盐制巴戟天多糖结构表征及其免疫活性

该研究采用水提醇沉法从盐制巴戟天中提取粗多糖（SMP）,经DEAE-52纤维素柱和葡聚糖凝胶Sephadex G 100柱分离纯化得到多糖（SMP-4）,采用红外光谱、高效凝胶渗透凝胶色谱、气相色谱和核磁共振波对SMP-4进行结构表征,并以RAW264.7巨噬细胞为模型,通过测定其细胞增殖活性和细胞因子分泌水平来评价其免疫活性。多糖结构分析表明,SMP-4是由阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖、核糖、木糖、葡萄糖和甘露糖组成的,摩尔比例为：0.55:0.23:0.16:0.03:0.02:0.01:0.01,分子量为1.32×105 u的多糖。SMP-4具有六种糖苷键,其中→3)-D-Araf-(1→占比最高,为58.35%。在免疫活性评价分析中表明,与对照组相比,在15.625~500.000 μg/mL质量浓度范围内不影响RAW264.7细胞的增殖,同时能显著地促进肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的分泌。SMP-4质量浓度为500 μg/mL时,RAW264.7细胞分泌的TNF-α质量浓度最高,为2 100.00 pg/mL（P<0.001）;在31.25 μg/mL质量浓度下,RAW264.7细胞分泌的IL-1β质量浓度最高,为14.50 pg/mL（P<0.05）。综上,SMP-4表现出良好免疫活性,具有成为一种天然的免疫调节剂的潜力。     

绣球菌子实体单组分多糖结构表征及其免疫活性

分离纯化绣球菌子实体多糖得到单一组分,研究其结构和免疫活性,探究绣球菌单组分多糖结构与免疫活性之间的关系。以绣球菌子实体粗多糖为原料,经HZ-830大孔树脂、DEAE-52和Sephadex-G 100分离纯化后得到单组分多糖,命名为SlP,采用高效凝胶渗透色谱、红外光谱、离子色谱、核磁共振、原子力显微镜、扫描电镜、刚果红染色等对SlP结构进行鉴定。用MTT法检测SlP对巨噬细胞RAW 264.7增殖的影响,中性红染色测定SlP对巨噬细胞的吞噬能力。取细胞上清液,检测上清液中巨噬细胞NO的生成量。收集细胞,提取总RNA,采用荧光定量RT-PCR测定巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-3、IL-10、IFN-βmRNA的表达量。结果表明SlP是一种由葡萄糖构成的β-葡聚糖,分子质量集中在1.04×104u,具有三螺旋结构,表观呈现大小、形状不一、无规则的碎片状,分子间呈现无规则的线团和岛屿状,链间缠绕并具有分支状结构。SlP在质量浓度1.95～31.25μg/mL范围能促进RAW264.7巨噬细胞增殖;在质量浓度为7.81μg/mL时,促细胞增殖能力最强;在质量浓度1.95～7.81μg/mL范围时,能显著提高巨噬细胞的吞噬能力、NO分泌量,增加细胞内TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-3、IL-10、IFN-β免疫因子mRNA的表达量,且呈剂量效应关系。SlP可作为一种良好的功能食品原料应用于食品工业上。     

滁菊多糖结构特性及其免疫活性研究

目的 分离纯化滁菊多糖(Chuzhou chrysanthemum polysaccharides, CCPS),对其进行结构解析,并研究其免疫活性。方法 以滁菊为原料,热水浸提,乙醇沉淀得到CCPS;通过快流速二乙氨基乙基-琼脂糖凝胶(diethylaminoethyl-sepharose fast flow, DEAE-FF)和葡聚糖凝胶G-100 (Sephadex G-100)层析柱分离纯化CCPS,得到中性多糖CCPS-1-1。用高效液相色谱法、紫外和红外光谱法、刚果红实验等进行CCPS-1-1结构解析,建立小鼠单核巨噬细胞(mousemononuclearmacrophagescells,RAW264.7)的免疫模型探究其免疫刺激活性。结果 CCPS-1-1主要由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸组成,具有三股螺旋结构。体外免疫活性实验表明,CCPS-1-1可以促进RAW264.7细胞的增殖和吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮(nitricoxide,NO)的分泌及细胞因子包括肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α,TNF-α)、白细胞...     

