间充质干细胞及基因转移方法促进新骨生成和大节段骨缺损的修复

目的构建含人骨形态蛋白-2(BMP-2)基因的重组腺病毒,并转染入间充质干细胞,诱导其向骨细胞分化,从而生成新骨并修复骨缺损。方法用重组腺病毒作为载体,将人BMP-2基因转染入小鼠胚胎间充质干细胞,Western blot检测BMP-2蛋白的分泌表达。观察重组腺病毒Adv-BMP-2转染后小鼠间充质干细胞的增殖变化,并进行碱性磷酸酶活性、钙化结节形成和细胞中成骨相关蛋白mRNA转录水平等细胞分化的指征检定。将Adv-BMP-2转染后的小鼠间充质干细胞注入裸鼠右侧大腿四头肌内,观察新骨生成情况。将重组腺病毒Adv-BMP-2转染的大鼠骨髓间充质干细胞用于大鼠大节段骨缺损的修复,并对植入的骨髓间充质干细胞进行跟踪观察。结果Western blot分析表明,重组腺病毒Adv-BMP-2转染的细胞可分泌表达BMP-2蛋白。转染后的小鼠间充质干细胞的增殖速度与重组腺病毒Adv-BMP-2的转染量呈剂量相关。Adv-BMP-2转染的干细胞碱性磷酸酶上升,并在体外形成钙结节,同时,成骨相关蛋白Osteopontin、Osteocalcin、Bone sialoprotein及Collagenα1(I)的mRNA水平也上升。用Adv-BMP-2转染的间充质干细胞能在裸鼠的大腿肌肉内形成发育成熟的新骨,转染的自体性骨髓间充质干细胞能有效修复大鼠大节段股骨缺损。在免疫抑制剂FK506的支持下,Adv-BMP-2转染的同种异体骨髓间充质干细胞也能修复大鼠的大节段骨缺损。没有FK506支持下的Adv-BMP-2转染的同种异体骨髓间充质干细胞及重组腺病毒Adv-β-gal转染的骨髓间充质干细胞则不能在体内形成新骨。植入骨缺损部位的骨髓间充质干细胞能直接参与骨缺损的修复,且有向全身其他组织器官迁移的趋势,但生存期较短。结论用腺病毒介导的BMP-2基因转染入间充质干细胞能有效诱导干细胞向骨细胞分化,生成新骨并修复骨缺损。     

红花三七水煎剂对小鼠在体小肠平滑肌的作用

目的:探讨红花、三七水煎剂对在体小鼠小肠平滑肌的推动作用。方法:取健康小鼠50只,随机分为新斯的明组、硫酸阿托品组、红花水煎剂组、三七水煎剂组、红花联合三七水煎剂组,每组各10只;新斯的明组小鼠灌胃0.002%新斯的明,硫酸阿托品组小鼠灌胃0.05%硫酸阿托品,红花水煎剂组小鼠灌胃6%红花水煎剂,三七水煎组小鼠灌胃6%三七水煎剂,红花联合三七水煎剂组小鼠灌胃6%红花联合三七水煎剂,灌药10分钟后对各组小鼠灌胃2%亚甲蓝,观察各组小鼠小肠推进率。结果:与硫酸阿托品组对比,其他组的小肠推进率显著增加(p0.01);与新斯的明组对比,红花联合三七水煎剂组小肠推进率增加(p0.05),红花水煎剂组、三七水煎剂组无明显差异(p0.05);与红花联合三七水煎剂组相比,三七水煎剂组和红花煎剂组小肠推进率显著降低(p0.01);红花水煎剂组与三七水煎剂组相比,小鼠小肠推进率无明显差异(p0.05)。结论:红花、三七水煎剂具有促进小鼠小肠推进的作用;红花联合三七水煎剂对小鼠小肠的推动效果明显好于新斯的明。     

