大豆多肽-锌螯合物的制备工艺优化及其结构表征

本文通过Alcalase酶水解大豆分离蛋白制备大豆多肽,并将大豆多肽与ZnCl₂进行螯合反应制备多肽-锌螯合物。以锌螯合能力为指标,通过单因素实验及正交试验,确定大豆多肽锌螯合物的最佳工艺条件为:反应温度75 ℃,pH5.5以及ZnCl₂溶液浓度为450 μmol/L,此条件下大豆多肽的锌螯合能力为(26.96±1.22) mg/g。紫外光谱和傅利叶红外光谱表明,锌离子可以与多肽中的羧基、氨基和肽键结合,从而形成大豆多肽锌螯合物。荧光光谱、扫描电子显微镜和Zeta电位的结果表明,与锌离子的螯合使得多肽发生分子内和分子间的折叠与聚集。 大豆多肽-锌螯合物为开发新型补锌制剂提供了新的研究思路和理论依据。     

蚕蛹多肽螯合钙的制备工艺优化及结构表征

利用蚕蛹多肽为原料制备多肽螯合钙,以可溶性钙含量为主要指标,综合考察螯合率和得率,研究了螯合pH、温度、时间以及肽钙比等单因素的影响,并进一步通过响应面优化法对制备工艺进行优化,确定最优的反应条件为反应时间80min、反应温度73℃、pH 10、肽钙质量比3.41.0,该条件下蚕蛹多肽螯合钙的含钙量为14.51%。傅利叶红外光谱分析表明蚕蛹多肽主要通过羧基、胺基和磷酸基团与钙离子结合。     

氨基酸多肽螯合钙的制备及其工艺优化

以罗非鱼下脚料(鱼头,鱼骨架)为原料,对原料进行水解获得氨基酸多肽溶液和鱼骨,鱼骨进行酸解获得游离钙,最终利用游离钙溶液与氨基酸多肽溶液反应制得氨基酸多肽螯合钙。作者获得了酸解鱼骨的较佳条件以及氨基酸多肽液与游离钙的较佳螯合工艺条件。骨钙溶出试验:温度50℃、溶出时间100 min、盐酸浓度4 mol/L、盐酸量12 mL/g(以骨粉计)。螯合试验:螯合液pH 5、螯合时间60 min、氨基酸多肽与钙离子质量比2.5∶1、螯合温度80℃。     

鲶鱼骨肉泥酶解多肽螯合钙的结构表征

为表征鲶鱼骨肉泥酶解多肽螯合钙结构特征,分别采用红外吸收(IR)光谱法、紫外吸收(UV)光谱法、扫描电镜(SEM)和X射线光电子能谱(XPS)法,解析并对比多肽及多肽螯合钙结构。结果表明,多肽螯合钙相对于多肽,紫外最大吸收峰红移,红外吸收峰在N-H伸缩振动特征区蓝移,酰胺Ⅱ带的N-H变形振动特征区消失,酰胺Ⅰ带的C=O伸缩振动特征区红移,O-H面内变形振动指纹区消失,表明钙离子与多肽的氨基、羧基发生配合;多肽螯合钙后微观结构由无规则态变为致密且有棱角的块状,表面新增Ca、Mg元素。研究结果为鲶鱼骨肉泥酶解多肽螯合钙的构效研究及应用提供了理论支撑。     

乳清多肽螯合钙的制备与结构表征

以乳清蛋白为原料,用酶法水解制得乳清多肽,研究乳清多肽与Ca2+螯合反应的规律。以产物中Ca2+的含量和螯合率为指标,优化得到制备乳清多肽螯合钙的最佳工艺条件:乳清多肽与钙盐质量比为1∶5（g/g）,多肽溶液初始pH为10.5,反应温度为65℃,反应时间为50min,所得产物Ca2+含量为10.5%±0.5%。采用紫外光谱、红外光谱、扫描电镜等手段,研究了乳清多肽螯合钙的结构,结果表明Ca2+和乳清多肽的羧基与氨基均发生了配位反应。      

