不同阶段母乳中10种游离低聚糖的检测及含量分析

目的检测不同阶段母乳中10种游离母乳低聚糖(human milk oligosaccharides,HMOS)的含量,并比较其在不同阶段母乳中的变化。方法分别采集产后0~7 d(初乳)、产后8~15 d(过渡乳)、产后16~180 d(成熟乳)的母乳,采用荧光标记HMOS,通过超高效液相色谱-荧光检测法和标准曲线定量10种HMOS。采用Person相关比较不同泌乳时间与HMOS含量的相关性,3个泌乳阶段的组间差异采用单因素方差分析。结果在选定的色谱条件下,10种HMOS可完全分离并定量。10种HMOS中,2'岩藻糖乳糖(2'FL)、3'唾液酸乳糖(3'SL)、6'唾液酸乳糖(6'SL)、乳糖-N-四糖(LNT)、乳糖-N-新四糖(LNn T)、乳糖-N-五糖I(LNFP-I)与泌乳时间存在负相关关系,3'岩藻糖乳糖(3'FL)与泌乳时间存在正相关关系,上述7种HMOS在不同阶段母乳中差异有统计学意义(P0.05),而α-四糖(P_I)、乳糖-N-五糖V(LNFP-V)、乳糖-N-新五糖(LNnFP-V)与泌乳时间无明显相关关系,在不同阶段母乳中含量差异无统计学意义(P0.05)。结论不同阶段母乳中HMOS的含量不同。10种HMOS中,7种HMOS与泌乳时间具有相关关系并且在不同泌乳阶段差异有统计学意义(P0.05)。     

超高效液相色谱-质谱法测定母乳中12 种低聚糖

建立母乳中12种低聚糖超高液相色谱-串联三重四极杆质谱的定性及定量测定方法。母乳样品脱脂除蛋白后经液相分离,通过质谱检测,最优梯度洗脱条件为：流动相A为10mmol/L的甲酸铵溶液,流动相B为乙腈;流速0.3mL/min;柱温50℃;0～10min,95%～75%B;10～15min,75%B;15～20min,75%～65%B;20～21min,65%～10%B;21～24min,10%B;24～25min,10%～95%B;25～35min,95%B。12种低聚糖标准品标准曲线在设定质量浓度范围内线性良好（R2＞0.98）,加标回收率在80.00%～120.00%之间,重复性和仪器精密度（均用相对标准偏差表示）均小于10%。     

基于衍生化反应的母乳低聚糖质谱检测方法的建立

对比2-氨基苯甲酸、2-氨基苯甲酰胺和2-氨基吖啶酮这3种衍生剂,选择2-氨基苯甲酸作为最优衍生剂,基于此建立一种超高效液相色谱-串联质谱法定量检测母乳中6种母乳低聚糖(HMOs)含量的方法.样品经除脂、除蛋白、衍生后,采用ACQUITY UPLC BEH Amide色谱柱分离,多反应离子监测(MRM)模式定量测定HM...     

高效液相色谱法测定母乳中唾液酸含量

建立荧光高效液相色谱(fluorescence detector-high performance liquid chromatography,HPLC-FLD)测定母乳中唾液酸N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)和N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolyl neuraminic acid,Neu5Gc)含量的分析方法。利用酸水解法释放出母乳中的唾液酸,以4,5-亚甲二氧基-1,2-邻苯二胺盐(4,5-methylenedioxy-1,2-phenylenediamine dihydrochloride,DMB)为衍生化试剂,50℃避光衍生150min,采用荧光高效液相色谱仪检测。色谱条件：LiChrosorb RP-18柱(250mm×4mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-超纯水(7:8:85),流速0.9mL/min,进样体积10μL,柱温30℃,荧光检测器激发波长373nm,发射波长448nm。结果表明：唾液酸在50～400μmol/L范围内与唾液酸峰面积的线性关系良好,平均回收率为94.0%,精密度的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.4%,稳定性RSD为1.0%,重复性RSD为0.8%,Neu5Ac的最低检出限为0.02μmol/L,Neu5Gc的最低检出限位0.03μmol/L。该方法简单、重复性好、灵敏度高,可广泛用于奶粉、牛奶及母乳中唾液酸含量测定。     

