霍山石斛多糖理化性质与生物活性的年动态变化研究

为分析霍山石斛多糖理化性质与生物活性的年动态变化规律来确定霍山石斛的适宜采收期,本文利用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)、红外光谱、乌氏黏度计、分光光度法等方法分析霍山石斛多糖的理化性质,并通过体外细胞实验检测了霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性和抗食管癌活性。结果表明,霍山石斛多糖主要由甘露糖和葡萄糖组成的两组分子量不同的组分构成,多糖含量和高分子量组分的分子量在全年呈现降-升-降-升的变化,多糖黏度、乙酰基含量和单糖摩尔比呈现降-升-降的变化,低分子量组分则在5~9月期间消失。霍山石斛多糖具有一定的肠黏膜免疫调节活性和抗食管癌活性,其免疫调节活性在9月至翌年4月优于5~8月,而多糖抑制食管癌细胞生长的作用在秋冬季好于春夏季。由霍山石斛多糖理化性质与生物活性变化之间的关系,可初步确定霍山石斛的最佳采收期为秋冬季。     

霍山石斛多糖的闪式提取工艺优化及降血糖作用研究

目的 优化霍山石斛多糖的闪式提取工艺,并对其降血糖作用进行研究。方法 采用单因素试验和响应面试验优化霍山石斛多糖的提取工艺,并通过测定空腹血糖、血清胰岛素和糖化血清蛋白水平研究其降血糖功能。结果 霍山石斛多糖的最优提取工艺为料液比1:28 (g:mL),提取电压132 V,提取时间95 s,提取次数4次,在此条件下霍山石斛多糖提取率为(24.14±0.52)%。通过动物试验发现,霍山石斛多糖能极显著降低小鼠血糖值和糖化血清蛋白水平(P<0.01),提高小鼠血清胰岛素含量(P<0.01)。结论 霍山石斛多糖具有较好的降血糖功效。     

霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性及在小肠中的吸收分布

目的：研究霍山石斛多糖（Dendrobium huoshanense polysaccharide,DHP）的小鼠肠黏膜免疫调节活性以及在小肠内的吸收分布。方法：通过溴化氰活化法对DHP进行荧光标记,检测荧光标记前后的肠黏膜免疫调节活性;通过口服和离体小肠培养以及Peyer’s结细胞培养,用激光共聚焦显微镜检测DHP在小肠内的吸收分布以及与Peyer’s结细胞的结合。结果：DHP在质量浓度为25、50、100 μg/mL和200 μg/mL时,其肠黏膜免疫调节活性分别提高到对照组的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%,荧光标记不改变DHP肠黏膜免疫活性;DHP在体内和体外均可被小肠吸收,分布于肠黏膜固有层内,并可与Peyer’s结内细胞结合。结论：DHP具有肠黏膜免疫调节活性,可以通过Peyer’s结细胞被小肠吸收,并分布于固有层内。     

超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖的研究

为了获得较高的多糖提取率,采用超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖;研究了料液比、纤维素酶用量、酶解温度、酶解时间、超声波功率和超声时间等因素对多糖提取的影响,同时通过正交实验对其提取条件进行了优化.结果表明,最佳提取工艺条件为:料液比1:40(g/mL)、纤维素酶500U/g、酶解温度40℃,酶解时间3h,超声波功率为300W,超声时间6min,此时的多糖提取量达到0.283g/g.     

超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖的研究

为了获得较高的多糖提取率,采用超声波协同纤维素酶法提取霍山石斛多糖;研究了料液比、纤维素酶用量、酶解温度、酶解时间、超声波功率和超声时间等因素对多糖提取的影响,同时通过正交实验对其提取条件进行了优化。结果表明,最佳提取工艺条件为:料液比1∶40(g/mL)、纤维素酶500U/g、酶解温度40℃,酶解时间3h,超声波功率为300W,超声时间6min,此时的多糖提取量达到0.283g/g。      

