷除脂肪,采用HPLC-MS/MS法定量测定.结果 表明:在1～...     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定小麦粉中硫脲、曲酸、噻苯咪唑、噻二唑、四环素

建立超高效液相色谱-串联质谱法同时测定小麦粉中硫脲、曲酸、噻苯咪唑、噻二唑、四环素5 种非法添加物的快速定量检测方法。样品经80%乙醇溶液-乙腈（1∶1,V/V）提取、离心、氮吹浓缩后,采用多反应监测模式进行定性、定量分析。结果表明：本方法中硫脲、曲酸、四环素在100～5 000 ng/mL、噻苯咪唑在1～50 ng/mL、噻二唑在1～50 μg/mL范围内线性关系良好,相关系数大于0.999。硫脲、曲酸、四环素检出限为25 μg/kg,定量限为50 μg/kg;噻苯咪唑检出限为0.5 μg/kg,定量限为1 μg/kg;噻二唑检出限为0.5 mg/kg,定量限为1 mg/kg。基质添加回收率范围在88.6%～102.2%之间,相对标准偏差在0.7%～5.6%之间（n=6）。该方法前处理简单、快速,可用于小麦粉中硫脲、曲酸、噻苯咪唑、噻二唑、四环素5 种非法添加物的快速测定。     

Development of Sensitive,Rapid, and Effective Immunoassays for the Detection of Vitamin B<Subscript>12</Subscript> in Fortified Food and Nutritional Supplements

An indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (Ic-ELISA) method and lateral-flow immunochromatographic (ICA) strip assay method were developed for the detection of vitamin B₁₂ (four major forms, cyanocobalamin, hydroxocobalamin, adenosylcobalamin, and methylcobalamin) in different food products. The limit of detection and 50 % inhibitory concentration for the Ic-ELISA method were 0.065 and 0.43 ng/mL, respectively. The visual limit of detection and cutoff value for the lateral-flow ICA strip assay method were 1 and 4 ng/mL, respectively. For the detection of fortified food and nutritional supplements in vitamin tablets, energy drink, and infant milk powder samples, the recovery rates were in the range of 81 to 122 % for the Ic-ELISA method, and even the lowest content in infant milk powder was identified by the lateral-flow ICA strip assay. Therefore, both of these methods are sensitive, rapid, and effective and are suitable for the on-site detection and rapid screening of mass samples.     

化学发光酶联免疫法检测苏丹红Ⅰ

为检测食品中苏丹红Ⅰ残留,建立间接竞争化学发光酶联免疫分析（chemi luminescent enzymeimmunoassay,CLEIA）法。通过优化包被抗原中本抗原与载体物质的量比、包被抗原质量浓度、抗体稀释比例,建立竞争抑制曲线。线性范围为0.156～5 ng/mL,最低检测限为0.078 9 ng/mL,IC50为0.679 ng/mL。CLEIA回收率为75.08%～112.18%,变异系数为8.89%～15.61%;通过与酶联免疫吸附（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法进行比较,在相同抗原抗体质量浓度条件下,CLEIA法测定的IC50较ELISA方法降低30%,具有较高的灵敏度。     

Development of a Solid-Phase Extraction–Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for the Determination of 17β-19-Nortestosterone Levels in Antifatigue Functional Foods

ABSTRACT:  17β-19-nortestosterone (17β-NT) has been illegally used in antifatigue functional foods to promote muscle growth and improve endurance. A rapid and sensitive solid-phase extraction–enzyme-linked immunosorbent assay (SPE-ELISA) method was developed and successfully applied to analyze the levels of 17β-NT in antifatigue functional foods. A polyclonal antibody against 17β-NT was produced from rabbits immunized with the 17β-NT-BSA conjugate, and a competitive direct enzyme-linked immunosorbent assay was developed for the rapid detection of 17β-NT. The concentration causing 50% inhibition ( IC ₅₀) and the limit of detection (LOD) were found to be 0.08 and 0.0055 ng/mL, respectively; this was better than methods previously reported that had a LOD of 2.4 ng/mL. C₁₈ cartridges were investigated for use in removing the effects of matrix in foods, and the sample purification protocol was optimized. Using the developed SPE-ELISA method, recoveries of functional food samples were obtained in the range of 71% to 91.5%. Moreover, 2 kinds of antifatigue functional foods were analyzed using the established ELISA and HPLC methods. The correlation coefficient of the results obtained using the 2 methods was greater than 0.98. Thus, the preliminary evaluation of the SPE-ELISA method proved that it is a specific, sensitive, and precise tool that can be used for the practical detection of 17β-NT in various antifatigue functional food samples.     

基于MnO2纳米片类氧化酶特性的有机磷农药荧光分析方法建立

利用MnO2纳米片类氧化酶特性并结合有机磷农药的酶抑制原理,构建一种快速、简便、高灵敏有机磷农药荧光分析方法。通过测定反应体系荧光强度前后的变化,可以检测样品中有机磷农药的含量。通过优化酶浓度、底物浓度和反应时间,发现乙酰胆碱酯酶浓度为9.375 U/L,底物浓度为10 mmol/L,反应时间为11 min时,该荧光分析方法检测性能最佳,对氧磷的动态检测范围为1.56～200 ng/mL,检出限达到0.5 ng/mL（RSN=3）,运用该方法测定标准添加的自来水、卷心菜、燕麦样品的回收率在83.4%～105.9%之间,表明该方法具有很高的灵敏度与准确性,为快速高灵敏测定有机磷农药提供一种新的可能。