低档绿茶多糖的酶法辅助提取及抗氧化活性研究

以皖西低档绿茶为原料,通过酶法辅助浸提茶多糖,然后对浸提液进行醇沉、真空干燥得粗多糖,比较三种不同方法对粗多糖脱蛋白效果,并研究茶多糖的体外抗氧化活性。结果表明:酶法辅助浸提的最优条件:料液比1∶30(g/m L)、酶解温度45℃、酶解时间120min、纤维素酶添加量12mg/g,果胶酶添加量12mg/g、浸提1次,茶多糖得率达到5.414%。三氯乙酸法、sevage法、木瓜蛋白酶法对粗多糖中蛋白的最大脱除率分别为84.14%、69.45%、74.34%,多糖损失率分别为18.56%、24.01%、12.34%。相对而言,木瓜蛋白酶法条件温和,更适合茶多糖脱蛋白。另外,茶多糖具有较强的还原能力以及对羟基自由基的清除能力,对亚硝基具有一定的清除作用。     

冬枣多糖脱蛋白工艺研究

以蛋白质脱除率和多糖保留率为指标,在酶法单因素试验的基础上,采用正交试验确定了酶法脱蛋白最佳工艺条件。比较了三氯乙酸法(TCA法)、Sevage法、酶法、酶-TCA法和酶-Sevage法脱蛋白效果,并确定了最佳脱蛋白方法为酶-TCA法,即木瓜蛋白酶用量为450 U/m L,酶解温度为40℃,酶解时间为1.5 h,三氯乙酸浓度为9%,此时冬枣多糖蛋白质脱除率为91.19%,多糖保留率为89.99%。     

浒苔多糖脱蛋白工艺的考察

研究浒苔多糖的脱蛋白方法与工艺。以蛋白脱除率和多糖损失率作为为指标比较三氯乙酸(TCA)法、Sevag法、酶法及酶-Sevag法脱蛋白的效果。结果表明:酶-Sevag法脱蛋白效果较好,其最佳工艺条件为:酶用量3%,酶解时间3 h,酶解温度45℃,pH 5.0,Sevag法脱蛋白次数2次,在此条件下,蛋白质脱除率和多糖损失率分别为89.73%和27.46%。酶-Sevag法是去除浒苔粗多糖中蛋白质较理想的方法,该优化工艺可用于浒苔粗多糖的脱蛋白。     

酶法提取乌贼墨多糖工艺探讨

采用木瓜蛋白酶水解方法提取乌贼墨多糖,并对其脱蛋白工艺进行了研究。试验结果表明,最佳的酶处理条件为:加酶量12800U/g,水解温度55～65℃范围内,水解时间90min以上以及pH为7。多糖含量为90.36%,多糖得率为0.95%,蛋白脱除率为90.52%。同时比较了三氯乙酸法、Sevag法、酶法与Sevag法结合对乌贼墨多糖的脱蛋白效果。结果表明,酶法与Sevag法结合可以简单高效地去除乌贼墨多糖中的蛋白质,而又不会造成多糖过多损失,此时多糖的损失率为12.45%。     

罗耳阿太菌胞外多糖蛋白的脱除及其体外抗氧化活性

比较罗耳阿太菌胞外多糖(Athelia rolfsii exopolysaccharides,AEPS)提取过程中蛋白脱除方法,并研究其体外抗氧化活性。以除蛋白率和多糖损失率为指标,对比Sevag法、TCA法、等电点法脱蛋白效果,确定最优脱除蛋白方法。以AEPS对Fe~(2+)的螯合能力和还原力,以及对DPPH、羟基自由基的清除能力4个抗氧化指标评估AEPS体外抗氧化活性。结果表明,AEPS最佳除蛋白方法为等电点法。调节发酵液p H为3.5,酸沉时间2 h,蛋白清除率为91.3%,多糖损失率仅为7.2%。与清除·OH相比,AEPS对DPPH具有较强清除效果,且浓度2.5 mg/m L时,对Fe~(2+)的螯合率为74.4%。     

蛹虫草基质多糖的脱蛋白方法研究

以蛋白脱除率、多糖损失率和清除DPPH自由基的能力为指标,比较Sevag法,三氯乙酸(TCA)法,木瓜蛋白酶-Sevag法以及木瓜蛋白酶-TCA法脱除从蛹虫草的废弃固体培养基中提取虫草基质粗多糖蛋白的效果。结果表明:木瓜蛋白酶-TCA法脱蛋白效果最好。粗多糖经木瓜蛋白酶处理过后,TCA法脱除蛋白一次时,蛋白脱除率为92.90%,多糖损失率为9.82%,清除DPPH自由基能力为55.20%。     