提取温度对香菇多糖理化性质和免疫活性的影响

研究提取温度对香菇多糖结构的影响,以期为香菇多糖在保健品、药品等开发提供一定的理论依据。本文拟以香菇子实体为原料,采用热水浸提法,料液比1:20,两次提取,设定提取温度为100℃、119℃和140℃从而获得三种香菇多糖样品LEP-A、LEP-B和LEP-C,多糖含量随着水提温度的升高而增大。液相色谱分析显示,LEP-A、LEP-B和LEP-C样品均为葡萄糖单一组分组成。红外光谱分析显示三种香菇多糖均含有3600~3000 cm~(-1)处-OH伸缩振动、3000~2800 cm~(-1)处糖类-CH伸缩振动、在1450~1200 cm~(-1)之间出现的羧基伸缩振动,表明这三种物质均具有多糖的特征吸收,结合其他特征峰确定多糖是吡喃型多糖。LEP-A、LEP-B和LEP-C免疫活性进行分析可知,三种香菇多糖样品均具有增强巨噬细胞吞噬能力、刺激T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖的作用,且低温提取的多糖促进作用优于高温。     

不同提取工艺淮山多糖的理化性质及抗氧化活性分析

该研究以广东淮山为原料,通过单因素和响应面试验得到酶解-超声辅助提取淮山多糖(CYP-UE)的最优提取工艺条件,并比较了其与热水浸提、超声提取、酶解提取的淮山多糖的单糖组成、分子量等理化性质和抗氧化活性的差异。结果表明：酶解-超声提取淮山多糖的最优工艺条件为纤维素酶8 000 U/g,果胶酶4 000 U/g,木瓜蛋白酶8 000 U/g,酶解温度60℃,酶解时间90 min,超声温度63℃,超声时间48 min,超声功率234 W,多糖得率为15.26%;4种多糖中CYP-UE的得率最高,且还原糖含量最高(29.88%);4种多糖分子量分布为4.50～10.20 ku,主要由葡萄糖、半乳糖醛酸和半乳糖构成,其中CYP-UE的分子量最小,并含有最高占比96.48%的葡萄糖;4种多糖均呈现多糖的特征吸收峰;4种多糖均有较好的溶液稳定性和较高的溶解度;4种多糖均具有不同程度的抗氧化活性,其中CYP-UE的铁离子还原能力(17.08μmol FeE/g DW)和ABTS+自由基清除能力(IC₅₀=2.42 mg/mL)显著强于其它3种多糖。由此表明,酶解-超声辅助法可用...     

悬浮培养霍山石斛原球茎合成活性多糖的研究

本文考察了基本培养基、碳源、氮源以及有机添加物对霍山石斛原球茎液体培养合成活性多糖的影响。在MS、B5、N6、SH及各自1／2基本培养基中，以1／2MS和N6最适多糖合成，继代培养30d，总多糖产率分别达到479．47mg／L和417．05mg／L。使用单一碳源时，葡萄糖对多糖的积累优于蔗糖和果糖，在30g／L时，总多糖产率达到1034．96mg／L。在一定浓度范围内，氮源种类对多糖的合成影响不太明显，但氮源浓度是主要冈素，以10mmol／L最佳。另外，100g／L的马铃薯提取液与100g／L的香蕉提取液均有利于多糖的合成。     

提取方法对羊栖菜多糖理化性质及体外生物活性的影响

目的 探究不同提取方法对羊栖菜多糖理化性质与体外生物活性的影响。方法 以羊栖菜(Sargassum fusiforme)为研究对象,采用热水提取法(hot water extraction,HWE)、碳酸钠提取法(alkaline-assisted extraction,ALAE)、氯化钙提取法(calcium chloride-assisted extraction,CAAE)及微波辅助水提法(microwave-assisted water extraction,MAE)和超声辅助水提法(ultrasound-assisted water extraction,UAE)共5种方法提取羊栖菜多糖,分析不同提取方法对多糖的提取效果、理化性质、体外抗氧化和降血糖活性的影响。结果 以水为溶剂进行提取,多糖得率相对较高,且微波和超声辅助可显著增强提取效果。ALAE提取的羊栖菜多糖分子量最低(924.96 k Da)且热稳定性最好(T_max=255.84℃)。不同方法提取所得多糖的单糖组成类似,均主要由甘露糖、氨基葡萄糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、半乳糖醛酸和岩藻...     