高效液相色谱法测定烟草底料中低聚糖的含量

建立了一种检测烟草底料中低聚糖(水苏糖、棉籽糖、蔗糖)的高效液相色谱分析方法.采用Waters Sugar Pak1 钙型阳离子交换色谱柱(6.5mm×300mm, 5μm);流动相为纯水;采用示差折光检测器进行检测;流量1.0 mL/min;柱温85 ℃;外标法定量.结果显示:3种糖的线性关系良好, 相关系数在0. 9991～0. 9997之间;精密度、稳定性的相对标准偏差(n=5)都低于4.7%;平均回收率为96.9%～103.5%;检出限为3.5～4.0 μg/mL.该方法前处理简单、快速,应用本方法可测定烟草底料中水苏糖、棉籽糖和蔗糖的含量变化.     

高效液相荧光色谱法检测婴幼儿配方食品中7种母乳低聚糖

目的 建立高效液相荧光色谱法(high performance liquid chromatography with fluorescence detector,HPLC-FLD)检测婴幼儿配方食品配方奶粉中7种母乳低聚糖(human milk oligosaccharides,HMOs)的分析方法。方 法婴幼儿配方食品复溶后,首先通过酶解处理(β-半乳糖苷酶和淀粉葡萄糖苷酶)去除婴幼儿配方食品基质中存在的HMOs干扰物,例如麦芽糖糊精和低聚半乳糖,酶解后向样品溶液中添加内标物质,后使用衍生化方法使得目标HMOs和内标物质均标记荧光基团(2-氨基苯甲酰胺),即可运用HPLC-FLD对其进行检测。该方法使用HMOs外标法进行目标物的定量分析,且标准物质信号均亦通过内标物矫正。结果 婴幼儿配方食品中7种HMOs可通过酶解、衍生及HPLC-FLD检测,使用外标法进行定量分析。通过内标物质可矫正信号,减少实验偏差。7种HMOs[2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL)、3-岩藻糖基乳糖(3-fucosyllactose,3-FL)、双岩藻糖基乳糖(difucosyl...     

HPLC-ELSD法检测葛根酶解物中纤维低聚糖的含量

建立高效液相色谱-蒸发光检测器(High Performance Liquid Chromatography-Evaporative Light Scattering Detection)测定葛根酶解制备物中葡萄糖、纤维二糖和纤维三糖的方法。HPLC条件为:采用Asahipak NH2P-50-4E(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,柱温35℃、流动相:乙腈∶水=70∶30(体积比)、流速0.8 mL/min;ELSD参数为:漂移管温度70℃,N2流速2.0 L/min。结果表明,葡萄糖、纤维二糖和纤维三糖的浓度与其峰面积在0.07 mg/mL~0.7 mg/mL内有良好的线性关系(R20.99),精密度RSD 0.99%~3.1%,平均回收率98.17%~103.42%。     

人乳中低聚糖的含量及其常用分析方法的研究进展

人乳低聚糖（human milk oligosaccharides,HMOs）是母乳中的一类重要组分,迄今为止已经确定了200多种结构不同的HMOs。HMOs能在肠道微生物的作用下产生短链脂肪酸,对婴儿健康产生有益影响,这是母乳与配方粉的主要区别之一。研究表明,不同种类的肠道微生物利用不同机制来识别和消化不同结构的HMOs,维持肠道菌群平衡。同时,HMOs还具有缓解过敏症状,预防坏死性小肠结肠炎等多种功能。本文对HMOs的结构、种类与含量、与婴儿肠道菌群的互作及其免疫调节功能进行了综述。HMOs可促进婴儿肠道菌群的定植与生长,并通过多种方式直接或间接调节婴儿免疫功能。本文为HMOs在婴幼儿食品中的应用提供理论支持,对其未来研发方向提供新思路。

     

高效阴离子交换色谱-脉冲安培法测定母乳及婴儿配方粉中的唾液酸

该文建立了高效阴离子交换色谱-脉冲安培法检测母乳和婴儿配方粉中常见唾液酸N-乙酰神经氨酸(N-acetylneuraminic acid,Neu5Ac)和N-羟乙酰神经氨酸(N-glycolyl neuraminic acid,Neu5Gc)的方法.利用酸水解法释放母乳和婴儿配方粉中的唾液酸,用离子色谱前处理柱纯化婴儿...     

