虾青素保护PC-3细胞免受H2O2氧化应激的作用机制

目的：研究虾青素对过氧化氢诱导PC-3细胞氧化应激的保护作用,探索其信号通路机制。方法：建立H2O2 氧化应激模型,采用不同浓度虾青素预处理PC-3细胞,检测细胞存活率、细胞凋亡、活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、 活化半胱天冬酶-3表达及丝裂原活化蛋白激酶-核因子E2相关基因2-血红素氧合酶1（mitogen-activated protein kinases nuclear factor erythroid-2-related factor 2-heme oxygenase 1,MAPK-Nrf2-HO-1）通路的变化。结果：20 μmol/L虾青 素预处理显著提高H2O2所降低的细胞存活率、降低ROS水平（P＜0.05）,同时通过抑制Bcl-2/Bax比率下降及半胱 天冬酶-3的激活,从而使细胞凋亡率从51.4%降低至14.8%,进一步研究发现虾青素能够促进Nrf2磷酸化,并促进 HO-1的表达,呈现浓度依赖性。通过细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）抑制剂 （U0126）和Akt抑制剂（LY294002）预处理,发现当ERK和磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B（phosphoinositide 3-kinase/ protein kinase B,PI3K/Akt）通路被抑制后,Nrf2表达降低,表明HO-1上调受上游ERK和胞内PI3K/Akt通路的调 控。在对MAPK途径对细胞毒性影响的研究中,ERK通路被抑制后细胞存活率显著下降,而c-Jun氨基末端激酶 （c-Jun N-terminal kinase,JNK）和p38 MAPK通路被抑制后并不影响其保护作用,表明虾青素抑制细胞存活率下降 是通过MAPK途径中的ERK通路,而不是JNK和p38通路。结论：虾青素预处理PC-3细胞可以减轻H2O2诱导的氧化 应激,维持细胞生理活性。     

嗜酸乳杆菌胞外蛋白调控MAPK和PI3K-AKT信号途径关键蛋白活化水平

探讨并揭示嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)CICC6005分泌的相关蛋白质促进肠道健康及分子机制具有重要研究价值。本实验在确定了L.acidophilus CICC6005分泌的胞外蛋白抑制HT-29结肠癌细胞增殖的基础上,进一步探讨67 ku和37 ku的胞外蛋白通过何种途径发挥抑制结肠癌细胞增殖。研究以HT-29细胞作为靶细胞,用丝裂原激活的蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)和磷脂酰肌醇-3激酶-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)信号通路为考察对象,以Western Blotting为手段,分析两个通路中关键的靶点蛋白p38、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)、胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、磷酸化p38(phosphorylated p38,p-p38)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)、磷酸化的细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated AKT,p-AKT)、PI3K的表达水平,以探讨并阐述源于L.acidophilus CICC6005胞外蛋白调控结肠癌细胞增殖状况的分子机制。结果表明,不同质量浓度的67 ku和37 ku胞外蛋白分别作用HT-29细胞一定时间后,两种胞外蛋白均具有下调两个信号通路途径中p-ERK1/2、p-p38、p-AKT、PI3K蛋白的表达,且存在浓度依赖关系;但对p-JNK、ERK1/2、p38、JNK蛋白的表达没有影响。因此,源于L.acidophilus CICC6005分泌的37 ku和67 ku胞外蛋白表现出显著的抑制HT-29细胞增殖的功能,其机制可能与调控MAPK和PI3K-AKT两个信号通路中几个关键的靶点蛋白的活化水平相关。该研究结果提示,食用嗜酸乳杆菌其分泌的胞外蛋白质将达到维护肠道健康的目标。     

MAPK信号通路调节卷烟烟气诱导的炎症因子的释放

为评估卷烟烟气对人支气管上皮细胞(BEAS-2B)的毒性效应,使用细胞计数试剂盒(CCK-8)对BEAS-2B细胞进行检测,使用光学显微镜对细胞形态进行观察,采用Western Blot实验检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)家族的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)和p38的磷酸化水平的变化,采用酶联免疫吸附实验检测炎症因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和IL-8的释放水平。结果表明:①卷烟烟气染毒会显著降低BEAS-2B细胞的存活率。②卷烟烟气染毒会激活磷酸化的ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路,并且会诱导炎症因子IL-1β、IL-6和IL-8释放水平升高。③特异性抑制剂分别抑制ERK1/2、JNK1/2和p38信号通路后,炎症因子释放水平显著下降。卷烟烟气诱导的炎症受MAPK信号通路的调节,该结果可为卷烟烟气诱导的肺部炎症相关疾病的机制研究提供参考。     

