多胺柔性链改性壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶

用反相悬浮交联法制备了单分散壳聚糖微球树脂,以其作为固定化载体基体,经氨基保护、C6羟基环氧化后接枝亲水性多乙烯多胺,制备了粒径为220～300μm、具有较高机械强度的多胺柔性链改性壳聚糖载体。采用该载体对木瓜蛋白酶在pH8.0缓冲液中室温下固定25h,固定化酶表观活力最高可达313U.g-1,活力回收率最高达61.5%,是采用未经多胺分子修饰的壳聚糖微球固定化的2.3倍。该柔性固定化酶的最适温度为65℃,最适pH为8.0,连续使用6～7次后仍保持原来活力的一半。      

多胺柔性链改性壳聚糖微球固定化木瓜蛋白酶

用反相悬浮交联法制备了单分散壳聚糖微球树脂,以其作为固定化载体基体,经氨基保护、C6羟基环氧化后接枝亲水性多乙烯多胺,制备了粒径为220～300μm、具有较高机械强度的多胺柔性链改性壳聚糖载体。采用该载体对木瓜蛋白酶在pH8.0缓冲液中室温下固定25h,固定化酶表观活力最高可达313U.g-1,活力回收率最高达61.5%,是采用未经多胺分子修饰的壳聚糖微球固定化的2.3倍。该柔性固定化酶的最适温度为65℃,最适pH为8.0,连续使用6～7次后仍保持原来活力的一半。     

壳聚糖微球的制备及其对脂肪酶的固定化研究

采用反相悬浮法制备壳聚糖微球,并以此作为载体固定了脂肪酶。对壳聚糖微球的制备条件、微球的性能及其固定化脂肪酶的条件进行了探讨,结果表明,壳聚糖微球成球效果最好的制备条件是壳聚糖溶液与分散相液体石蜡体积比为1∶2,吐温-80使用量为15mL,壳聚糖浓度为4%,所制得的壳聚糖微球具有良好的热稳定性、耐酸碱性和抗氧化性;壳聚糖微球固定化脂肪酶的最佳条件为戊二醛用量0.6mL,交联时间60min,加酶量1mg/g载体,pH值为7。采用壳聚糖微球固定化脂肪酶具有较高的酶活回收率,为60%     

食品安全级固定化载体-壳聚糖微球制备的条件

研究壳聚糖固定化微球载体制备的最佳条件,为进一步用食品安全级载体——壳聚糖固定化乳糖酶提供理论基础。用凝聚/沉淀法制备壳聚糖微球载体。结果表明,20g/L壳聚糖(1%冰乙酸溶液),以距凝结液面20～30cm滴入终浓度20%NaOH和30%甲醇的凝结液中,液滴刚滴入时不搅拌。该条件下制得直径为(4.00±0.06)mm,平均重量(30.80±0.02)mg/个,每个壳聚糖载体的比表面积为4.08×10-4 m2/g,形状完整,大小均一,具有弹性。     

壳聚糖固定化木瓜蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,戊二醛作为交联剂,采用载体交联法制备固定化木瓜蛋白酶,并研究了固定化木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳固定化条件为给酶量为40～50mg/g,于pH7.5,25～30℃下,0.4%～0.5%的戊二醛溶液交联12h,所得的固定化木瓜蛋白酶的活力回收率平均达61.6%。     

壳聚糖微球固定化胰蛋白酶的研究

以壳聚糖为载体,将胰蛋白酶固定化,通过优化其制备条件提高活力回收。首先利用反相悬浮交联法制得壳聚糖微球并用于胰蛋白酶的固定,后采用中心复合设计及响应面分析法优化固定化条件,结果表明,戊二醛体积分数为16.2%,分散时间为98 min,给酶量1 mg/g载体时,固定化胰蛋白酶的活力和活力回收率可达到42.02 u/g和73.32%。     

壳聚糖胶囊法固定化木瓜蛋白酶的研究

采用壳聚糖与羧甲基纤维素钠形成胶囊将木瓜蛋白酶固定化,研究了固定化木瓜蛋白酶的最佳固定化条件。结果表明:木瓜蛋白酶的最佳固定化条件为:给酶量为50mg/100mL、壳聚糖浓度为0.2%、pH=7.5、50℃温度下,所得固定化木瓜蛋白酶活力回收率可达69.8%。     

壳聚糖微球固定化葡萄糖氧化酶的研究

以壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,固定葡萄糖氧化酶,对葡萄糖氧化酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1g壳聚糖微球与5ml5%戊二醛交联,固定6mg葡萄糖氧化酶,在此条件下酶活力回收可达60%。固定化酶的最适温度为50℃,最适pH为6.0,通过Lineweaver-Burk作图,确定动力学参数Km值为18.3mmol/L,表观米氏常数较游离酶有所降低,固定化酶的热稳定性较游离酶明显提高,该固定化酶具有良好的操作及保存稳定性。     