呼和浩特市113例母乳中矿物质含量的分析

对2014年~2015年收集呼和浩特市产后6个月内产妇的母乳样品共113份,测定钙、镁、钾、钠、铁、锌和硒元素含量。结果表明:泌乳期内,母乳中的钙、钾、铁、锌和硒元素无明显变化,组间差异不显著(P0.05);镁元素随着泌乳期的延长而降低,组间差异显著(P0.05);钠元素随泌乳期的延长呈上升趋势,组间差异显著(P0.05)。呼和浩特市婴儿的钙、镁、钾、钠、铁、锌和硒元素摄入量均低于中国居民膳食营养素适宜摄入量。泌乳期与镁元素呈显著负相关(P0.05),与钠元素呈显著正相关(P0.05);产妇学历与母乳中的铁元素含量呈显著正相关(P0.05),与其他矿物质元素均无相关性(P0.05);顺产产妇母乳中的钙、镁、铁和锌元素含量都明显高于剖宫产产妇(P0.05);产妇年龄与母乳中的矿物质元素均无相关性(P0.05)。     

高效液相色谱法测定母乳及牛乳中总核苷酸含量

建立高效液相色谱测定母乳和牛乳中总核苷酸含量和组成的分析方法。总核苷酸包括游离核苷酸、游离核苷、核苷聚合物及加合物等不同来源的可利用核苷总量。利用酶解法释放出母乳中的核苷,以硼化聚丙烯酰胺凝胶（Affi-Gel 601）作为固相萃取介质进行样品净化,用反相高效液相色谱仪检测,内标法定量,检测结果以核苷酸计。且针对母乳样品的特性,增加高温灭活步骤进行样品前处理,以检测母乳中核苷酸的天然含量及组成。对所建方法进行全面验证,结果表明其具有良好的线性,相关系数（r2）均在0.999以上;母乳中各核苷酸的检出限和定量限分别在0.18～0.45 mg/L和0.60～1.51 mg/L之间;母乳基质中3 种不同加标水平下总核苷酸的回收率均在99%～108%之间,连续3 d 6 次检测结果的相对标准偏差在0.8%～7.8%之间,显示了良好的准确性及精密度。然后进一步利用所建检测方法,评估母乳及5 种市面常见的牛乳中的核苷酸总量及组成用以验证该方法的适用性。该方法的灵敏度、准确性及精密度均可满足对母乳和牛乳样品中天然的核苷酸含量及组成的测定要求。本研究为今后大样本量调查母乳及牛乳样品中核苷酸的含量和组成提供了更加科学准确的方法。     

羊乳低聚糖超高效液相色谱-质谱鉴定中样品前处理方法及液相色谱条件优化

通过Sep-Pak C18与石墨化碳柱法、超滤法、透析法和葡萄糖凝胶层析法4 种不同的前处理方法,以离子交换色谱法检测乳糖的去除率和低聚糖的损失率为评价指标,最终确定葡聚糖凝胶层析法为最优前处理方法。然后,采用超高效液相色谱-串联Q-Exactive Focus质谱对羊乳中的低聚糖进行分析及结构鉴定,以低聚糖的总离子流图为评价指标,对液相洗脱条件进行优化,最终优化条件为：0～20 min,95%～78% A（乙腈）;20～35 min,78%～73% A;35～38 min,73～62% A;38～45 min,62%～50% A。结果显示,采用凝胶层析法前处理样品测得低聚糖种类显著高于未去除乳糖的样品,在最优液相色谱分离条件下,羊乳低聚糖中同分异构体得到较好分离,对羊乳中低聚糖的结构解析具有重要参考价值。     