酶解糖化滇黄精多糖的结构表征及其免疫活性

该论文研究了酶解糖化下的滇黄精多糖结构和免疫活性,以探究酶解糖化下的黄精多糖结构特征及免疫活性的影响。结果表明,酶解糖化黄精多糖（SPKP）的多糖和还原糖含量分别为94.05%、4.1%。多糖结构分析表明,SPKP的红外光谱在1 016~1 147和931 cm-1处有吡喃糖特征吸收峰;单糖组成及摩尔比为阿拉伯糖:半乳糖:葡萄糖:甘露糖:果糖=0.032:0.117:0.419:0.048:0.383,重均分子量（Mw）为3 820 u。甲基化结果表明SPKP主要的糖苷键连接方式为→4)-Glcp-(1→,占比47.1%,分支度为34.1%,结合碘碘化钾和刚果红实验结果可以推测SPKP是一种含有复杂分支的三股螺旋多糖。RAW264.7细胞实验结果表明,酶解糖化黄精多糖在比较广的浓度范围内无毒性,均能促进细胞增殖,且有较高的细胞吞噬能力和NO水平,因此可以推测SPKP具有较好的免疫活性,且与其多糖结构有一定的关系。该研究可以为多糖与免疫活性的构效关系以及黄精新炮制方法的开发提供一定参考。     

黑木耳多糖的结构组成及其免疫活性研究

目的:对高温蒸汽浸提法提取得到的黑木耳多糖进行结构解析,并探究其在免疫功能方面的活性。方法:通过气相色谱(GC)、红外光谱(FT-IR)、刚果红实验等对其结构进行分析,建立RAW264.7巨噬细胞的免疫模型以探究其免疫刺激活性。结果:黑木耳多糖主要由鼠李糖、甘露糖和葡萄糖组成,其具有和免疫活性相关的β-构型糖苷键和三股螺旋构象。黑木耳多糖可以促进巨噬细胞的增殖,增强巨噬细胞的吞噬作用,显著诱导RAW264.7细胞中一氧化氮的分泌及细胞因子IL-6、TNF-α的释放。结论:黑木耳多糖具有与免疫相关的多种结构,对巨噬细胞具有强烈的刺激作用,在用作潜在的免疫刺激剂方面具有广阔的前景,黑木耳也可作为调节人类免疫力的功能性食品发挥巨大的应用价值。     

灵芝孢子粉多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性初探

采用水浴回流法提取灵芝孢子粉粗多糖,再依次使用DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱和Sepharose CL-6B凝胶色谱柱分离纯化得到2种多糖组分GLP1a和GLP1b,HPSEC法测得2种组分均呈单一峰,重均分子量分别为1.12×106和1.21×105。HPLC、红外光谱和核磁共振分析的结果表明,GLP1a和GLP1b主要由葡萄糖组成,主链都是以β-(1,6)糖苷键连接,GLP1b在部分1→6连接的葡萄糖的3位和4位有分支。MTT实验表明,2个多糖级分均具有一定的免疫活性,而且都存在明显的量效关系,GLP1b的免疫活性明显高于GLP1a。     

融水香菇多糖结构表征及体外抗氧化、降糖活性

以产自广西融水的香菇为原料,研究其香菇多糖(Lentinan,LNT)的结构、体外抗氧化及降糖活性.采用傅里叶红外光谱、核磁共振、扫描电镜及刚果红实验对LNT进行结构分析.通过测定羟基自由基(·OH)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH·)清除率及总还原力评价LNT抗氧化活性.采用测定α-葡萄糖苷酶的抑制活性及胰...     

茯苓渣多糖组成分析及体外抗癌、免疫活性研究

目的:以茯苓渣为原料,通过热水浸提茯苓多糖,研究其单糖组成及抗癌、抗炎症因子及免疫活性,为开发茯苓多糖相关产品提供了理论依据。方法:利用高效液相色谱和红外光谱对水提茯苓多糖进行单糖组成分析,采用CCK-8法对水提茯苓多糖进行抗肿瘤及免疫活性研究。结果:水提茯苓多糖的多糖含量为76%,具有明显的多糖特征吸收峰,主要由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、岩藻糖组成,其物质的量之比为1:0.107:0.079:0.018;对胃癌细胞、乳腺癌细胞、肝癌细胞均有抑制作用,对胃癌细胞的增殖抑制效果最优（IC₅₀=1096 μg/mL）,对小鼠脾淋巴细胞具有促进增殖作用。结论:水提茯苓多糖具有良好的体外抗癌及免疫活性。     

