大豆蛋白-酪蛋白复合物结构的红外光谱分析

使用傅里叶变换红外光谱技术对大豆蛋白-酪蛋白组装物的二级结构进行研究。组装物在酰胺Ⅰ带和Ⅲ带位置中各特征峰相互叠加,采用Gausses峰型对圆头峰进行拟合、解析,判断其α-螺旋,β-折叠,β-转角和无规则卷曲的相对含量。研究发现:酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅲ带在数值上对CNPSPC的二级结构定量表现出差异性,而在pH对CNPSPC的β-折叠结构及α-螺旋结构的影响上表现一致,即随着p H值的增大,α-螺旋结构含量呈先降低后增加趋势,β-折叠含量呈现先增加后降低的趋势,且在pH 6.0时含量最大。     

一种连续分离纯化酪蛋白磷酸肽的新工艺

为建立一条制备酪蛋白磷酸肽(CPPs)的新工艺路线。采用酶解与超滤耦联技术初步分离制备酪蛋白生物活性肽,然后通过树脂层析将酪蛋白生物活性肽中的酪蛋白磷酸肽和非磷酸肽分离。选用碱性蛋白酶Alcalase在切向流酶膜反应器中(膜截留分子质量10kD)连续酶解3h、酶解温度50℃、pH8.5。重点研究大孔弱碱性阴离子交换树脂D303对酪蛋白生物活性肽的分离纯化工艺,并采用单因素试验优化CPPs的分离纯化工艺参数,确定D303树脂的较佳动态吸附解吸条件：上样流速1BV/h、上样量100mL、洗脱温度45℃、洗脱酸浓度0.15mol/L HCl,获得磷酸肽N/P比为7.21,P洗脱得率为93.11%。     

酪蛋白磷酸肽副产物协同抗阻力运动对大鼠肌肉质量的影响

通过计算机断层扫描（computed tomography,CT）技术对饲喂酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptide,CPP）副产物——酪蛋白非磷酸肽（casein non-phosphopeptide,CNPP）的大鼠的躯干及下肢根部肌群、腰椎周围肌群、背部肌群、肩胛内侧肌群、上肢左侧根部肌群的横截面积进行检测。结果发现：到第50天时,自由活动组中饲喂中剂量酪蛋白非磷酸肽的大鼠的躯干及下肢根部肌群、背部肌群、肩胛内侧肌群和上肢左侧根部肌群的横截面积增长量较高,分别是空白组的1.19、1.16、1.24、1.93 倍;抗阻力运动组中喂高剂量酪蛋白非磷酸肽的大鼠躯干及下肢根部肌群、背部肌群的横截面积增长量显著大于自由活动组（P＜0.05）,同时也显著大于相同剂量的乳清蛋白组（P＜0.05）。表明酪蛋白非磷酸肽协同抗阻力运动可以促进大鼠肌肉质量的增加。     

辣木凝乳酶水解酪蛋白位点及其酪蛋白磷酸肽、酪蛋白糖巨肽

基于十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,液相色谱-串联质谱法研究辣木凝乳酶对酪蛋白的酶切位点和水解特性,并分析该凝乳酶水解产生的酪蛋白糖巨肽和酪蛋白磷酸肽。结果表明,辣木凝乳酶酶切κ-酪蛋白的Arg 93-His 94位点导致凝乳,区别于其他已报道的凝乳酶,具有明显特异性。酶作用下κ-酪蛋白的米氏常数Km=0.49 mg/mL,最大反应速率Vm=45.2 U/min,有效促进酪蛋白胶束的聚集和凝乳。该酶对α-、β-、κ-酪蛋白产生不同程度的水解,对α-酪蛋白的水解速度最快,说明其适用于软质奶酪的加工。以酪蛋白为底物,通过钡-乙醇沉淀法得到酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptides,CPPs）,产率为15.87%,得到的CPPs可以使钙沉淀推迟23 min,有利于钙离子被肠道有效吸收。以水牛乳为底物时,乳凝固后析出的乳清中含酪蛋白糖巨肽6.61 mg/mL,糖基化程度477.527 μg/mg。研究为新型植物凝乳酶的研发,及其在奶酪、酪蛋白活性肽等产品的应用提供科学依据。     

荧光光谱分析家蝇幼虫抗菌肽MDL-2的结构特性

研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL-2的荧光光谱和淬灭剂对內源性荧光的影响.家蝇幼虫抗菌肽MDL-2在280 am波长的激发光时,荧光光谱为Tyr残基和7rp残基共同提供,KI不能淬灭抗菌肽MDL-2的Trp残基的荧光,而Acr能淬灭几乎所有的Trp残基的荧光(f=0.74),说明Trp残基不是位于抗菌肽分子的表面,而是位于分子的内部.     