猪皮胶原多肽螯合钙的制备及其结构表征

以猪皮明胶复合酶解胶原多肽和葡萄糖酸钙为原料,多肽钙螯合率为指标,在一定条件下制备多肽螯合钙。通过Plackett-Buiman（PB）和中心组合设计（CCD）,考察胶原多肽/水料液比、多肽/葡萄糖酸钙质量比、p H、反应温度、反应时间、搅拌时间、搅拌速度等因素对多肽螯合率的影响。结果表明:通过PB设计筛选出多肽/葡萄糖酸钙质量比、p H和反应时间为多肽钙螯合主要影响因素,经CCD优化确定最佳螯合工艺为多肽/葡萄碳酸钙质量比5.5∶1,p H6.0,反应时间130 min,胶原多肽/水料液比1.5∶100,反应温度60℃,搅拌速度30 r/min,搅拌时间20 min。在此条件下,多肽螯合率达78.3%。采用紫外光谱、红外光谱、扫描电镜、X衍射等手段,研究了猪皮胶原多肽螯合钙的结构,结果表明猪皮胶原多肽与钙形成了螯合物,且胶原多肽的氨基和羧基均与Ca2+发生了螯合反应。      

羊骨多肽亚铁螯合物的制备工艺优化及结构表征

为探究羊骨多肽亚铁螯合物的最优制备工艺及结构的表征,本试验采用羊骨粉为原料,制备出羊骨多肽,并超滤分离得出螯合效果最好的肽段为0～3 KDa,再与FeCl_2进行螯合,得到羊骨多肽亚铁螯合物。以螯合率为指标,通过单因素与响应面试验,得到最优条件为反应的肽铁质量比为3∶1,底物浓度为30 mg/mL,pH为5.2,螯合时间为30 min,螯合温度为35℃,最终螯合率为78.00%。以羊骨多肽为参照,试验结果表明,定性检测确定了螯合物的形成,紫外光谱显示亚铁离子与多肽作用,红外光谱表明螯合位点为氨基,羟基和C=O,扫描电镜可看出羊骨多肽与亚铁离子发生了吸附作用,结构紧密。通过氨基酸分析可得出,氨基酸组成符合胶原多肽的成分特征,螯合后天冬氨酸与谷氨酸含量增加显著。     

麦胚蛋白的提取及其酶解制备多肽工艺参数优化

研究以碱提后等电点沉淀的方法提取麦胚蛋白,以蛋白得率为标准,利用单因素结合正交试验优化提取工艺参数。试验结果表明:在料液比1∶16(g/mL)、提取温度60℃、pH为10的条件下,麦胚蛋白的得率达35.4%。利用所得麦胚蛋白制备多肽,以蛋白水解度为标准,筛选出最佳工艺酶为碱性蛋白酶,利用单因素结合正交试验优化酶解制备多肽的工艺条件,结果表明:在加酶量15 000 U/g、酶解温度60℃、pH8.5、底物质量浓度5%的条件下,麦胚蛋白的水解度达到33.64%。     

鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物的制备及结构表征与稳定性研究

为制备一种人体易吸收的钙制剂,并提高鮰鱼加工副产物鱼骨的附加值,以钙结合活性为评价指标,通过单因素试验得到鮰鱼骨胶原多肽的最佳酶解工艺,然后采用Sephadex G-25凝胶柱分离纯化钙结合活性高的胶原多肽。运用红外光谱、扫描电镜和能谱分析对鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物进行结构表征,最后评价鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物的热稳定性、酸碱稳定性和体外消化稳定性。研究表明,以碱性蛋白酶制备的胶原多肽的最佳酶解工艺为料液比1∶13(g∶mL),酶添加量4%,pH 8.0,酶解时间2 h,酶解温度40℃,其钙结合能力达29.37 mmol/L,分子质量为195～1 967 Da的胶原多肽约占鮰鱼骨胶原多肽整体的77.73%。经Sephadex G-25分离纯化得到3个不同分子质量的肽组分,其中F₃组分的钙结合活性最佳。红外光谱、扫描电镜和能谱分析表明,鮰鱼胶原多肽的氨基、羧基和酰胺键为Ca²⁺的主要结合位点,螯合之后,其光滑的平面变为粗糙、疏松、多孔的形状,钙含量明显增加。稳定性分析发现,鮰鱼骨胶原多肽-钙螯合物具有一定的耐热性、耐弱碱性和消化稳定性,胃肠道消...     

复合酶结合碱法制备麦胚多肽的研究

研究了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶复合水解麦胚蛋白的最佳工艺,正交实验结果表明:酶解的最佳pH为6,底物浓度为5%,温度为50℃,水解时间为120min,加酶量为400U/g,木瓜蛋白酶与中性蛋白酶的添加量的配比(活性比)为1:1,多肽的提取率达到最高为89.87%。并且,本文将酶法和碱提方法相结合,调节pH8.5左右,45℃碱提1h,使多肽的提取率由89.87%提高到93.76%。本工艺与传统工艺相比,酶用量减少了,小麦胚芽多肽的提取率提高了,因此降低了生产成本。      