不同母乳低聚糖对肠道LS174T杯状细胞黏蛋白分泌相关基因表达的影响

目的 分析不同母乳低聚糖对肠道LS174T杯状细胞黏蛋白分泌相关基因表达的影响。方法 以人肠道LS174T细胞为研究对象,将2’-岩藻糖基乳糖(2’-fucosyllactose,2’-FL)、3’-唾液酸乳糖(3’-sialyllactose,3’-SL)和低聚半乳糖(galactooligosaccharide, GOS) 3种低聚糖和乳糖对细胞的作用时间分成24 h组和48 h组,分别在细胞稳态和细胞炎症状态下,以黏蛋白2(mucin2,MUC2)及其相关基因[三叶因子-3(trefoilfactor3,TFF3)、抵抗素样蛋白B(recombinantresistinlikebeta,RETNLB)、碳水化合物磺基转移酶5(carbohydrate sulfotransferase 5, CHST5)、半乳糖-3-O-磺基转移酶2 (galactose-3-O-sulfotransferase 2, GAL3ST2)]的表达水平为评价指标,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(realtime-quantitativepolymerasechainreaction,RT-qPCR...     

利用UPLC-TOF-MS测定成熟母乳及婴幼儿 配方奶粉中主要神经节苷酯含量

建立了超高效液相色谱结合飞行时间质谱法分析成熟母乳中主要神经节苷酯双唾液酸神经节苷酯GD3和单唾液酸神经节苷酯GM3的含量。通过C18柱将不同结构的神经节苷酯进行分离,并在ESI负离子模式下进行分析。用外标法对GD3和GM3进行了定量,并对该方法进行方法学验证。结果表明：神经节苷酯GD3、GM3分别在5～200 μg/mL和 0.1～10.0 μg/mL范围内线性关系良好,相关系数均大于等于0.962 0,神经节苷酯GD3和GM3的定量限分别为2.75 μg/mL和0.29 μg/mL,加标回收率为92.15%～111.78%,精密度小于等于6.07%。成熟母乳中神经节苷酯GD3和GM3含量分别为（9.61±3.32）μg/mL和（2.08±1.39）μg/mL;4种婴幼儿配方奶粉中GD3含量略高于成熟母乳,但未检出GM3。     

桑椹酒发酵过程中有机酸含量变化

利用高效液相色谱法测定桑椹酒发酵过程中七种有机酸的变化,结果显示:桑椹原果汁中琥珀酸含量最高,柠檬酸次之;发酵过程中酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、草酸、抗坏血酸含量变化均先呈上升趋势,达到最大值后呈下降趋势,而乳酸含量则一直上升;发酵结束后检测到酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、草酸、抗坏血酸、乳酸含量分别为1.822、2.54、2.44、0.76、0.772、0.0756、0.0846g/L。     

桑椹酒发酵过程中有机酸含量变化

利用高效液相色谱法测定桑椹酒发酵过程中七种有机酸的变化,结果显示:桑椹原果汁中琥珀酸含量最高,柠檬酸次之;发酵过程中酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、草酸、抗坏血酸含量变化均先呈上升趋势,达到最大值后呈下降趋势,而乳酸含量则一直上升;发酵结束后检测到酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、草酸、抗坏血酸、乳酸含量分别为1.822、2.54、2.44、0.76、0.772、0.0756、0.0846g/L。      

高效离子色谱法同时测定婴幼儿配方奶粉中单糖及功能性低聚糖的研究

目的 建立高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测同时测定婴幼儿配方奶粉中4种单糖和9种功能性低聚糖的方法 .方法 样品经提取、乙酸沉淀蛋白、净化处理后,外标法定量.淋洗液为乙酸钠和氢氧化钠,流速0.4 ml/min,梯度洗脱,洗脱时间50 min.采用高效阴离子交换色谱,色谱柱为CarboPacTM PA20(3 mm×15...     