不同乳化剂制备乳状液对大豆蛋白凝胶强度影响

通过静置分层实验和离心分层实验考察了不同乳化剂(卵磷脂、Tween20、大豆蛋白、卵清蛋白和酪蛋白)、p H(3、4、5、6、7、8)、氯化钠浓度(10、50、100、150、200 mmol/L)以及热处理(90℃、30 min)对机械乳化法和超声乳化法制备乳状液稳定性的影响;并考察p H 7及不同盐浓度(0 mmol/L和200 mmol/L)条件下不同乳状液对热诱导大豆蛋白凝胶15%(w/v),90℃加热30 min)凝胶强度的影响。结果表明,小分子乳化剂(卵磷脂和Tween20)制备的乳状液的稳定性优于大分子乳化剂(大豆蛋白、卵清蛋白以及酪蛋白)制备的乳状液;超声法制备的乳状液的稳定性高于机械法制备的乳状液;以超声乳化得到的卵清蛋白乳状液为溶剂制备的大豆蛋白凝胶强度最好;氯化钠的加入可以有效提高凝胶的强度。     

分子对接技术与光谱法分析薯蓣皂苷和人血清白蛋白的相互作用

研究探讨了薯蓣皂苷（DS）对人血清白蛋白（HSA）的作用机制。运用dock 6.0分子对接法、荧光发射光谱法和紫外分光光度法,对DS同人体HSA之间的关系展开分析。DS与HSA之间有8种结合方式,再结合Grid打分值和Internal energy水平,选择第8种优势构象,Grid分数为-75.9787 kcal/mol,作用力为疏水作用,结合的氨基酸残基主要是色氨酸Trp214。荧光光谱显示DS浓度增大,HSA-DS荧光强度降低且波长蓝移,表示在DS作用下,HSA所含色氨酸（Trp）的荧光强度出现猝灭现象。波长差Δλ=15 nm和Δλ=60 nm条件下测定的同步荧光现象说明两者结合后,HSA所含Trp残基的附近环境随即出现了变化。根据Stern-Volmer方程计算得出双分子碰撞常数Kq均大于2.0×1010 L/mol?s和静态猝灭结合常数Ka均大于5×104 L/mol,证实猝灭机制属于疏水作用影响的静态猝灭,结合位点为1,与分子对接结果一致。紫外吸收图谱显示DS浓度增加,吸光度升高,进一步阐明彼此发生了作用。分子对接及光谱表明两者主要在色氨酸Trp214位置处通过疏水作用结合,HSA构象和微环境产生变化。从研究中获得的数据能够阐明薯蓣皂苷对HSA的作用机制,为进一步理解薯蓣皂苷在人体的贮藏运输过程中对蛋白质功能的影响提供新依据。     

SiO2@TiO2复合材料分离富集酪蛋白磷酸肽

TiO2具有选择性吸附磷酸肽的特点。为了得到高比表面积的TiO2,提高磷酸肽的分离富集效果,本研究采用层层自组装法,制备出了比表面积为116.26 m2/g、平均孔直径为8.42 nm的SiO2@TiO2核壳型复合材料,并将该材料用于酪蛋白磷酸肽（casein phosphopeptides,CPPs）的分离富集。利用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）测定出该材料对CPPs的吸附率为93.0%,解吸率达到81.5%。通过液相色谱-四极杆-飞行时间质谱鉴定出CPPs样品经富集后,洗脱液中的5 种磷酸肽成分的序列分别为PS*H、PS*PR、S*SRS*E、PHS*和PS*SRS*EP;并以茶碱为内标的HPLC法测定了CPPs样品、氨糖软骨素钙片、婴儿配方奶粉中CPPs的含量,测定结果的平均添加回收率介于92.5%～95.1%之间。因此,本实验所制备的SiO2@TiO2核壳型复合材料性能优异,对CPPs分离富集效果明显,用于实际样品测定的结果准确可靠。     

生物活性肽及其蛋白酶水解法制备探索

近年来,研究发现食物蛋白质酶解产物中的一些短肽具有除营养功能以外的广泛的生理调节功能,如降血压,降低胆固醇,促进免疫以及促进营养物质的消化吸收,且自在体内的消化吸收性能明显优于单个氨基酸。如从乳蛋白的蛋白酶水解物中发现了多种具生物活性的功能肽,它们包括:促钙吸收的酪蛋白磷酸肽(casein—     