河套小麦胚芽源多肽的抗氧化活性研究

利用中性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶等酶解河套小麦胚芽蛋白获得多肽,测定其体外抗氧化能力,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）确定其多肽分布。结果表明,胚芽蛋白及多肽浓度与抗氧化能力呈正相关。不同浓度的中性蛋白酶酶解获得的多肽的抗氧化能力显著高于胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解获得的多肽（P<0.05）,其还原能力、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐（ABTS+）和1,1-二苯基-2-苦基苯肼（DPPH）清除率最高达（1.17±0.004）1.0 mg/mL、（84.82%±0.87%）1.5 mg/mL和（55.01%±0.01%）1.0 mg/mL,且其ABTS+和DPPH自由基清除率均显著高于胚芽蛋白（P<0.05）。另外,不同蛋白酶水解能力不同,其中胃蛋白酶的水解能力最大,中性蛋白酶水解能力最小;胚芽蛋白多肽的抗氧化能力与其分子量大小相关,但不一定蛋白多肽的分子量越小,其抗氧化效果越好。上述结果为进一步研究河套小麦胚芽抗氧化肽提供了一定的参考依据。     

白鲢鱼骨胶原多肽螯合钙的工艺优化

为减少淡水鱼加工过程中副产物对环境的污染和资源的浪费、提高淡水鱼的附加值,对白鲢鱼骨制备胶原多肽螯合钙的工艺进行研究。以白鲢鱼骨和氯化钙为原料,在一定条件下制备胶原多肽螯合钙,考察温度、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比、时间、pH值对螯合率和螯合物中钙含量的影响。根据单因素试验结果,对胶原多肽螯合钙工艺进行四因子二次正交旋转设计优化,得到鱼骨胶原多肽螯合钙的最佳工艺参数为温度42 ℃、时间38 min、鱼骨胶原多肽与氯化钙的质量比2.1∶1、pH 6.8,此条件下的螯合率和螯合物中的钙含量分别为80.4%和12.1%。对螯合钙进行氨基酸组成成分分析,其总氨基酸含量为61.03%,且具备典型的胶原蛋白氨基酸组成特征。红外光谱扫描和电镜扫描观察表明：钙离子与胶原多肽发生了螯合反应,结合方式有离子结合、配位结合和吸附作用。     

脱脂麦胚中谷胱甘肽与麦胚蛋白提取

对脱脂麦胚中谷胱甘肽(GSH)和麦胚蛋白的提取进行研究。首先采用低pH 值条件从脱脂麦胚中提取谷胱甘肽,并采用超滤将该提取液中的谷胱甘肽与蛋白质进行分离。再对提取过GSH 后的麦胚残渣中的蛋白质进行碱提研究。最后合并超滤分离出的蛋白质与碱提蛋白质,采用等电点沉淀法对麦胚蛋白进行纯化制备。采用单因素试验结合正交试验分别对GSH 和麦胚蛋白的提取工艺进行优化,并最终确定GSH 最佳提取工艺为提取pH6.3、提取时间15min、固液比1:13(g/mL)、提取温度55℃,GSH 的得率和提取率分别为0.31% 和72.1%。麦胚蛋白的最佳提取工艺为提取pH10.5、提取温度65℃、固液比1:11、提取时间60min。提取蛋白质相对于碱提用沉淀的得率为39.2%,提取率为90.4%。相对于总麦胚得率为20.8%,提取率为58.8%。合并超滤截留液与碱提离心上清液,确定沉淀蛋白质最佳pH4.2,蛋白质沉淀率为97.5%,所得蛋白质含量达85.2%,相对于脱脂麦胚中总蛋白质提取率为81.1%。     

麦胚降血糖肽的分离纯化及鉴定

建立麦胚降血糖肽的分离纯化方法及鉴定活性多肽的结构组成。采用胰蛋白酶酶解麦胚蛋白,得到降血糖多肽,并进行降血糖动物实验。超滤获得高活性组分,离子交换吸附实验选择最佳的树脂,并对麦胚降血糖肽进行离子交换吸附分离,SephadexG-25和SephadexG-15分离,再经过反相高效液相色谱（reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC）分离高活性成分。最后采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-electrospray ionization-mass spectrometry,HPLC-ESI-MS）鉴定活性多肽的结构组成。结果显示酶解麦胚蛋白对α-葡萄糖苷酶的抑制性IC50为10.98?mg/mL,能够缓解糖尿病小鼠的症状。超滤获得分子质量小于5?kDa的高活性组分,IC50为1.60?mg/mL。732型阳离子交换树脂的分离效果最好,2.5%氨水的洗脱率为98.13%,通过动态离子交换吸附分离后,活性显著提高,IC50为0.30?mg/mL。通过SephadexG-25和SephadexG-15分离得到高活性组分,经RP-HPLC分离得到8?个组分（峰）,其中1号峰的活性和含量都最高,IC50为0.098?mg/mL。HPLC-ESI-MS结果显示m/z?274.45的丰度比较高,经离子碎片拼接,共有7?种多肽,其中二肽有1?种,三肽有6?种。本研究对于开发具有降血糖功效的新型功能性食品有一定的作用。     