壳聚糖微球固定化葡萄糖氧化酶的研究

以壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,固定葡萄糖氧化酶,对葡萄糖氧化酶的固定化条件及固定化酶的各种性质进行了研究,确定了酶固定的最佳条件为0.1g壳聚糖微球与5ml5%戊二醛交联,固定6mg葡萄糖氧化酶,在此条件下酶活力回收可达60%。固定化酶的最适温度为50℃,最适pH为6.0,通过Lineweaver-Burk作图,确定动力学参数Km值为18.3mmol/L,表观米氏常数较游离酶有所降低,固定化酶的热稳定性较游离酶明显提高,该固定化酶具有良好的操作及保存稳定性。      

壳聚糖微球固定化β-半乳糖苷酶

以壳聚糖为载体、戊二醛为交联剂固定化β-半乳糖苷酶,通过单因素和正交实验探讨了固定化载体和固定化条件对酶固定化的影响。结果表明,固定化载体壳聚糖(脱乙酰度90%以上)的最适分子质量和体积分数分别为3×105和2%,制备的壳聚糖载体具有良好的成球性和机械强度。采用交联方式将β-半乳糖苷酶固定在壳聚糖微球上,在单因素试验的基础上,进行正交试验确定固定化条件为:交联剂戊二醛浓度和交联时间分别为10 g/L和1.0 h,酶浓度和固定化时间分别为1.5 mg/m L和12 h,最终制备的固定化酶的活力回收率达到70.5%。同时该固定化酶具有良好的储存稳定性和操作稳定性,具有一定的应用价值。     

磁性微球研究进展及其在固定化酶中的应用

磁性高分子微球是最近发展起来的一种新型功能高分子材料,它作为酶、细胞、药物等的载体被广泛地应用到了生物工程、细胞学和生物医学等领域.本文对磁性高分子微球的研究现状进行了综述,介绍了磁性微球的制备、性质,重点讨论了其用于酶的固定化研究,各种固定化酶的方法并指出了该领域今后的研究方向.     

磁性微球固定化酶工艺研究进展

磁性微球固定化酶就是利用磁性微体作为载体进行酶的固定化,由于其具有环保、酶重复利用效果好和降低生产成本等优点,近几年已经成为研究的焦点。本文重点对磁性微球固定化酶制备工艺的研究现状、应用及发展前景进行阐述,为同行们今后开展研究提供参考。     

柔性固定化木瓜蛋白酶的制备及在酶解波纹巴非蛤中的应用

在壳聚糖膜的表面接上分子链较长的双醛淀粉作为柔性固定化酶的载体,将木瓜蛋白酶固定在该载体上制成柔性固定化木瓜蛋白酶,并应用于酶解波纹巴非蛤制备小分子肽。通过考察温度、pH 值、加酶量和固定化时间等条件对柔性固定化木瓜蛋白酶的酶活、酶活回收率的影响,确定最优固定化条件。结果表明：双醛淀粉用量0.8mg/g 壳聚糖、柔性固定化酶温度25℃、柔性固定化酶时间20h、加酶量40mg/g 壳聚糖、pH8.0 条件下所得的固定化酶酶活最高,酶活回收率63.35%。将该柔性固定化酶在酶解温度40℃、pH7.0、加酶量1.0%、酶解时间4h条件下制备波纹巴非蛤小分子肽,产率为3.4055%。     

超声对包埋-交联法固定化木瓜蛋白酶催化活性的影响

研究超声对包埋-交联法固定化木瓜蛋白酶催化活性的影响。将醋酸纤维素铺制成膜,包埋木瓜蛋白酶;以戊二醛为交联剂,进行交联反应,制得固定化木瓜蛋白酶。分别研究超声频率、超声功率和超声时间对固定化酶活性的影响,再由均匀试验得到超声强化固定化木瓜蛋白酶催化活性的最优条件。经均匀试验确定最优超声条件为135kHz、0.05W/cm2、25min,相对酶活力为197.22%。验证实验证明最优的超声条件下测得固定化木瓜蛋白酶的相对酶活力为182.68%,相对标准偏差为7.37%,没有显著差异。     

磁性淀粉微球固定化脂肪酶的研究

磁性淀粉微球为载体,采用戊二醛交联法固定化脂肪酶。磁性淀粉微球的主要组成是淀粉和磁粉。结果得到,磁性固定化脂肪酶的总活力、蛋白载量、比活、活性回收率、最适温度和最适pH值分别为4897.15U/g、50.59mg/g、98.58U/mg、72.73%、45℃和8.0。Ca2+、Na+和Mg2+对固定化脂肪酶和自由酶有激活作用,作用大小顺序为Ca2+>Mg2+>Na+。Cu2+和Fe2+对固定化脂肪酶和自由酶有抑制作用,Cu2+的作用尤其明显。脂肪酶被固定化后其热稳定性(在水介质和正己烷中)、操作稳定性、pH稳定性均比自由酶明显提高。固定化脂肪酶和自由酶在4℃下,pH8的PBS和正己烷中保存34d后,其相对活力分别是78.3%和98.8%。     