多穗柯挥发性组分分析及抗癌活性的初步研究

本研究以多穗柯为材料,采用同时蒸馏萃取法(SDE)提取挥发性组分,通过气质联用仪(GC-MS)分析挥发性组分组成,并以Hepa1c1c7小鼠肝癌细胞模型,以细胞存活率大于50%,诱导醌还原酶(QR)活性等于或大于2为活性指标,研究多穗柯挥发性组分及其主要单体物质的抗癌活性。结果显示,GC-MS共鉴定出80种多穗柯挥发性物质,占总挥发性组分相对百分含量的92.56%,其中酮类、醇类和醛类物质是多穗柯挥发性组分的主要类型,其主要成分有香叶基丙酮、β-紫罗酮、壬醛和桉油烯醇等。抗癌活性鉴定表明,多穗柯挥发性组分的浓度为(27.50±0.10)μg/mL时可诱导QR活性达到倍增,具有较强的抗癌活性;其中芳樟醇、香叶基丙酮和壬醛三个主要挥发性单体成分诱导QR活性达到倍增的浓度分别为(54.53±0.10)μg/mL、(283.10±0.10)μg/mL和(297.77±0.12)μg/mL。     

植物黄酮调控JNK通路干预氧化应激相关疾病的研究进展

c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族的成员。JNK信号传导途径由一系列激酶调节，参与细胞增殖、分化、凋亡、神经元功能和应激反应等生理功能的调控，介导多种疾病的发生。植物膳食中的黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、调节血管渗透等能力，可以通过调控氧化应激反应对JNK相关的疾病产生显著的干预效果。本文介绍了植物黄酮通过调控JNK通路干预氧化应激相关疾病的研究进展，为今后的研究和应用提供借鉴。     

卵转铁蛋白对树突状细胞功能成熟的影响

目的：探究卵转铁蛋白（ovotransferrin,OVT）对树突状细胞（dendritic cells,DCs）功能成熟的影响。方法：通过混合淋巴反应检测OVT对DCs刺激T淋巴细胞增殖能力的影响,酶联免疫吸附分析（enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA）检测DCs上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素12p70（interleukin-12p70,IL-12p70）和IL-10细胞因子含量,Western blotting检测胞外信号调节激酶（extracellular signalregulated kinase,ERK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen activated protein kinase,p38 MAPK）和c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）信号蛋白表达量。结果：OVT可以提高DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力,并诱导DCs分泌TNF-α以及IL-12p70,且呈一定的剂量依赖关系。OVT可能是通过激活JNK和p38 MAPK信号通路以及抑制ERK信号通路上调细胞因子TNF-α、IL-12p70表达,从而促进DCs成熟。结论：OVT能促进DCs功能成熟,对机体的免疫具有调节作用。     

施氏假单胞菌中不同细胞组分的脂肪酶合成活性研究

本研究以多穗柯为材料,采用同时蒸馏萃取法（SDE）提取挥发性组分,通过气质联用仪（GC-MS）分析挥发性组分组成,并以Hepa1c1c7小鼠肝癌细胞模型,以细胞存活率大于50%,诱导醌还原酶（QR）活性等于或大于2为活性指标,研究多穗柯挥发性组分及其主要单体物质的抗癌活性。结果显示,GC-MS共鉴定出80种多穗柯挥发性物质,占总挥发性组分相对百分含量的92.56%,其中酮类、醇类和醛类物质是多穗柯挥发性组分的主要类型,其主要成分有香叶基丙酮、β-紫罗酮、壬醛和桉油烯醇等。抗癌活性鉴定表明,多穗柯挥发性组分的浓度为(27.50±0.10) μg/mL时可诱导QR活性达到倍增,具有较强的抗癌活性;其中芳樟醇、香叶基丙酮和壬醛三个主要挥发性单体成分诱导QR活性达到倍增的浓度分别为(54.53±0.10) μg/mL、(283.10±0.10) μg/mL和(297.77±0.12) μg/mL。     