猴头菇多糖脱蛋白方法的比较研究

以综合考虑蛋白质清除率和多糖保留率的综合指标为评价指标,比较Sevage法、酶法、酶-Sevage结合法脱除猴头菇多糖蛋白质的效果。结果显示,用Sevage法清除一次时除蛋白效果最好,此时蛋白质清除率为56.36%,多糖保留率为84.28%,综合指标为70.32%。酶法在最佳酶解条件即酶添加量0.3%,酶解温度50℃,酶解时间120 min下蛋白质清除率为54.06%,多糖保留率为84.71%,综合指标为69.39%。酶-Sevage结合法脱蛋白效果最好,用最佳酶解条件酶解之后用Sevage法脱除蛋白一次,此时蛋白质的清除率为83.14%,多糖的保留率为81.71%,综合评价指标为82.43%。此法切实可行,可用于猴头菇多糖脱蛋白。     

米糠多糖的脱蛋白研究

采用Sevag法、三氯乙酸法和酶法对米糠多糖进行脱蛋白研究.结果表明,酶法脱除蛋白的效果最好,Sevag法的多糖损失较小,结合酶法和Serag法脱蛋白可大大提高蛋白脱除率,具体操作条件为:0.0055mg/mL木瓜蛋白酶、pH6.0、60℃水浴,再加入总体积为1/2的氯仿-正丁醇(2:1)溶液进行脱蛋白,重复操作4次,此时蛋白脱除率为71.23%.多糖损失率为17.38%.     

水飞蓟粗多糖脱蛋白方法的比较

以蛋白脱除率、多糖损失率和糖液清除DPPH能力为指标比较Sevag法、三氯乙酸法和盐酸法的水飞蓟多糖脱蛋白效果。结果表明,盐酸法效果最好,三氯乙酸法次之,Sevag法最差。盐酸法调糖液pH值为2脱蛋白时,蛋白脱除率为88.9%、多糖损失率为14.8%、糖液清除DPPH的能力为45.6%。     

仙人掌多糖提取过程中三种脱蛋白方法的比较研究

用水提取的仙人掌多糖常含有蛋白质,实验以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标,选用了3种方法: Sevag法、三氯乙酸法和酶法对仙人掌多糖提取物进行脱蛋白处理.实验结果表明:酶法、三氯乙酸法和Sevag 法的脱蛋白率分别为89.6%、56.2%和45.5%,多糖损失率分别为7.2%、9.5%和13.6%.经比较认为:酶提取法是替代常规方法的一种有效方法.     

响应面法优化芡茎多糖脱蛋白工艺

目的:研究芡茎多糖脱蛋白最优工艺。方法:以芡茎多糖蛋白脱除率和多糖损失率为指标,考察沙维积(Sevag)法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶-TCA法4种方法对芡茎多糖脱蛋白的效果,从而筛选得木瓜蛋白酶-TCA法为较优方法。利用响应面法对木瓜蛋白酶法脱蛋白工艺进行优化,并将最优工艺与TCA法结合处理1次。结果:木瓜蛋白酶-TCA法最优工艺为加酶量580 U·mL-1,酶解温度30 ℃,酶解时间2.0 h,pH7.0,TCA体积分数8.0%,在此条件下,芡茎多糖蛋白脱除率为85.1%,多糖损失率为16.3%。结论:木瓜蛋白酶-TCA法是一种较优的芡茎多糖脱蛋白方法。     

啤酒花多糖的提取及脱蛋白工艺研究

以超临界液态二氧化碳萃取后的啤酒花残渣为原料,采用正交实验和单因素实验,确定了啤酒花多糖的热水微波辅助萃取的最佳工艺条件:提取时间2h,料液比1∶10,提取温度90℃,微波功率750W作用时间12min;此条件下多糖提取率为2.76%。对得到的粗多糖,以蛋白脱除率和多糖保留率为指标,在比较Sevag法,盐酸-正丁醇法,三氯乙酸-正丁醇法,木瓜/菠萝蛋白酶法对粗多糖中蛋白质的脱除效果的基础上,考察了酶法和化学法联用脱蛋白工艺,并最终确定菠萝蛋白酶-三氯乙酸-正丁醇的脱蛋白效果最好,最佳条件为温度45℃,酶解时间0.5h,酶添加量22.5U/mL,pH5.5,三氯乙酸-正丁醇法除蛋白1次,蛋白脱除率和多糖保留率分别为86.77%和77.37%;而木瓜蛋白酶-盐酸-正丁醇的脱蛋白工艺在有效脱除蛋白质的同时,多糖损失最少,最佳条件为温度55℃,酶解时间0.5h,酶添加量36U/mL,pH5.5,盐酸-正丁醇法除蛋白1次,蛋白脱除率和多糖保留率分别为77.37%和84.43%。     