马尾藻多糖的提取及其免疫活性

目的:研究马尾藻多糖(SP)的提取纯化和免疫活性。方法:采用超声波破碎法从马尾藻中提取制备马尾藻多糖(SP),破壁时间15min,破壁功率为108W,80℃水浴8h,过滤,离心,浓缩,用酒精沉淀出粗多糖,40℃真空干燥,Sevage法除蛋白,DE-52纯化除色素,透析,得到马尾藻细多糖(SP)并进行免疫实验。结果:多糖剂量20、40、60mg/kg·d时对小鼠脾的重量显著增加,p<0.05;当多糖剂量为40、60mg/kg·d时对小鼠腋下淋巴结的重量显著增加,p<0.05,对单核巨噬细胞的吞噬功能加强有显著影响,能明显提高小鼠碳粒廓清速率,提高吞噬指数α,p<0.05,并对巨噬细胞增生以及淋巴小结形成有明显作用;当多糖剂量为60mg/kg·d时对肝增重也达到显著水平,p<0.05。结论:马尾藻多糖有免疫促进作用。     

孔石莼多糖锌结构表征与体外降血糖活性

以孔石莼多糖为参照,采用气相色谱-质谱联用法、凝胶渗透色谱-多角度激光光散射-示差检测器联用法、刚果红实验、紫外-可见光谱、傅里叶变换红外光谱、X射线衍射、扫描电子显微镜、原子力显微镜等手段对孔石莼多糖锌络合物的理化性质与结构进行检测分析,并考察其对α-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶的抑制作用。结果表明:孔石莼多糖是由鼠李糖、岩藻糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖组成的杂多糖,其单糖基的物质的量比为1.00∶0.06∶0.93∶0.45∶2.29∶0.07;经过络合锌改性后产物中孔石莼多糖的分子质量及其含量均明显下降,三螺旋结构消失,糖链中的—COO^-、—CH₃、—OSO₃^-等基团与Zn²⁺发生了结合;孔石莼多糖锌的表面形貌变化明显,其分子尺寸较原多糖的减小,但其分子团聚性增强;且孔石莼多糖锌对α-葡萄糖苷酶与α-淀粉酶的抑制效果均强于原多糖。说明孔石莼多糖经过络合锌改性后,结构发生了明显的变化,体外降血糖活性增强。     

米糠多糖和大豆多糖的结构特征及免疫调节活性比较

以米糠和豆粕为原料,采用热水浸提制备米糠多糖(RBP)和大豆多糖(SBP),并分析其结构特征及体外免疫调节活性的差异.通过凝胶过滤色谱法和紫外/红外光谱法证实RBP和SBP均为蛋白多糖,结合化学组成分析确定其多糖与蛋白的质量比值分别为7.71和1.90.RBP主要由葡萄糖和甘露糖(物质的量比4.27∶1.00)组成,而SBP主要由葡萄糖、半乳糖和甘露糖(物质的量比5.55∶3.49∶1.00)组成.相比空白组,两种多糖在50 ～ 400 μg/mL剂量范围内显著刺激ConA诱导的脾淋巴细胞增殖(P＜0.05),但仅在50μg/mL剂量下促进正常和LPS诱导的增殖(P＜0.05).在该剂量范围内,RBP和SBP均能明显增强巨噬细胞的吞噬功能,但前者抑制其NO生成,而后者剂量依赖性促进NO生成.米糠及豆粕中多糖作为免疫佐剂具有良好的开发前景.     

新鲜和干制龙眼果肉多糖免疫调节活性的分析

为比较新鲜和干制龙眼果肉多糖(LPX3、LPG2)免疫调节活性的差异,采用小鼠肠系膜淋巴结细胞和巨噬细胞模型,分析了多糖对细胞增殖和巨噬细胞吞噬以及NO、IL-6和TNF-α分泌的影响.结果显示,LPX3和LPG2在一定剂量范围内均能显著促进小鼠肠系膜淋巴结细胞和巨噬细胞增殖,促进巨噬细胞吞噬和NO分泌(P＜0.05)...     