麦胚水溶性糖蛋白的分离纯化及性质测定

从麦胚水溶性提取物中分离得到粗蛋白 糖复合物,经DEAE Cellulose和SephadexG100柱层析,得到均一的麦胚水溶性糖蛋白(WGWSGP).SepharoseCL 6B凝胶过滤纯度检验表明WG WSGP是单一对称峰,经SDS PAGE电泳测定其相对分子质量为40260.     

脱脂麦胚蛋白的分离制备

本文对脱脂麦胚蛋白的分离制备分别用碱法和酶法进行了对比研究.结果表明,碱法制备脱脂麦胚蛋白的最佳工艺条件:pH值10,时间60min,温度45℃,固液比1:16,提取率为78.97%,酸沉条件:pH值4.2,得率为66.16%;木瓜蛋白酶法制备脱脂麦胚蛋白的最佳工艺条件:pH值5,时间60min,温度60℃,加酶量3000U/g,提取率可达97.98%,酸沉条件:pH值4.2,得率为78.15%.     

花生蛋白钙螯合肽的制备、富集及表征

本文对花生蛋白钙螯合肽的制备工艺进行了研究,并对所得水解产物及其钙螯合物进行了表征。结果表明,在6种市售的蛋白酶中,Alcalase 2.4L对花生蛋白的水解能力最强,其与ProteAXH进行分步复合水解可进一步提高水解效果,在最适条件下所得花生肽的钙结合能力达到了84.09 mg/g、蛋白质回收率高达87.89%;采用酸法脱酰胺可显著提高花生肽的钙结合能力,在最适条件下可达到132.04 mg/g;利用大孔树脂DM301对脱酰胺花生肽进行富集可进一步提高其钙结合能力,在最优条件下可高达164.34 mg/g。荧光光谱及圆二色谱分析证实花生肽与钙离子发生了螯合作用,红外光谱分析则表明花生肽主要通过其羧基与钙离子进行结合。因此,花生肽是一种潜在的钙螯合剂,这对于花生蛋白的高值化综合利用具有重要的参考价值。     

固定化碱性蛋白酶制备麦胚降血压肽研究

采用中空壳聚糖作为载体,通过双功能试剂戊二醛作偶联剂,将碱性蛋白酶连接到中空壳聚糖,制备固定化碱性蛋白酶。研究固定化碱性蛋白酶的部分性质及水解麦胚蛋白质条件。实验结果显示,1.5% 戊二醛溶液活化的壳聚糖偶联1mg 碱性蛋白酶,酶催化相对活性可达90%;固定化酶最适pH 值为9.5,最适反应温度约65℃,催化水解麦胚蛋白质的水解率达16.5% 约需10min;固定化酶与麦胚蛋白质的比达到1:5 时,一次性获取含降血压肽水解物质的得率为15.6%。     

酶解麦胚蛋白制备抗氧化肽的研究

通过单因素试验和响应面分析,确定了采用碱性蛋白酶ProleatherFG-F制备麦胚抗氧化肽的最佳酶解条件为:[S]5.00%、[E]/[S]4.90%～5.05%、pH9.5、温度53.30～54.50℃、时间3.8h,该条件下制备的麦胚抗氧化肽对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为59.55%和56.38%。     

小麦胚芽中油、蛋白质及淀粉的分离制备

本文对小麦胚芽中油、蛋白质及淀粉的分离制备进行了全面的研究。结果表明，超临界CO2流体萃取小麦胚芽油的最佳操作条件为：萃取压力30MPa，萃取温度50℃，萃取时间2h。碱法制备小麦胚芽蛋白的最佳工艺条件：pH10，时间60min，温度45℃，固液比1：16，提取率为78．97％，酸沉条件：pH4．2，得率为66．16％。木瓜蛋白酶法制备小麦胚芽蛋白的最佳工艺条件：pH5，时间60min，温度60℃，加酶量3000U／g，提取率可达97．98％，酸沉条件：pH4．2，得率为78．15％。油和蛋白质被提取后的残余物经碱洗后即得小麦胚芽淀粉。