虾夷扇贝多糖提取及纯化方法的优化

以青岛虾夷扇贝为原料,利用单因素试验以及正交试验,对水提、酶提醇沉法结合超声波辅助提取扇贝柱多糖工艺及多糖脱蛋白进行研究,并对三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和D-葡萄糖酸-δ-内酯(D-glucono-δ-lactone,GDL)的脱蛋白效果进行对比,其中利用GDL对多糖中的蛋白质进行脱除尚属首次。结果显示,多糖提取最佳工艺条件为液料比40∶1(m L/g)、加酶量2.5%、60℃提取3 h,在此条件下虾夷扇贝多糖得率可达10.90%;TCA法脱蛋白的最佳工艺条件为脱蛋白时间5 h、TCA质量分数5%、脱蛋白次数3次;GDL法脱蛋白的最佳条件为反应时间1 h、反应温度45℃、GDL质量分数0.3%。在两者最佳条件下,分别进行3次平行实验,TCA蛋白脱除率为88.654%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.905%;GDL蛋白脱除率为99.062%,RSD为0.679%;对比两种脱蛋白方法,GDL法脱蛋白效率更高,实验效果也更为稳定。     

响应面优化酶法提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及抗氧化活性测定

研究胰蛋白酶提取虎斑乌贼肌肉多糖的工艺及体外抗氧化活性,并与水提法和碱提法的多糖进行比较。在单因素试验基础上以响应面法优化酶法提取多糖的工艺,结果显示最佳工艺条件为:酶解温度55℃、料液比1∶40(g/mL)、酶解时间4 h、加酶量2.5%,此时虎斑乌贼肌肉多糖得率为4.15%,优于水提法和碱提法的多糖得率。体外抗氧化活性研究表明酶法提取的多糖比碱提和水提的多糖具有更好的抗氧化活性,当多糖质量浓度为4 mg/mL时,水提、碱提和酶提虎斑乌贼肌肉多糖对·OH的清除率分别为50.15%、55.14%和89.47%,其IC50值分别为4.51、3.56 mg/mL和0.82 mg/mL;对DPPH自由基的清除率分别为28.89%、31.48%和40.80%,其IC50值分别为16.66、15.43 mg/mL和11.50 mg/mL;对O2-·的清除率分别为75.43%、81.63%和97.00%,其IC50值分别为1.15、0.69 mg/mL和0.29 mg/mL;还原力大小分别为0.134、0.156和0.193。综合分析表明,酶提法得到的多糖得率较高且具有较好的体外抗氧化活性。     

响应面试验优化末水坛紫菜多糖除蛋白工艺及其抗氧化活性

目的：研究末水坛紫菜多糖的除蛋白方法及所制备多糖在细胞内的抗氧化作用。方法：响应面法优化末水坛紫菜多糖酶法除蛋白工艺条件;建立H2O2诱导HeLa细胞氧化损伤模型,MTT法测定细胞存活率,2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯检测细胞内活性氧水平。结果：样品液中末水坛紫菜多糖酶法除蛋白最佳工艺条件为木瓜蛋白酶用量0.7 mg/mL、酶解温度50 ℃、酶解时间55 min,此时蛋白清除率为61.28%;在此基础上,用4%三氯乙酸继续除蛋白,蛋白清除率可达80.73%,多糖保留率为79.7%。与模型组相比,经末水坛紫菜多糖处理的损伤细胞存活率显著提高（P＜0.01）,且细胞内活性氧含量显著下降（P＜0.01）。结论：木瓜蛋白酶-三氯乙酸联用可有效除去末水坛紫菜多糖中的蛋白。末水坛紫菜多糖有较强的抗氧化能力,能清除细胞内过剩的活性氧,修复H2O2对HeLa细胞的氧化损伤。     