甘草次酸对四氯化碳小鼠胫骨骨微结构的影响

[目的]:本实验研究甘草次酸对四氯化碳小鼠胫骨骨微结构的影响。[方法]:24只普通级昆明种10周龄的小白鼠,雌雄各半,分三组:对照组(CON)、模型组(MOD)、甘草次酸(GA),实验连续四周,于结束实验前一天禁食12h,摘眼球处死小鼠:取血测ALT;肝脏称重并制备肝匀浆测MDA;右侧胫骨进行Micro CT扫描。[结果]:与MOD组相比,GA组小鼠肝脏指数、ALT和MDA活性明显下降;BMD明显增加;三维图显示骨小梁数目增加,骨小梁连接紧密,网状结构较明显,保持较完整的骨微观结构。[结论]:甘草次酸对四氯化碳小鼠的肝脏损伤有一定的保护作用,对小鼠胫骨具有预防骨丢失的作用,且对胫骨骨微观结构具有一定的保护作用。     

新型骨水泥粘接固定骨折的动物实验研究

目的 应用磷酸镁骨水泥(magneslium phosphate cement,MPC)粘接固定家兔胫骨平台骨折,探讨其治疗效果、粘接和降解机理.方法 20只家兔分为两组.第1组15只,第2组5只,通过开放截骨法建立家免双侧胫骨平台骨折模型.第1组实验组用MPC骨水泥固定,对照组用"L"形钢板固定.第2组实验组也同样用MPC骨水泥固定,而对照组作空白对照.通过大体观察、影像学、组织学及电解质检查,探讨MPC骨水泥治疗骨折的效果、对体内电解质的影响、粘接和降解机理.结果 6周后实验组都获得稳定的骨折愈合,没有发现骨折错位及延迟愈合,MPC骨水泥逐渐被吸收,对体内电解质无明显影响,其对骨折的治疗和钢板固定组达到同样的治疗效果.而空白对照侧均出现骨折错位、畸形愈合.通过对标本的组织学检查发现其粘接机理为镶嵌固定,并通过溶解而逐步降解.结论 MPC骨水泥具有一定的粘接强度,能降解,对体内电解质干扰小,是一种较为理想的骨水泥,可以用于骨折的粘接固定.     

弓形虫STAg不同接种途径免疫小鼠诱导的免疫应答

目的观察弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)经滴鼻、灌胃和皮下注射3种途径免疫小鼠诱导的免疫应答。方法5~6周龄BALB/c小鼠32只,随机分为4组,分别以20μgSTAg滴鼻、灌胃或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不作处理。末次免疫后14d脱颈椎处死小鼠,分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞(IELs)并计数,ELISA法测定血清、肠冲洗液中的弓形虫特异性抗体。结果滴鼻组和皮下注射组的脾淋巴细胞数量高于灌胃组和对照组,灌胃组与对照组相近。滴鼻组的IELs数量高于皮下注射组、灌胃组和对照组,皮下注射组和灌胃组与对照组一致。皮下注射组的血清IgG水平高于滴鼻组、灌胃组和对照组,滴鼻组略高于灌胃组和对照组,但差异无显著意义。滴鼻组的小肠冲洗液sIgA水平高于皮下注射组、灌胃组和对照组,皮下注射注射组和灌胃组略高于对照组,差异无显著意义。结论20μgSTAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答优于灌胃和皮下注射;皮下注射免疫小鼠诱导的血清IgG抗体水平高于滴鼻和灌胃,但其未能诱导黏膜免疫应答。     

应用骨形成蛋白与胶原膜复合物修复大鼠颅骨缺损

目的探讨骨形成蛋白(BMP)与胶原膜复合物(复合膜)修复大鼠颅骨缺损的效果。方法将BMP与胶原膜复合,在大鼠颅骨制备骨缺损,分别采用双侧覆盖复合膜、外侧覆盖复合膜进行治疗,以外侧覆盖胶原膜作为平行对照,并设空白对照。于术后2、4、6周,取标本进行X线检查及组织学观察。结果 两个覆盖复合膜组的缺损成骨面积百分比明显高于覆盖胶原膜的平行对照组(P<0.01)。术后4、6周,双侧覆盖复合膜组的成骨面积百分比明显大于单侧覆盖复合膜组(P<0.05)。双侧覆盖复合膜组的缺损术6周后已达骨性愈合。结论BMP与胶原膜复合既具有机械性阻挡作用,又具有骨诱导性,能加速骨缺损愈合。     