超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶条件确定及其对凝胶载体结构的影响

为研究超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶酶活性与超声对凝胶结构影响之间的联系。在单因素实验基础上,通过均匀试验法优化得到超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶酶活性的最佳条件为:40 kHz、0.45 W/cm²、20 min、70 ℃,预测相对酶活力为342.64%。进一步研究不同超声频率、功率对海藻酸钠凝胶结构的影响,利用电子显微镜与图像数字化处理技术定量评价凝胶结构变化程度。发现超声处理对凝胶结构的影响趋势与超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶活性趋势一致,且在最佳超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶活性条件下,凝胶结构变化最显著。表明超声强化海藻酸钠固定化木瓜蛋白酶活性与超声对凝胶结构的影响有着密切关系。     

海藻酸钙/硅胶/羧甲基壳聚糖复合微球固定化柚苷酶的研究

柚苷酶可对柑橘类水果中的柚皮苷等苦味物质进行水解,从而实现果汁的脱苦或普鲁宁等医药中间体的制备。作者采用滴入法制备具有环境友好且易获得特性的海藻酸钙/硅胶/羧甲基壳聚糖复合微球,以此作为载体,用于柚苷酶的固定化研究。结果表明,在硅胶/羧甲基壳聚糖质量比1.0∶1.5、交联时间2.0 h、固定化温度25℃、偶联时间4 h、给酶量465.6 U/mL的实验条件下,复合微球固定化柚苷酶的比活力、载酶率和酶活力回收率分别可达203.33 U/g、36.80%和62.15%。同时,相比游离柚苷酶,该复合微球固定化柚苷酶对pH和温度变化均显示出更好的稳定性,且更易操作和储藏。此外,海藻酸钙/硅胶/羧甲基壳聚糖复合微球固定化柚苷酶的应用能够进一步拓宽柚苷酶在食品、医药等领域的深入发展。     

磁性壳聚糖微球固定化黄嘌呤氧化酶及其酶学性质的研究

本文利用化学共沉淀法制备Fe_3O_4磁性颗粒,并以此为磁核通过乳化交联法制备磁性壳聚糖微球,以环氧氯丙烷对微球表面进行活化,用于黄嘌呤氧化酶的固定化研究。以微球表面的环氧基密度为活化指标,确定了活化过程的最适工艺条件:环氧氯丙烷体积分数为40%,Na BH4浓度为0.60 g/L,NaOH浓度为1.20 mol/L。对微球进行结构表征,结果表明:壳聚糖成功包裹了Fe_3O_4磁性粒子,且已活化微球的表面具有环氧基活性基团;Fe_3O_4磁性粒子、未活化和已活化磁性壳聚糖微球的中径分别为2.16、20.30和24.69μm。活化结束后,将黄嘌呤氧化酶固定在磁性微球上。以酶活为指标,确定最适固定化工艺为:时间1 h,温度30℃,pH8.0。对固定化黄嘌呤氧化酶的酶学性质研究,结果表明:酶的最适作用温度为48℃,最适作用pH为8.5,酶具有良好的热稳定性、pH稳定性及操作稳定性。     

超临界CO2抗溶剂法制备木瓜蛋白酶超微颗粒

研究超临界CO2抗溶剂结晶技术制备木瓜蛋白酶超微颗粒的工艺条件,确定用于溶解木瓜蛋白酶的最佳溶剂及最佳体积分数。结果表明：以二甲基亚砜为溶剂时,所得的木瓜蛋白酶微粒产量与溶剂体积分数成正相关,酶活力与溶剂体积分数成负相关;以二甲基甲酰胺为溶剂所得的木瓜蛋白酶微粒产量较低、但活力较高,其中溶剂体积分数70%时,所得木瓜蛋白酶微粒的活力最高,达3484.691U/mg,远高于原料木瓜蛋白酶的酶活力400U/mg;以丙三醇为溶剂时,没有得到木瓜蛋白酶微粒。     

介孔分子筛MCM-48固定化木瓜蛋白酶性质的研究

以介孔分子筛MCM48为载体、戊二醛作交联剂对木瓜蛋白酶进行了固定化。实验结果表明,与游离酶相比,固定化酶的热稳定性有了显著的提高,其半衰期达到了2500min以上,是游离酶(80min)的30倍以上。固定化酶的pH稳定性和储藏稳定性也有了明显改善。此外,固定化酶还具有很好的操作稳定性,经过12d的连续酶解,酶活力仍保持在初始酶活力的70%以上。