Aspergillus ficuum菊粉酶的荧光光谱研究

以Trp 为荧光探针,测定Aspergillus ficuum 产内切菊粉酶和外切菊粉酶的内源荧光性质,结果表明,外切菊粉酶和内切菊粉酶荧光产生贡献的色氨酸残基可能位于一个极性环境中,内切菊粉酶的色氨酸残基所处环境的极性比外切菊粉酶的色氨酸残基所处的环境极性大。菊粉酶经N- 溴代琥珀酰亚胺(NBS)修饰后,内切菊粉酶荧光发射峰位出现了明显的蓝移,表明内切菊粉酶分子的色氨酸比外切菊粉酶分子的色氨酸对环境的变化更敏感。以丙烯酰胺作为荧光淬灭剂,内切菊粉酶色氨酸的可及分数比外切菊粉酶色氨酸的可及分数大,说明内切菊粉酶分子中的色氨酸比外切菊粉酶的更加暴露。菊粉酶在不同的pH 值环境中荧光强度的变化结果显示：随着环境pH 值的降低,内切菊粉酶的荧光淬灭程度比外切菊粉酶大,表明内切酶分子中色氨酸的微环境对pH 值的变化更敏感。荧光光谱分析揭示了内切菊粉酶和外切菊粉酶具有不同的构象。     

pH 值对大豆分离蛋白构象及表面疏水性的影响

采用Lowery法、ANS荧光探针法、圆二色光谱、荧光光谱方法分别对不同pH值大豆分离蛋白溶解度、表面疏水性、蛋白质二级、三级结构进行分析。结果表明：随着pH值的升高,大豆分离蛋白的二级结构发生由β-折叠结构向α-螺旋结构的转变,其Trp残基所处微环境极性增强。大豆分离蛋白表面疏水性与溶解度呈负相关关系,同时大豆分离蛋白表面疏水性也与α-螺旋结构含量呈负相关关系。     

pH值对大豆11S球蛋白结构和表面疏水性的影响

采用Lowry法、8-苯氨基萘-1-磺酸铵盐（8-anilinonaphthalene-1-sulfonic acid ammonium salt,ANS）荧光探针法研究pH值对大豆11S球蛋白的溶解性和表面疏水性的影响,并利用圆二色光谱和荧光光谱对不同pH值条件下11S球蛋白二级结构和三级结构进行分析,为研究大豆蛋白结构与表面疏水性之间的构效关系提供理论基础。结果表明：除等电点外,大豆11S球蛋白溶解性和表面疏水性呈负相关,并且随着pH值的升高,大豆球蛋白二级结构中发生β-折叠和无规卷曲向α-螺旋的转变,三级结构中色氨酸（Trp）残基微环境极性降低。大豆球蛋白的表面疏水性与α-螺旋结构含量呈负相关。     

Binding of curcumin to β-lactoglobulin and its effect on antioxidant characteristics of curcumin

The binding of curcumin (CCM) to bovine β-lactoglobulin (β-Lg) was investigated by Fourier transform infrared and fluorescence. The effect of binding on antioxidant activity of CCM was determined by using ABTS and hydroxyl radical scavenging capacity and total reducing ability. Our results showed that when CCM binds to β-Lg, it lead to a partial change in protein structure. In fact, CCM was bound respectively to two different sites of protein at pH 6.0 and 7.0 via hydrophobic interaction. CCM–β-Lg complex was formed by one molecule of protein combining with one molecule of CCM. Moreover, the average distance from one binding site to Trp residues in protein is similar with another. This result suggested that fluorescence resonance energy transfer cannot be used as unique method to study the characteristics of binding of ligands to proteins. The antioxidant activity of CCM might be improved by binding with β-Lg.     

芦丁和阿魏酸与酪蛋白的相互作用研究

酚类物质与蛋白质的相互作用对富含酚类物质的功能性乳制品的稳定性及生物活性具有重要影响。通过光谱分析及抗氧化活性测定,研究了芦丁和阿魏酸与酪蛋白的相互作用机制。荧光光谱分析发现,芦丁和阿魏酸均能淬灭酪蛋白的内源荧光,淬灭方式为静态淬灭;热力学参数表明,芦丁与酪蛋白作用的驱动力为疏水作用,阿魏酸与酪蛋白作用的驱动力为疏水作用和氢键。紫外-可见光谱和同步荧光光谱表明,芦丁和阿魏酸的加入影响了酪蛋白中酪氨酸和色氨酸残基周围的微环境,从而引起酪蛋白的构象改变。傅里叶变换红外光谱和圆二色谱研究结果进一步表明,芦丁和阿魏酸使酪蛋白的二级结构发生了变化,但没有破坏其二级结构。     

不同带电特性的壳聚糖/酪蛋白相互作用研究

为了建立多糖的带电特性与蛋白质复合体系的关系,以壳聚糖(CS)和酪蛋白为试验对象,通过荧光光谱法、紫外-可见吸收光谱法、傅里叶红外吸收光谱法及流变黏态分析法研究CS与酪蛋白的复合机制及流变特性.结果表明:荧光光谱中,CS对酪蛋白的猝灭方式是静态的.在温度303 K和313 K条件下,高脱乙酰度壳聚糖(HDCS)的结合位...     