不同提取方法对松茸多糖理化性质及抗氧化活性的影响

目的研究不同提取方法对松茸多糖(polysaccharide of Tricholoma matsutake,TMP)的理化性质及抗氧化活性的影响,并以提取得率和抗氧化活性为依据,筛选出最优方法。方法采用热水浸提、超声提取、酶提取和微波提取等4种提取方法,获得4种相应的多糖。利用高效阴离子交换色谱和傅里叶红外光谱对4种多糖的化学特性进行了结构表征。结果 4种多糖的提取得率顺序为热水浸提多糖超声提取多糖酶提取多糖微波提取多糖。在4种多糖中,超声辅助多糖含量最高(48.98%),蛋白含量最低(0.2%)。抗氧化试验结果表明,超声辅助多糖的还原力和·OH的清除力均高于其他3种多糖;从清除DPPH活性来看,超声辅助多糖和热水浸提多糖的EC_(50)分别为1.06和0.98 mg/mL,二者活性相当,均远高于其他2种多糖。结论综合考虑提取得率、多糖含量和抗氧化活性,超声提取为最优方法。4种多糖的单糖组分基本相同,但它们的摩尔比有明显不同。     

霍山石斛中不同多糖组分的保肝活性

采用热水浸提和DEAE-纤维素阴离子交换法从霍山石斛中分离出4 种多糖组分（DHP1、DHP2、DHP3和DHP4）,比较了4 种多糖组分对四氯化碳（CCl4）肝毒性的保护作用。结果表明：口服DHP1显著降低了CCl4诱导的小鼠血清谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）和谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）活性的升高,削弱了肝组织中丙二醛（malondialdehyde,MDA）的表达,同时恢复了肝组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和过氧化氢酶（catalase,CAT）的活性。因此,DHP1可能是霍山石斛中一种潜在的保肝多糖成分。     

5 种食用菌多糖理化性质及免疫活性的比较研究

目的：研究平菇、茶树菇、香菇、木耳、金针菇5 种食用菌多糖的理化性质和免疫活性,为食用菌的开发利用提供理论支持。方法：采用水提醇沉法提取多糖;采用分光光度法、高效凝胶渗透色谱法（high performance gelpermeation chromatography,HPGPC）、气相色谱-质谱联用法（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）、红外光谱法（infrared spectrometry,IR）分析多糖的理化性质;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA）测定多糖的免疫活性。结果：相同条件下,5 种食用菌多糖提取率依次为平菇多糖（Pleurotusostreatus polysaccharides,POP）3.39%、茶树菇多糖（Agrocybe chaxingu polysaccharides,ACP）2.71%、金针菇多糖（Flammulina velutipes polysaccharides,FVP）2.69%、香菇多糖（Lentinus edodes polysaccharides,LEP）2.32%和木耳多糖（Auriculari aauricular polysaccharides,AAP）2.31%,它们均由分子质量不同、糖苷键为β-构型的多糖组分组成,均含有甘露糖（mannose,Man）、葡萄糖（glucose,Glc）和半乳糖（galactose,Gal）残基,且ACP还含有鼠李糖（rhamnose,Rha）和阿拉伯糖（arabinose,Ara）,AAP还含有少量的木糖（xylose,Xyl）;甲基化分析显示不同多糖具有不同的糖苷键连接方式,POP和LEP以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式,ACP以→1,6-β-Glc和→1,6-β-Gal为主要连接方式,而AAP和FVP是以→1,4-β-Glc为主要连接方式;体外免疫活性实验结果表明,5 种多糖在25～400 μg/mL质量浓度范围内无细胞毒性,可不同程度地提高巨噬细胞的吞噬能力和促进巨噬细胞分泌NO、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）的能力,其中以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式的LEP活性最强,以→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc为主要连接方式的POP次之,以→1,6-β-Glc和→1,6-β-Gal为主要连接方式的ACP效果一般,以→1,4-β-Glc为主要连接方式的AAP和FVP效果最差。结论：5 种食用菌多糖具有不同的理化性质和对巨噬细胞的免疫调节活性,且活性大小与多糖是否含有→1,3-β-Glc和→1,6-β-Glc连接方式相关。     

霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用

研究霍山石斛多糖对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,探讨多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因表达之间的相关性。胃癌细胞SGC-7901生长的MTT检测表明,霍山石斛总多糖(DHP)、阴离子交换色谱水洗组分(DHP-1)及0.05 mol/L盐洗组分(DHP-2)能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,并呈时间和剂量依赖性,其中以DHP-2效果最好。光学及激光共聚焦显微镜观察发现,DHP-2处理过的胃癌细胞形态固缩,凋亡显著。荧光定量RT-PCR技术检测表明,DHP-2不仅能明显下调原癌基因c-myc的表达,其表达仅为对照的42.34%,而且能显著提高抑癌基因野生型p53的表达,其表达比对照高1.04倍。结果表明:霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用与其组分、浓度及作用时间相关,其可能的作用机制是多糖通过下调c-myc基因和上调p53基因的表达来发挥抑制效果。     

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。