纳豆糖蛋白的分离纯化、结构表征及其免疫活性研究

为更充分了解纳豆中的成分对脾细胞增殖能力的影响,本实验通过DEAE-52纤维素离子交换柱层析以及Sephadex G-100凝胶柱层析,从纳豆糖蛋白粗提物中获得两种较纯的纳豆糖蛋白：NPPC-1-b和NPPC-2-a。由高效凝胶渗透色谱得到它们的分子质量分别为26.93、357.60 kD。对这两种糖蛋白进行进一步的红外光谱扫描、紫外光谱扫描、单糖组成分析以及氨基酸组成分析显示,NPPC-1-b中含有的是O-糖肽键,而NPPC-2-a中存在的是N-糖肽键。NPPC-1-b主要由甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖组成,且其含量比例分别为67.45%、25.67%和2.44%。NPPC-2-a主要由葡萄糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖以及半乳糖组成,其含量比例分别为36.64%、21.71%、10.35%、9.00%和5.17%。氨基酸自动分析结果显示,两种糖蛋白兼含有人体所需的17 种氨基酸。NPPC-1-b主要由谷氨酸、脯氨酸、赖氨酸和精氨酸组成,其含量分别为0.971%、0.791%、0.708%和0.603%;NPPC-2-a主要由谷氨酸、脯氨酸以及天冬氨酸组成,其含量分别为0.903%、0.689%和0.504%。此外,体外免疫活性探讨发现,100～200 μg/mL的NPPC-1-b以及12.5～200 μg/mL的NPPC-2-a可显著增强脾细胞增殖能力（P＜0.05）,其中以100 μg/mL的NPPC-2-a作用效果最佳。在细胞因子表达方面, NPPC-1-b和NPPC-2-a可显著促进细胞因子白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）以及干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）的表达,其中50 μg/mL的NPPC-2-a分泌IL-2最多,200 μg/mL的NPPC-2-a表达IFN-γ的量最高。以上研究结果表明NPPC-1-b和NPPC-2-a具有一定的免疫调节作用。     

黑加仑果实降解多糖理化特性、结构及体外降血糖活性

本实验以微波辅助溶剂法提取的黑加仑果实多糖为原料,采用超声辅助Fe2＋-VC-H2O2降解,经Sepharose 6B柱层析法分离,得到两种多糖（DP-1和DP-2）。经液相色谱测定DP-1和DP-2分子质量分别为1.29×106 Da和1.07×106 Da;气相色谱测定结果表明,DP-1和DP-2由相同的6 种单糖构成,但组成比例不同。傅里叶变换红外光谱、高碘酸氧化及核磁共振分析结果表明,DP-1和DP-2糖链上都含有α-、β-吡喃环,且主要是由6 种糖残基构成。功能特性测定结果显示DP-1和DP-2具有一定的吸湿性、保湿性及热稳定性。活性实验结果证实多糖DP-1和DP-2对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶具有显著的抑制活性,质量浓度为2.0 mg/mL时,对α-葡萄糖苷酶抑制率最高,分别为（67.45±3.45）%和（73.22±0.48）%;对α-淀粉酶抑制率也最高,分别为（64.74±2.08）%和（73.28±2.52）%。此外,两种多糖对α-淀粉酶的抑制属于可逆竞争型。本研究可为黑加仑果实多糖的进一步利用提供理论参考。     

微波辅助提取龙胆果胶的工艺研究

以果胶提取率为考察指标,在考察单因素提取时间、提取温度、微波功率、料液比和粒径的基础之上,采用正交实验优化提取条件,研究微波辅助提取龙胆果胶的工艺条件。龙胆草中果胶最佳提取工艺为:微波辐射功率700 W,提取时间15 min,提取温度90℃,龙胆草粒径120目,料液比为1∶30(g/mL)。在此条件下,龙胆果胶的提取得率达到7.51%±0.12%。该法操作简单且提取率高,为工业化龙胆果胶的生产提供了一定的数据支撑。      

金柚幼果多糖的结构鉴定与免疫调节作用

为充分开发柚子产业,进一步提高金柚幼果的利用率,本文以金柚幼果为原料,采用超声辅助酶法提取出金柚幼果多糖（PFCP）,得率为9.12%。通过扫描电镜、粒径仪、气相色谱、红外光谱等对PFCP的结构进行表征,结果表明PFCP表面为光滑的多孔网状结构,粒径为101 μm,分子量为3.31 ku,由鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、葡萄糖、甘露糖和半乳糖醛酸组成的,摩尔比例为0.056:0.138:0.463:0.059:0.186:0.285,是一种酸性杂多糖,主要由-OH、C=O、C-O、C=C和N-H结构构成,其糖链含有苯环和吡喃环。本研究借助小鼠RAW 264.7巨噬细胞模型,发现PFCP在62.5~1000 μg/mL的浓度范围内对小鼠巨噬细胞无明显毒副作用,能显著提高RAW 264.7巨噬细胞表达NO、TNF-α及IL-6细胞因子的分泌量,在1000 μg/mL浓度时细胞因子的表达量最高,NO为42.87 μM,TNF-α为14759.47 pg/mL,IL-6为62.20 pg/mL,表明PFCP具有较强的免疫活性。该研究可为金柚幼果的开发利用提供一定的研究基础。     