肝细胞生长因子基因治疗促进乙酸性胃溃疡组织再生修复的效果

目的评价肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)基因治疗促进大鼠乙酸性胃溃疡创面组织再生修复的效果。方法 Wistar大鼠乙酸注射诱导建立大鼠胃溃疡模型,建模后第5天,将模型大鼠随机分为3组:TPH(携带HGF基因真核表达质粒的减毒沙门菌)治疗组、TP(携带空真核表达质粒的减毒沙门菌)治疗组和模型对照组,分别给予含1×10~9 cfu TPH、1×10~9 cfu TP的10%NaHCO_3溶液及等体积(1 ml)10%NaHCO_3溶液灌胃,1次/3 d,共3次。末次灌胃治疗后第21天,取病变部位胃组织,肉眼观察溃疡创面愈合大小,显微镜下观察各组胃溃疡创面组织再生修复情况,ELISA法检测不同时间点(末次灌胃后第1、3、7、14、21天)HGF在溃疡局部组织中的表达水平。结果 TPH治疗组大鼠溃疡创面小而浅,基底细胞增生明显,胃黏膜上皮增生移行显著,且基底组织中多见毛细血管;而TP治疗组和模型对照组溃疡创面基底细胞增生及黏膜上皮增生移行均不明显;灌胃治疗后不同时间点TPH治疗组胃黏膜组织中HGF蛋白的表达水平均明显高于TP治疗组和模型对照组(P0.05或0.01),且呈时间依赖性。结论 HGF基因治疗可促进乙酸性大鼠胃溃疡创面的组织再生修复,加快溃疡愈合。     

微量溶血分光光度法测定气管炎疫苗的免疫活性

目的采用微量溶血分光光度法测定气管炎疫苗的免疫活性。方法将BALB/c小鼠随机分为5组:空白对照组、阴性对照组及试验1、2、3组,阴性对照组免疫生理盐水,试验1、2、3组分别免疫3批气管炎疫苗,免疫途径为小鼠颈背部皮下,免疫剂量为0.5 ml/只,免疫时间为第1、7、14天,除空白对照组外,所有小鼠第22天经腹腔注射20%的绵羊红细胞(sheep red blood cell,SRBC)悬液,0.2 ml/只。4 d后处死小鼠,取脾脏,制备脾细胞悬液,与SRBC结合,于37℃,在补体的参与下,使抗体形成细胞周围的SRBC溶解,通过酶标仪测定抗体形成细胞介导的溶血反应中,SRBC溶解后释放血红蛋白的量。另设7组小鼠:空白对照组、阴性对照组及试验4、5、6、7、8组,阴性对照组免疫生理盐水,试验4、5、6、7、8组分别免疫不同浓度(6×108、3×108、1.5×108、0.75×108、0.375×108/ml)的气管炎疫苗,按上述方法检测不同浓度气管炎疫苗的免疫活性。结果在抗体形成细胞介导的溶血反应中,3个试验组SRBC溶解后释放的血红蛋白的量均明显高于阴性对照组(P0.05)。随着气管炎疫苗浓度的降低,SRBC溶解后释放的血红蛋白的量也呈下降趋势,气管炎疫苗浓度在1.5×108/ml以上时,其免疫活性明显高于阴性对照组(P0.05);低于0.75×108/ml时,与阴性对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论微量溶血分光光度法可用于检测气管炎疫苗的免疫活性。气管炎疫苗浓度在1.5×108/ml以上时,即可增强小鼠免疫功能。     