母乳中脂溶性维生素的HPLC法建立及前处理方法

建立TLC分离法前处理母乳中的脂溶性维生素的HPLC法。采用TLC分离法,以正己烷为提取溶剂,以硅胶为分离介质, 100%二氯甲烷为展开剂, 95%乙醇-浓硫酸(1︰1, V/V)为显色剂。采用WondaSil C18色谱柱(4.6mm×150 mm, 5μm),以甲醇为流动相,采用外标法计算维生素A和维生素E的回收率。结果表明,在5～500μg/L质量浓度范围内, 2种待测物的线性关系均良好, 10 min内完全分离, 2种待测物在添加浓度分别为5, 10和20μg/L质量浓度水平下,回收率82%～98%,变异系数≤15.5%。维生素A和维生素E的检出限分别为3.8μg/kg和4.7μg/kg,定量限分别为6.7μg/kg和8.5μg/kg。与低温酶解皂化法、溶剂直接萃取法和固相萃取法等3种前处理方法相比,试验建立的TLC分离法前处理母乳中的脂溶性维生素的HPLC方法,具有工艺简单、分析时间短、提取回收率高、对提取液的纯化效果好等优点,为母乳中的脂溶性维生素检测方法的选择提供依据。     

气相色谱-质谱联用法研究枇杷蜂蜜成熟过程中低聚糖含量变化规律

该研究以苯基-β-D-葡萄糖苷作为内标物,经盐酸羟胺肟化-六甲基二硅胺烷和三氟乙酸酐硅烷化,内标法定量,建立气相色谱-质谱联用法测定枇杷蜂蜜中17种低聚糖含量并分析其变化规律。以苯基-β-D-葡萄糖苷为替代物进行方法学评价,结果表明该方法准确度高、精密度好,可用于枇杷蜂蜜样品中低聚糖的分析测定。枇杷花蜜和成熟过程中枇杷蜂蜜样品中低聚糖含量分析结果表明,枇杷花蜜中检出6种低聚糖,枇杷蜂蜜中检测出11种低聚糖。枇杷花蜜和枇杷蜂蜜中蔗糖含量均最高。除蔗糖外,枇杷花蜜干重中蔗果三糖含量最高,可达0.80 g/100g;枇杷蜂蜜干重中吡喃葡糖基蔗糖含量最高,可达6.84 g/100g。在枇杷蜂蜜干重中,随酿造时间的延长,二糖中的蔗糖含量呈下降趋势并在酿造14 d时含量达最低水平;其他二糖含量均呈上升趋势,麦芽糖和黑曲霉二糖在酿造15 d时含量上升至最高;松二糖、异麦芽糖、异麦芽酮糖和α,β-海藻糖在酿造14 d时达到最高含量之后含量无显著性差异;三糖含量呈波动变化,其中吡喃葡糖基蔗糖在酿造15 d时达最高含量。该研究为选择合理的枇杷蜂蜜采收时间以及成熟枇杷蜂蜜的真实性鉴别提供技术支持。     

HPLC法测定玉米芯酸水解液中糖组分的含量

建立高效液相色谱法测定玉米芯酸水解液中糖组分。采用AminexHPX-87H柱(300mm×7.8mm),以0.01mol/L硫酸为流动相,流速为1.0mL/min,柱温:60℃,检测器为示差检测器;进样量20uL。结果表明:以峰面积定量,葡萄糖的线性范围为10⁵0ug(r=0.9999);平均回收率99.6%、RSD=0.73%(n=9)。木糖的线性范围为2050ug(r=0.9999);平均回收率99.6%、RSD=0.73%(n=9)。木糖的线性范围为20¹00ug(r=0.9999);平均回收率99.8%、RSD=0.45%(n=9)。、阿拉伯糖的线性范围为10100ug(r=0.9999);平均回收率99.8%、RSD=0.45%(n=9)。、阿拉伯糖的线性范围为10⁵0ug(r=0.9997);平均回收率100.2%、RSD=0.88%(n=9)。该方法简便、结果准确可靠,可用玉米芯酸水解液中糖组分的测定。