胶体金免疫层析法定量检测猪肉中克伦特罗

建立了基于T/C比值的胶体金免疫层析法快速定量检测猪肉中克伦特罗残留的新方法。胶体金免疫层析试纸条的定量检测线性范围为0.1～1.5 ng/g,检测猪肉中克伦特罗残留的最低检测灵敏度为0.19 ng/g。比较了5种猪肉组织样本中克伦特罗的简便提取方法,其中采用0.02 mol/L,含2.8%NaCl的HCl溶液抽提猪肉样品2次的提取方案,克伦特罗的平均回收率达到76.7%,变异系数为7.4%。实际样本加标回收实验显示,加标量为0.5、1.0、2.0及3.0 ng/g时,胶体金试纸条检测回收率分别为(60.4±12.8)%,(70.24±4.2)%,(75.9±4.9)%,(71.1±5.0)%。与传统ELISA方法比对,结果显示2种方法具有较好的相关性(R2=0.9136)。以上实验结果证实,基于T/C比值法的胶体金免疫层析试纸条可用于猪肉组织样品中克伦特罗的快速及定量检测。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1~200ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%~105.0%之间。     

胶体金免疫层析法快速定量检测猪肝中喹乙醇残留

本文研究了胶体金免疫层析试纸条快速定量检测猪肝中喹乙醇残留的方法。利用胶体金免疫层析技术,制备了喹乙醇胶体金试纸条,检测了其特异性,并建立了T/C比值法进行定量检测猪肝中喹乙醇的残留。制备的试纸条可以在15min内完成定性和定量检测,与卡巴氧、乙酰甲喹和3-甲基-喹噁啉-2-羟酸几乎无交叉反应。当肝中喹乙醇质量浓度在1²00ng/mL范围内,试纸条有较好的线性关系,最低检测限为6.83ng/mL。阴性加标实验结果表明,喹乙醇浓度在25、50、100ng/mL时,试纸条的回收率在90.9%¹05.0%之间。      

荧光微球免疫层析法定量检测牛乳中酪蛋白

目的研究用荧光微球免疫层析法定量检测牛乳中的酪蛋白。方法本文以酪蛋白为抗原,免疫新西兰大白兔制备抗酪蛋白的多克隆抗体,将纯化后的多克隆抗体通过EDC介导法与荧光微球进行偶联,将滤纸、样品垫、结合垫、NC膜和吸水纸组装成试纸条,用此荧光微球免疫层析法定量检测牛乳中的酪蛋白。结果试纸条在25 min内就能判定结果,最低检测限为100 ng/mL,该方法与BSA、OVA均无交叉反应,具有很好的特异性。检测酪蛋白浓度为100.0、500.0、1000.0 ng/mL的样品,试纸条的批内回收率分别为(89.03±5.2)%、(93.47±6.9)%和(91.2±7.8)%,批间回收率分别为(87.69±6.2)%、(92.73±8.3)%、(89.82±8.5)%。结论初步建立了一种快速、方便、高灵敏度的荧光微球免疫层析方法用以检测牛乳制品中的过敏原——酪蛋白。     

胶体金免疫层析法定量检测鱼和虾中苯巴比妥残留

建立了一种快速定量检测水产品鱼和虾中苯巴比妥残留的胶体金免疫层析方法。采用胶体金纳米粒标记苯巴比妥单克隆抗体,研究了胶体金免疫层析条件如标记体系p H值、标记抗体浓度、检测T线包被原浓度、质控C线羊抗鼠Ig G浓度、样品前处理方法等对胶体金灵敏度的影响,并借助胶体金试纸条读数仪进行定量检测。结果表明:方法检出限为0.07 ng/mL,线性范围0.08～0.94ng/m L,裸眼消线值(cut-off值)为10.0 ng/mL。方法特异性良好,与巴比妥、戊巴比妥、异戊巴比妥三种结构类似物交叉反应率小于10%。选择罗非鱼、草鱼、鲈鱼和虾进行添加回收试验,样品回收率在73.50%～114.17%之间,相对标准偏差小于15%,且结果与UPLC-MS/MS法一致。该方法具有准确、灵敏、简便、快速等特点,非常适用于水产品鱼和虾中苯巴比妥残留现场快速筛查。     

CdTe量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗

以巯基乙酸作为稳定剂,利用水热反应制备了水溶性的高荧光CdTe量子点,量子产率为54.961%。研究了该量子点在1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基丁二酰亚胺的作用下与抗克伦特罗抗体的共价连接。结果表明：该量子点与克伦特罗抗体连接后体系的荧光强度和吸光度均增强,且峰位均未发生明显移动,F/P值为4.20。将该偶联反应物CdTe-Anti CLE pAb作为荧光标记物,组装出一种用于检测克伦特罗的荧光免疫试纸条,最低检测限达0.5 μg/L,与酶联免疫吸附法进行对比,该试纸条能够实现对克伦特罗的快速检测。     