壮族民间处方药对1型糖尿病大鼠的影响

目的研究壮族民间处方药对1型糖尿病大鼠的影响。方法给健康6~8周龄雄性SD大鼠一次性腹腔注射1%STZ(50 mg/kg)诱导建立1型糖尿病大鼠模型。在造模成功的基础上,血糖稳定1周后,随机分为糖尿病模型对照组、给药组,未注射STZ的健康6~8周龄雄性SD大鼠做为正常对照组,每组各10只。给药组灌胃处方药2 mL/只,1次/d,连续灌胃14天,糖尿病模型对照组和正常对照组灌胃等体积生理盐水。各组分别于给药前及给药后第7天、第14天,测定大鼠空腹12 h(不禁水)血糖。给药组与糖尿病模型对照组及正常对照组做对比,得出结论。结果糖尿病模型对照组大鼠血糖降低不明显,血糖值较正常对照组大鼠高,出现"三多一少"症状。给药组与糖尿病模型组相比,大鼠血糖值降低明显,并始终在正常血糖值范围内,"三多一少"症状明显改善。结论壮族民间处方药能降低1型糖尿病大鼠血糖。     

弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的特异性抗体动态观察

目的观察弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠后诱导的血清IgG、粪便和鼻咽冲洗液中IgA特异性抗体动态,探讨其抗弓形虫感染作用机制。方法96只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以弓形虫复合黏膜疫苗(20μl/只)滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。分别于滴鼻2次(间隔2周)后第1、2、3、4、6、8、10和12周处死小鼠,收集血清、粪便及鼻咽冲洗液,采用ELISA法检测血清IgG以及粪便和鼻咽冲洗液中IgA抗体。结果实验组小鼠血清IgG、粪便及鼻咽冲洗液中IgA均高于对照组,血清IgG水平第3周达高峰,第14、6和8周显著高于对照组;粪便IgA抗体第2周达高峰,第2、3和4周显著高于对照组;鼻咽冲洗液中IgA第1周即达高峰,之后逐渐降低,至第12周仍显著高于对照组。结论弓形虫复合黏膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可诱导高水平的特异性抗体,且可持续较长时间。     

复合活性肽对小鼠耐缺氧和抗疲劳实验研究

目的:观察3种复合活性肽(Complex Active Peptide,CAP)CAP-A、CAP-D、CAP-E对ICR小鼠是否具有耐缺氧和抗疲劳作用.方法:取40只雄性ICR实验小鼠分为4组:空白对照组、CAP-A组、CAP-D组和CAP-E组,每组10只;其中对照组小鼠连续28 d口服灌胃水,其余3组以剂量为1 ...     

单纯疱疹病毒1型(HSV-1)糖蛋白B基因疫苗对HSV-1原发及潜伏感染的抑制作用

目的观察单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus-1,HSV-1)糖蛋白B基因疫苗(pg B)在防治HSV-1原发及潜伏感染的作用。方法将BALB/c小鼠随机分为4组:A组(实验组,注射含质粒pg B的PBS)、B组(阳性对照组,注射灭活的HSV-1病毒液)、C组(载体对照组,注射含质粒pc DNA3的PBS)和D组(空白对照组,注射PBS)。各组小鼠均于双侧股四头肌多点注射,共免疫3次,间隔3周。于末次免疫3周后行角膜划痕接种HSV-1。术后1~14、21和28 d行角膜荧光素染色,在裂隙灯显微镜下观察角膜炎病变形成情况。角膜接种病毒第30天,处死全部小鼠,取三叉神经节,接种Vero细胞,观察病毒潜伏感染形成情况。结果 A组和B组小鼠接种HSV-1后仅有轻度角膜上皮炎发生,且6 d内全部愈合,组间比较差异无统计学意义(P0.05);C组和D组小鼠接种后第2天角膜上皮炎达到高峰,7 d后炎症慢慢消失,与A组比较,差异有统计学意义(P0.05)。A组和B组小鼠接种后未发生角膜基质炎,且无1例死亡;C组和D组小鼠在接种后第5天出现炎症反应,并逐渐加重,接种后11~14 d角膜基质炎达到高峰,在接种后第30天有30%小鼠死亡。Vero细胞检测病毒潜伏感染,A组和B组未发生细胞病变,而C组和D组第5天发生细胞病变。结论 pg B能有效预防实验小鼠HSV-1原发感染,并抑制潜伏感染的形成。     