响应面法优化马齿苋多糖酶法提取工艺

以多糖得率和对DPPH自由基清除率为响应值,采用响应面法优化果胶酶辅助提取马齿苋多糖,在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken中心组合原理设计,选取果胶酶添加量、酶解温度、酶解时间3个因素,优化从鲜马齿苋中提取多糖的最佳工艺条件。结果表明最佳工艺条件为:料液比1∶20(g/mL)、果胶酶添加量0.15 g/L、酶解温度39℃、酶解时间2.0 h,在此条件下平行3次试验,马齿苋多糖得率为4.22 g/kg,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为1.53%,与理论预测值(4.15 g/kg)的相对误差为1.52%;对DPPH自由基的平均清除率为53.1%,RSD为1.49%,与预测值(54.4%)的相对误差为2.39%,说明响应面法优化酶法提取马齿苋多糖的工艺条件稳定可行。     

大连刺参多糖的提取纯化及体外抗氧化活性研究

以大连刺参为原料,多糖提取率为指标,通过单因素实验和响应面试验法优化木瓜蛋白酶提取刺参多糖的酶解工艺条件;以蛋白脱除率为指标,通过单因素实验和正交试验法,优化D-葡萄糖酸-δ-内酯(GDL)对刺参多糖的脱蛋白工艺;并检测经过提取纯化后的刺参多糖的体外抗氧化活性。结果表明,刺参多糖的最佳提取工艺为:加酶量1.60%、pH7.30、温度54.0 ℃,在此条件下刺参多糖提取率为5.34%;最佳脱蛋白工艺条件为:反应温度60 ℃、反应时间2 h、GDL溶液(w/w,20%)加入量2.5 mL,蛋白脱除率为95.8%。提取纯化的刺参多糖清除DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子和ABTS自由基的IC₅₀分别为0.3、4.5、3.9、0.85 mg/mL。刺参多糖浓度为3.0 mg/mL时,ABTS+自由基的清除能力最强,达到90.4%,且与阳性对照V_C的清除能力相差不大。说明刺参多糖具有较好的体外抗氧化活性。     

超声波提取缢蛏多糖及脱蛋白工艺

采用超声波法对缢蛏多糖进行了提取,正交试验确定了最佳提取工艺条件:超声功率440W,提取时间60 min,提取温度80℃,料液比1∶30(g/mL).在此条件下,缢蛏粗多糖提取率为8.31％.对比了Sevag法和三氯乙酸法对缢蛏粗多糖脱蛋白的影响,实验结果表明三氯乙酸法在蛋白质脱除率和多糖损失率两个方面的综合指标较理想,三氯乙酸法处理3次后,蛋白质脱除率达到69.75％,缢蛏多糖损失率为26.68％.     

纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺优化及其抗氧化活性

目的:优化纤维素酶法提取决明子粗多糖的工艺,并研究决明子粗多糖的体外抗氧化活性。方法:在单因素实验的基础上,以酶解时间、酶解温度、酶用量、液料比及酶解pH为自变量,多糖得率为响应值,利用BoxBehnken响应面法进行工艺优化。以对DPPH自由基和羟自由基清除率的大小为指标考察决明子粗多糖的体外抗氧化活性。结果:纤维素酶法提取决明子粗多糖最佳工艺为酶用量1.4%、酶解时间50 min、液料比24:1 mL/g、酶解pH5.4、酶解温度48℃,此条件下决明子多糖得率为11.67%,与回归模型的理论预测值11.91%误差小于5%。决明子粗多糖对DPPH自由基和羟自由基均具有较强的清除作用,半数抑制浓度分别为1.025 mg/mL和0.894 mg/mL。结论:纤维素酶法可显著提高决明子粗多糖得率,工艺简便可行,获得的决明子粗多糖具有体外抗氧化活性。     

蚕蛹多糖脱蛋白方法研究

以蛋白去除率和多糖损失率为指标,比较Sevag法、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)法、木瓜蛋白酶法、木瓜蛋白酶-Sevag联用法和木瓜蛋白酶-TCA联用法脱除蚕蛹多糖蛋白的效果。结果显示：木瓜蛋白酶-TCA联用效果最好,其脱蛋白的最佳条件为木瓜蛋白酶用量[E]/[S] 2.0%、酶解温度50℃、酶解反应1.5h、采用TCA法除蛋白1次,此时蛋白去除率为97.98%,多糖损失率为18.76%;紫外光谱扫描定性实验显示脱蛋白的多糖在260～280nm处只有少量吸收,表明大多数蛋白已去除。木瓜蛋白酶-TCA联用法是一种有效的多糖脱蛋白方法。