胶体金免疫层析法检测食用肉中的氨基脲

制备特异性胶体金免疫层析试纸条,检测肉类食品中氨基脲的残留。用活性酯法将氨基脲(SEM)衍生物CPSEM交联到牛血清白蛋白(BSA)上制备完全抗原CPSEM-BSA,将硫酸铵沉淀法纯化的抗CPSEM单克隆抗体标记到柠檬酸三钠还原法制备的胶体金,通过优化C/T线及金标抗体工作浓度,制备检测氨基脲的胶体金免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度、特异性、准确性和稳定性进行测定。制备的试纸条检测5min后即可用肉眼观察到结果;对SEM的最低检测限达0.72ng/ml;除与呋喃西林有弱交叉反应外,与其他同类物均无交叉反应;该试纸条对猪肉中添加的SEM检测结果与酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结果呈现了很好的相关性;试纸条在室温下保存7周后不会失效。通过制备针对SEM的试纸条所建立的胶体金免疫层析法(ICA),快速简便、灵敏度高、特异性强、准确性和稳定性好,基本能达到商用检测要求。     

免疫荧光层析法快速检测猪尿中克伦特罗含量

本研究使用克伦特罗免疫荧光层析试剂盒,基于免疫荧光层析原理,配套使用广州万孚生物技术股份有限公司研制的荧光定量检测仪,实现猪尿中所含克伦特罗的定量检测,并对试纸条的灵敏度、准确度与精密性、类似化学药物干扰、保存期等相关性能进行了评价。实验证明检测限达0.26μg/L,与结构类似化学药物的交叉反应小于0.20%,同时验证了本试剂盒在1年的保存期限有效。整个检测过程只需20 min左右。     

盐酸克伦特罗快速检测胶体金试纸的研制

为建立快速检测猪尿等样品中盐酸克伦特罗（CL）的胶体金免疫层析方法,用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了胶体金,将其标记抗CL单克隆抗体,制备了金标抗体;以CL-人血清白蛋白（HSA）为包被抗原、羊抗鼠IgG为质控线二抗,制成胶体金试纸。优化了胶体金颗粒粒径、标记抗体用量和pH值等各项参数,最终确定胶体金粒径为15 nm、每毫升胶体金溶液中添加20 ?g抗体、胶体金溶液pH值为7.4、金标抗体稀释液为添加0.1 %牛血清白蛋白（BSA）的0.05 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.4）、金标抗体喷涂量为50 ?L/cm2、CL-HSA和羊抗鼠IgG的包被浓度分别0.5 mg/mL和2 mg/mL。研制的CL胶体金试纸检测限为3 ng/mL,与莱克多巴胺、沙丁胺醇等六种?-兴奋剂类药物无交叉反应。对42份猪尿样品的检测结果与市售酶联免疫（ELISA）试剂盒的符合率为100 %。试纸无需仪器辅助,操作简便,可在5 min内完成,适用于对CL残留进行现场检测。     

盐酸克伦特罗在肉制品中的危害及其检测方法研究进展

盐酸克伦特罗抑制脂肪合成,增加瘦肉率,被非法作为饲料添加剂使用。人食用含有盐酸克伦特罗的肉制品会危害身体健康。介绍盐酸克伦特罗的理化性质及中国、欧盟、日本对其残留量的要求,总结残留在肉及肉制品中的盐酸克伦特罗的检测方法。     

蓝色乳胶微球标记喹诺酮免疫层析试纸条的研制

喹诺酮类药物作为广谱抗菌药被广泛应用在畜牧养殖业,但如果用药过程使用不规范就会导致兽药残留于动物源性食品中,对于消费者的食用安全造成潜在的隐患。因此,建立一种检测喹诺酮类药物快速、简便的检测方法成为必然。本实验采用蓝色乳胶微球作为标记材料,标记诺氟沙星单克隆抗体,优化建立蓝色乳胶微球标记的喹诺酮类免疫层析试纸条方法,为快速大通量检测食品中兽药残留提供理论支持。通过优化试纸条的各项条件,方法检出限为1μg/L。选取可能存在兽药残留的猪肉、虾、鸡肉样品,进行添加回收实验,样品检出限均为10μg/kg。建立的方法可检测环丙沙星,恩氟沙星,氟罗沙星,麻保沙星,依诺沙星,罗氟哌酸6种喹诺酮类兽药残留,试纸条稳定性良好,有效期至少为三个月。     