琼胶寡糖对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用

目的:研究琼胶寡糖对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用。方法:采用傅里叶红外光谱法、核磁共振和高效液相色谱法解析琼胶寡糖的分子结构;采用LPS诱导巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,测定琼胶寡糖对RAW264.7细胞活力、细胞内一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和活性氧簇(ROS)水平的影响;采用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶p38的表达和磷酸化水平。结果:分子结构鉴定结果显示琼胶寡糖具有β构型半乳糖糖环结构,分子质量范围为1 065.5~1 308.2 u。琼胶寡糖可以提高LPS诱导巨噬细胞系RAW264.7炎症反应后的细胞活力,在0~250 μg/mL剂量下呈浓度依赖性地降低细胞内NO、TNF-α和ROS水平,对LPS诱导MAPK家族激酶JNK、ERK、p38磷酸化水平的升高具有抑制作用。结论:琼胶寡糖能够抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应,可能与阻碍MAPK信号转导有关。     

草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究草苁蓉乙醇提取物（Boschniakia rossica ethanol extract,BREE）对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法检测BREE对HepG2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的核内转移。结果：BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论：BREE对H2O2所致HepG2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。     

草苁蓉多糖对HepG2细胞氧化应激的抑制作用

研究草苁蓉多糖(BRPS)对过氧化氢(H_2O_2)所致HepG2细胞氧化应激的抑制作用。以HepG2细胞为研究对象,通过H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞存活率;比色法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)活化水平。结果表明,BRPS在质量浓度12.5 mg/L~50 mg/L范围内对HepG2细胞存活率无显著影响,对细胞安全。而H_2O_2诱导使HepG2细胞存活率和抗氧化能力下降,细胞内ERK和JNK磷酸化水平升高。与H_2O_2模型组相比,BRPS预处理可提高细胞存活率;降低培养液中LDH、AST和ALT活性;降低细胞内MDA含量,升高细胞中SOD活性和GSH含量,降低细胞内ERK和JNK磷酸化水平。提示,BRPS对H_2O_2所致HepG2细胞氧化应激具有抑制作用,减轻其细胞损伤。     

溪黄草多酚的抗氧化活性

对溪黄草中的多酚提取物的抗氧化性进行了研究。通过DPPH自由基清除实验、过氧化氢清除实验、还原力实验、抑制β-胡萝卜素褪色实验以及抑制亚油酸过氧化实验,分别研究了溪黄草多酚与抗坏血的抗氧化能力。结果表明:溪黄草多酚提取物具有良好的抗氧化能力,其清除DPPH自由基、清除过氧化氢、抑制亚油酸过氧化的IC50值分别为5.00、42.51与66.58μg/mL,高于抗坏血酸相应的IC50值,即5.99、56.74与94.83μg/mL。表明在试验范围内,溪黄草多酚的抗氧化活性强于抗坏血酸。     

溪黄草不同溶剂提取物中总二萜含量的测定

对映-贝壳杉烷型二萜化合物是溪黄草中具有抗癌活性的主要功效成分。本文提出了测定溪黄草不同溶剂提取物总二萜含量的一种简单可行的方法,即紫外-分光光度法。该法以冬凌草甲素为标准品,检测波长为237nm,线性范围5.05-50.50mg/l,线性关系良好(r=0.999),相对标准偏差<2%。该法操作简便稳定,能够准确测定溪黄草原料药和制剂中总二萜含量。实验结果显示,乙醇提取率最高,达2.07%。     

大孔树脂对溪黄草多酚吸附分离的工艺优化

以溪黄草多酚为原料,通过静态吸附和解吸实验对10种大孔树脂进行筛选,确定AL-1为最优吸附树脂。通过静态与动态相结合的方法,确立AL-1树脂对溪黄草多酚的最佳吸附/解吸工艺条件。结果表明,溪黄草多酚提取液的最佳吸附条件为:上样总酚质量浓度为520μg/mL,上样液pH为4,吸附流速为0.8mL/min;最佳洗脱条件为:乙醇体积分数80%,流速0.5mL/min。     

溪黄草多酚的超声提取及其抗氧化性的研究

采用正交实验设计对溪黄草多酚的超声提取工艺条件进行优化。通过Folin-Ciocalteu法对提取液的总酚进行测定。考查了乙醇浓度、料液比、提取温度、超声功率、提取时间等五个因素对溪黄草多酚超声提取率。结果表明:溪黄草多酚超声提取的最佳工艺条件为:乙醇体积分数60%,料液比(g:mL)1:10,提取温度40℃,超声功率250W,提取时间25min,在最佳工艺条件下多酚提取率达6.81%±0.11%。DPPH抗氧化实验结果显示溪黄草多酚具有明显的DPPH自由基清除能力,其IC50值为38.47μg/mL。     