水牛奶酪蛋白胶束结构的荧光光谱研究

利用内源荧光团色氨酸（Trp）和外源荧光探针8-苯胺基-1-萘磺酸（8-anilino-1-naphthalenesulfonic acid,ANS）的荧光特性对水牛奶酪蛋白胶束结构进行研究。结果表明：当蛋白质质量浓度较低时,酪蛋白胶束结构变化不明显,而较高的蛋白质质量浓度会破坏其胶束结构,使其疏水基团暴露;此外,在离子强度较大、pH值较低条件下,对酪蛋白胶束结构影响较大,使酪蛋白疏水基团暴露,酪蛋白微球先膨胀后聚集并形成酪蛋白胶束。     

Effects of Galactose Concentration on Characteristics of Angiotensin-I-Converting Enzyme Inhibitory Peptides Derived from Bovine Casein in Maillard Reaction

Bovine casein peptide had a strong angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activity. The objective of this study was to evaluate the effects of the galactose concentration on angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activity, antioxidant activity, and physicochemical properties of Maillard reaction products derived from bovine casein peptide and galactose in aqueous model system. The browning intensities of galactose-bovine casein peptide Maillard reaction products increased remarkably with the galactose concentration increased during heat treatment, while its pH and amino groups decreased significantly. The fluorescence compounds of galactose-bovine casein peptide Maillard reaction products reached the maximum when the galactose concentration was 45 g/L. Compounds with molecular weight between 2941 and 8864 Da were dominant while compounds smaller than 250 Da were also produced during the reactions, as characterized by size exclusion chromatography. Galactose-bovine casein peptide Maillard reaction products lost 14.6% of the original angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activity of bovine casein peptide after the addition of galactose concentration ranged from 0 to 12%, but its strong antioxidant activities were obtained. A high galactose concentration could decrease angiotensin-I-converting enzyme inhibitory activity of bovine casein peptide and enhance its antioxidant activities.     

发酵条件对植物乳杆菌叶酸合成的影响

选择1株高产叶酸的植物乳杆菌4-3,探讨在脱脂奶和豆浆两种发酵基质中,不调节pH值和使pH值稳定在6.0对其生长状况和叶酸合成的影响。结果显示,以豆浆为发酵基质时叶酸含量更高;控制培养基pH 6.0,植物乳杆菌4-3在其生长对数期后仍然可以保持较高的活细胞密度,且促进叶酸的积累。实时荧光定量聚合酶链式反应结果显示,控制pH 6.0能促进叶酸合成相关基因的表达。     

Fluorescence due to interactions of oxidizing soybean oil and soy proteins

Soy proteins with soybean oil (9:1,w/w) were stored at 60°C to investigate the changes in intrinsic fluorescence during oxidation. The front-surface fluorescence of the oxidized samples showed excitation and emission maxima at 355 and 440 nm respectively. The fluorescent compounds were soluble in the organic layer of the chloroform–methanol (2:1,v/v). The solution fluorescence showed an excitation maximum at 365 nm and an emission maximum at 450 nm, and the intensity increased during storage. The interactions of oxidizing soybean oil and soy proteins also resulted in decreases of protein solubility, soluble protein hydrophobicity, and free amino groups of proteins. With an antioxidant (BHT) addition, the changes in fluorescence and in protein properties were inhibited. The intensity of the solution fluorescence showed high correlation with TBA value (r=0.968) and protein solubility (r=−0.979), which could serve as an indicator for oxidative deterioration of soy proteins and soybean oil systems.     

紫花苜蓿叶蛋白制备抗氧化肽酶解条件优化及氨基酸组成分析

为开发利用苜蓿叶蛋白资源,以紫花苜蓿叶蛋白为原料,利用碱性蛋白酶酶解制备抗氧化肽。在单因素试验基础上,以抗氧化活性为指标,选取酶解时间、碱性蛋白酶用量、酶解温度和pH值为考察因素。采用响应面试验优化,其最佳酶解条件为酶解时间240min、碱性蛋白酶用量4.80%、酶解温度60℃、pH11.60,在此条件下清除率达到64.25%。用制备色谱纯化并收集抗氧化性最强的抗氧化肽组分,表明纯化后的抗氧化肽具有更强的抗氧化活性。用高效液相色谱测定纯化后抗氧化肽的氨基酸组成,其组成为天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)、组氨酸(His)、酪氨酸(Tyr)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和赖氨酸(Lys)。