超声处理对龙眼果肉多糖理化特征及免疫调节活性的影响

超声波广泛用于龙眼果肉多糖的浸提以实现提取率的大幅增加,但对其生物活性的影响尚不清楚。采用不同功率超声处理干制和新鲜龙眼果肉粗多糖(LPD和LPF),以凝胶色谱法分析分子量分布发现:经150~450 W超声处理15 min后,因高分子量级分降解,LPD和LPF的分子量分布发生明显变化,且其降解行为也由逐渐减小的特征粘度所印证,而不同功率之间的影响差异不明显。超声处理还能解离LPD中大部分O型糖苷键以及LPF高分子量级分中非O型糖苷键结合的蛋白。体外免疫调节活性评价发现:超声处理不同程度地减弱LPD和LPF(50~400μg/m L)对脾淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬和NO生成的刺激活性,可能源于高分子降解和结合蛋白解离;LPD经超声降解后在400μg/m L剂量下对Con A诱导淋巴细胞增殖的刺激活性显著增强(p0.05),推测与粘度降低有关。超声波对龙眼多糖分子的降解作用导致其体外免疫调节活性明显减弱。     

龙眼肉多糖LPII的体外免疫调节活性评价

LPII是龙眼肉多糖的主要级分之一,本文研究了其体外免疫调节活性及酶降解作用对活性的影响。采用尼龙毛柱分离脾淋巴T/B细胞,在25~400μg/mL剂量范围内体外评价LPII对脾淋巴细胞的刺激作用发现,LPII能刺激脾淋巴细胞及B细胞增殖,并促进B细胞抗体生成,但对T细胞激活作用不明显(P0.05)。此外,LPII还能有效刺激巨噬细胞增殖,并增强其吞噬功能和NO生成量。LPII的高分子量组分在木瓜蛋白酶、链酶蛋白酶和胰蛋白酶的作用下均发生明显降解,且200μg/mL剂量下对刀豆蛋白A诱导的脾淋巴细胞增殖的刺激作用显著降低(P0.05),但对脂多糖诱导的脾淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬的刺激作用却显著增强(P0.05)。LPII具有显著的体外免疫调节活性,是龙眼肉"滋补"的重要功能成分,而适度降解有利于增强活性。     

蔓三七叶多糖的理化性质及免疫调节活性研究

以蔓三七叶为实验材料,采用水提醇沉法获得蔓三七叶多糖(GPLP),测定了其总糖、糖醛酸、硫酸根以及蛋白质的含量和单糖组成,并对其抗氧化活性和免疫调节活性进行了研究。采用苯酚-硫酸法测定总糖含量,硫酸-间羟基苯酚法测定糖醛酸含量,Ba Cl2-明胶法测定硫酸根含量,气相色谱法测定单糖组分和红外光谱测定多糖的结构。通过总抗氧化能力、DPPH自由基、OH自由基的清除能力评价GPLP的体外抗氧化能力,并探讨其对脂多糖(LPS)刺激RAW 264.7巨噬细胞免疫调节活性。结果表明,所得GPLP的得率为15.56%,粗多糖中的总糖含量为52.32±1.56 g/100 g;单糖组成为阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖,摩尔比为1.39:8.70:3.17:1。体外抗氧化实验结果表明GPLP的总抗氧化能力、DPPH和OH自由基清除效果明显。GPLP可显著提高RAW 264.7细胞内一氧化氮(NO)的浓度,在给药浓度为25.0μg/mL时,NO的分泌量达到最大,为31.24±2.30μM。GPLP可以提高免疫力,在功能食品的开发中,可以作为一个潜在的免疫调节剂。     

紫芝菌丝体多糖的结构鉴定及免疫活性研究

本采用热水浸提紫芝菌丝体得到粗多糖后经DEAE-sepharose Fast Flow和Sephacryl S-200 HR分离纯化出一种新型的灵芝多糖LZ1。通过采用凝胶渗透色谱法、电镜、紫外、红外光谱、气相色谱、核磁共振、高碘酸氧化和Smith降解方法等方法对LZ1进行结构鉴定和解析,结果表明LZ1是不含核酸、蛋白质的均一多糖,其分子量为7498 u;其是由鼠李糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和阿拉伯糖以0.94:0.50:1.68:26.91:4.80:17.12的摩尔比组成的酸性杂多糖,其糖苷键为1→4、1→2或1→6、1→3;刚果红实验表明LZ1没有三螺旋结构;通过小鼠巨噬细胞RAW264.7体外免疫模型,研究LZ1对TNF-α、IL-6、NO三种细胞因子的分泌情况的影响发现LZ1对这三种细胞因子的分泌有明显的促进作用,且呈现浓度相关性,表现出明显的免疫活性;通过AAPH诱导的红细胞氧化性溶血模型对LZ1的抗氧化活性进行评价,发现LZ1有很好的抑制AAPH诱导的红细胞氧化溶血的特性。