溪黄草提取物成分预试及对猪油的抗氧化作用研究

用水、95％乙醇和石油醚对溪黄草进行提取，根据颜色反应及沉淀反应初步判断所含化学成分的类型，研究各提取物对猪油的抗氧化作用。结果表明：溪黄草水提取物具有一定的抗猪油自动氧化能力，且作用强于抗坏血酸，而95％乙醇和石油醚提取物对猪油的抗氧化作用不明显。     

溪黄草根不同溶剂提取物的抗氧化性

考察7种溶剂(蒸馏水、60%乙醇、无水乙醇、甲醇、丁醇、氯仿和乙酸乙酯)对溪黄草根中可溶出成分的提取效果,研究7种提取物总酚含量、清除DPPH自由基能力、清除ABTS+ ·能力和螯合Fe2+的能力。结果表明：水和60%乙醇对溪黄草根中可溶出成分的提取效果最好;60%乙醇提取物总酚含量最高,清除DPPH自由基能力最高(超过迷迭香提取物、竹叶提取物、抗坏血酸棕榈酸酯),清除ABTS+ ·能力最好(超过迷迭香提取物),并具有较强的螯合Fe2+能力(超过迷迭香提取物、竹叶提取物、抗坏血酸棕榈酸酯)。     

Induction of phase II enzyme,quinone reductase,in murine hepatoma cells in vitro by grape extracts and selected phytochemicals

Consumption of fruits and vegetables has been associated with a lowered risk of developing chronic diseases such as cardiovascular disease and cancer. Grapes are rich in phenolics, flavonoids, and resveratrol, which have been suggested to be responsible for the health functions. Thirteen grape varieties and eighteen common phytochemicals were evaluated for their ability to induce mammalian phase II detoxification enzymes – quinone reductase (QR) in Hepa1c1c7 murine hepatoma cells. Amongst all the grape varieties analyzed, Cabernet Franc showed the highest inducible effect on QR with the lowest induction concentration. Quercetin, genistein, and resveratrol exhibited strong QR induction activity amongst the eighteen phytochemicals. The proliferation of Hepa1c1c7 cells was significantly inhibited in a dose-dependent manner after exposure to all of the grape extracts and some of the phytochemicals. The selective index (SI) of grapes and phytochemicals as anticarcinogenic potency was assessed.     

气相色谱- 质谱法分离鉴别溪黄草叶中的弱极性有机组分

利用气相色谱- 质谱法分析石油醚相及乙酸乙酯相中弱极性有机组分是否含有与抗氧化性有关的化合物。通过制备溪黄草叶60% 乙醇提取物,并采用溶剂分离法,从溪黄草叶提取物中分出4 个组分：石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相、水相。气相色谱- 质谱法共鉴定出15 种成分,其中大多数为高级脂肪酸,尤其以棕榈酸、亚麻酸甲酯含量最为丰富。虽从溪黄草叶石油醚相中鉴定出2,2'- 亚甲基双-(4- 甲基-6- 叔丁基苯酚)(工业强抗氧化剂),但其含量很低。     

Screening for Phase II Enzyme-inducing and Antioxidant Activities of Common Vegetables

ABSTRACT: Quinone reductase (QR)-inducing activity of aqueous and ethanolic extracts of common vegetables was determined using a murine hepatoma (Hepa 1c1c7) cell bioassay. QR induction observed for aqueous extracts reached 13-fold for corn, 8-fold for kale, and 5-fold for snap beans. QR induction of ethanol extracts reached about 3-fold for both garlic and snap beans, and about 2-fold for both red beetroots and kale. These aqueous extracts were effective inhibitors (kale ∼ red beetroots > corn ∼ green beans > garlic) of the generation of 2-2'-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) radical cation (ABTS^•+) by metmyoglobin and H₂O₂, whereas the ethanolic extracts were not inhibitory. Aqueous extracts reduced pre-formed ABTS^•+ more effectively (> 95% inhibition) than did ethanolic extracts (∼50 to 90% inhibition). All vegetable extracts inhibited oxyradical-mediated β-carotene bleaching, where kale and red beetroot extracts exhibited the strongest protective effect.