荧光微球免疫层析方法定量检测水产品中4 种硝基呋喃代谢物

采用荧光微球标记抗体作为信号探针,建立荧光微球免疫层析检测方法（fluorescent microsphere immunochromatographic assays,FMICA）,并应用于水产品中4 种硝基呋喃类兽药代谢物残留量的快速定量检测。结果表明：呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃西林代谢物FMICA试纸条的检出限分别为0.004（以1-氨基-乙内酰脲衍生物计算）、0.01（以5-吗啉-3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算）、0.008（以3-氨基-2-恶唑烷酮衍生物计算）、0.009（以氨基脲衍生物计算）μg/L;检测线性范围分别为0.005～5、0.01～10、0.01～10、0.01～10 μg/L;最佳检测时间为10 min,方法特异性良好。水产样品经衍生化处理后,经检测硝基呋喃代谢物的加标回收率在75.88%～104.81%之间,变异系数均小于15%。FMICA方法操作简单、快速、成本低,适用于水产品中硝基呋喃类兽药代谢物快速定量检测。     

利用表面等离子体共振技术检测猪尿中盐酸克伦特罗

利用表面等离子体共振技术检测猪尿液中的盐酸克伦特罗。将盐酸克伦特罗-牛血清白蛋白偶联物作为传感芯片特异识别探针结合到生物芯片表面,通过溶液竞争法结合表面等离子体共振技术检测盐酸克伦特罗。标准曲线被建立并且检测盐酸克伦特罗的检测限能够达到1.03 ng/m L,与莱克多巴胺、沙丁胺醇无交叉反应,具有良好的特异性,猪尿的回收率为98.2%~107.0%,变异系数在可接受范围内。所采用的表面等离子体共振方法对于检测猪尿中的盐酸克伦特罗具有灵敏性,准确性,精密性。     

磁性化学发光酶免疫法检测猪肉中的氯霉素

建立以磁性微球为固定相的化学发光酶免疫法,定量检测猪肉中的氯霉素含量。此方法为在微孔中加入羊抗鼠磁性微球、样品和抗体,反应一定时间,之后补加酶标抗原,继续反应一定时间后清洗磁珠,加入发光液反应10 min后分析测定。通过磁珠用量、酶标抗原量、抗体量和反应模式的优化,成功建立了一种高灵敏度、高准确度的检测猪肉中氯霉素的磁性化学发光酶免疫方法。该方法的检出限为0.013μg/kg,线性范围在0.060~2.421μg/kg之间,回收率在85.24%~93.57%之间,相对标准偏差小于11.5%。     

中空纤维膜三相液相微萃取法测定猪尿及牛奶中的盐酸克伦特罗

本文建立了中空纤维膜三相液相微萃取(hollow fiber based liquid-liquid-liquid microextraction,HF-LLLME)富集浓缩猪尿及牛奶中的痕量盐酸克仑特罗,后续采用高效液相色谱/紫外(high performance liquid chromatography with a ultraviolet detector,HPLC/UV)对其进行定量分析。对影响HF-LLLME萃取效率的因素如有机溶剂种类、选择有机萃取时间、搅拌速率以及盐效应等进行了优化,最终溶剂为甲苯,萃取时间为30 min,搅拌速率为4000 r/min,给予相中不加盐,在最优条件下,考察了该方法分析性能,结果表明:该方法在1.5~1000 μg/L内具有良好的线性(r=0.9980),方法检出限(S/N=3)、定量限(S/N=10)分别为0.5和1.5 μg/L,HF-LLLME带来的高倍浓缩效率将HPLC/UV测定克仑特罗的灵敏度提高约2个数量级。萃取过程相对标准偏差(n=7)RSD=8.8%,对猪尿和牛奶分别进行5、50、500 μg/L三个水平的加标回收实验,回收率为:猪尿87.0%~102.4%(相对标准偏差为5.1%~9.8%),牛奶80.2%~94.4%(相对标准偏差为2.7%~6.4%)。该方法富集效率高、操作简单、环保、经济、可靠,适用于定量分析尿样及牛奶等中痕量的盐酸克伦特罗。     

一种新型定量检测恩诺沙星量子点免疫层析方法的建立

恩诺沙星作为一种应用较为广泛的抗生素,因在实际抽检中出阳率较高引起了广泛的重视。本研究建立了一种可以快速定量检测恩诺沙星,采用量子点进行标记和示踪的免疫层析方法。通过对新型的纳米荧光材料量子点结合抗原抗体等活性材料的技术研究、样本前处理试剂的研发、浓度的筛选优化等技术实现量子点材料与食品基质的配适,建立定量检测恩诺沙星免疫层析的平台。通过对试剂盒整体的相关优化,本检测方法线性范围为2~1000 ng/mL,最低检测限为1.80 ng/mL,精密度可控在10%以内,热加速稳定性为37 ℃可稳定放置10 d,性能优越。与传统液相色谱方法比较,简便快捷,整体检测时间可控在20 min内,检测结果相关性较好,相关系数为0.98。本研究弥补国内对量子点与免疫层析技术相结合定量检测食品类抗生素残留方面研究的空缺,可实现大批量现场原材料的快速筛查,推动食品快检技术的发展。