重组人干扰素γ联合弓形虫STAg鼻内免疫小鼠的免疫保护作用

目的观察重组人干扰素γ(IFNγ)联合可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及抗弓形虫感染作用。方法将BALB/c小鼠随机分为STAg组、STAg+IFNγ组和对照组,分别用20μgSTAg、20μgSTAg+1000UIFNγ和20μlPBS鼻内免疫2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击(4×104个/只),观察小鼠存活情况,并计算存活率,攻击后第43天处死全部小鼠,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷,分离并计数肠上皮淋巴细胞(iIELs)、派伊尔氏结(PP)和脾淋巴细胞,ELISA法检测小鼠粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG水平。结果IFNγ联合STAg鼻内免疫能保护小鼠抵抗弓形虫攻击,小鼠存活率(93%)明显高于STAg组(60%)和对照组(47%);小鼠iIELs(1.81×105)、PP(3.21×107)和脾(3.01×107)淋巴细胞均显著增生,明显高于STAg组和对照组;粪便中sIgA水平(A492=0.435)显著高于对照组(A492=0.047),血清IgG水平(A492=0.233)显著高于STAg组(A492=0.193)和对照组(A492=0.115);肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷显著减少,分别比对照组减少80.90%和64.50%。结论IFNγ联合STAg鼻内免疫效果优于单独STAg免疫,IFNγ能协同STAg有效诱导黏膜和系统免疫应答,提高弓形虫攻击小鼠的存活率,降低肝、脑组织内虫荷。     

肱骨骨折术后骨感染并骨缺损、不愈合的临床分析

目的探讨外支架固定加对冲引流在肱骨粉碎性骨折术后骨感染、骨缺损、不愈合的治疗中的作用。方法在肱骨粉碎性骨折手术后并发感染、骨缺损、不愈合的患者,予以再次手术清创、拆除原内固定,装置对冲引流管以及外支架加压固定,并以两周到四周为间隔再次加压外支架固定器,直到骨折愈合。结果总结了1999年到2007年13例手术治疗结果,术后2～4周感染得到有效控制。其中11例于4～8个月后得到骨折临床愈合,治愈率84.6%;另外2例术后6个月时无明显骨痂生长,且骨质疏松加重,予以再手术植骨内固定,1年后愈合。结论外支架加对冲引流在治疗肱骨骨折手术后骨感染并骨缺损、不愈合是一个行之有效的方法,它可以一期治愈感染,获得伤口愈合,而且持续加压固定有利于骨折愈合。     

新型牛蛙抗菌肽Temporin-La对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的治疗效果

目的探讨新型牛蛙抗菌肽Temporin-La对金黄色葡萄球菌感染模型小鼠的治疗效果。方法采用二倍稀释法检测抗菌肽Temporine-La对临床主要致病菌的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);透射电镜观察Temporine-La对金黄色葡萄球菌的作用效果;复制金黄色葡萄球菌表皮感染小鼠模型,分别用4 U/ml青霉素和10μg/ml Temporin-La进行治疗,另设生理盐水对照组和空白对照组,感染后第4天,对各组小鼠进行白细胞计数、细菌计数、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平检测及病理组织切片观察。结果Temporin-La对革兰阳性菌的抑菌活性高于革兰阴性菌,其中对金黄色葡萄球菌的抑制作用最强;透射电镜观察显示,经100μg/ml Temporin-La处理的金黄色葡萄球菌出现了质壁分离的现象,细胞壁缺失或发生裂解,金黄色葡萄球菌发生裂解而死亡;感染后第4天,青霉素组和Temporin-La组白细胞数及创面下肌肉组织细菌数均明显低于生理盐水对照组(P<0.05或P<0.01),Temporin-La组小鼠血清VEGF的表达水平明显高于青霉素组和空白对照组(P<0.05),青霉素组和Temporin-La组小鼠的创口修复情况明显优于生理盐水对照组。结论 Temporin-La具有抗小鼠金黄色葡萄球菌感染的效果,为其临床应用提供了实验依据,也为抗感染治疗提供了新的思路。     

STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用

目的探讨可溶性速殖子抗原(STAg)联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用及蜂胶的适宜剂量。方法将60只BALB/c小鼠随机分为5组,每组12只,分别用20μgSTAg、20μgSTAg+5μg蜂胶、20μgSTAg+10μg蜂胶、20μgSTAg+20μg蜂胶及20μgSTAg+40μg蜂胶鼻内免疫小鼠2次,间隔14d。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击,4×104个/只,观察小鼠存活情况。攻击后第30天处死全部小鼠,分离计数小鼠脑、肝组织内速殖子和肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)、脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平。结果随着蜂胶剂量的增加,小鼠脑、肝速殖子数呈下降趋势,20μgSTAg+40μg蜂胶组显著低于20μgSTAg组,脑、肝组织减虫率分别为46.10%和60.11%;MLNL和脾T淋巴细胞增殖活性提高,其中20μgSTAg+40μg蜂胶组小鼠MLNL和脾T淋巴细胞数分别为(2.09±0.24)×107和(1.89±0.21)×107,均显著高于20μgSTAg组;肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平呈增高趋势,但各组间差异无统计学意义。结论STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠可有效诱导抗弓形虫感染的保护作用,适宜的蜂胶剂量为40μg。     

卡介苗溶菌黏膜免疫调理剂对实验性免疫功能低下小鼠的免疫调节作用

目的观察卡介苗溶菌黏膜免疫调理剂(BCG-b)对实验性免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。方法将BALB/c小鼠分为BCG-b高、中、低剂量组,每只分别隔日灌服BCG-b20、5和1U/0.2ml;阳性对照组每只隔日灌服阿胶液0.2ml,阴性对照组每只隔日灌服生理盐水0.2ml;正常对照组不给任何药物。除正常对照组外,其余各组均服药10次,并于首次服药后第14日皮下注射环磷酰胺,100mg/kg,建立免疫功能低下小鼠模型。以碳粒廓清法、血清溶血素测定法及3H-TdR掺入法分别检测各组小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能、特异性体液免疫功能以及T淋巴细胞转化功能。结果与阴性对照组相比,BCG-b3个不同剂量组小鼠单核-巨噬细胞的吞噬功能和特异性抗体血清溶血素含量明显提高,小鼠T淋巴细胞转化功能呈双向性调节作用,即高、中剂量表现为抑制作用,低剂量表现为促进作用。结论BCG-b对实验性免疫功能低下小鼠具有明显的免疫调节作用。     

重组弓形虫Peroxiredoxin蛋白诱导小鼠的免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用

目的观察不同剂量重组弓形虫Peroxiredoxin蛋白(rTgPrx)诱导小鼠的体液免疫、细胞免疫应答及其抗弓形虫感染的保护作用。方法BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别用20、40、60、80μgrTgPrx(溶于100μlPBS中)和100μlPBS皮下免疫小鼠3次,间隔2周。末次免疫后第14天,用1×104个速殖子/只灌胃攻击,逐日观察小鼠健康状况。攻击后第30天,ELISA法检测小鼠血清IgG和小肠冲洗液sIgA水平,分离并计数脾淋巴细胞和小肠上皮内淋巴细胞(IEL),分离肝、脑组织内弓形虫速殖子并计数。结果60μgrTgPrx组小鼠血清IgG水平显著高于PBS、20μg和40μgrTgPrx组,小肠冲洗液sIgA组间比较差异无统计学意义;80μgrTgPrx组小鼠脾淋巴细胞数量明显高于PBS和20μgrTgPrx组,IEL数量各组间差异无统计学意义;60μg和80μgrTgPrx组小鼠脑和肝组织虫荷均低于PBS和20μgrTgPrx组。结论60μg和80μgrTgPrx皮下免疫小鼠可诱导有效的体液免疫、细胞免疫应答,且抗弓形虫感染的保护作用效果良好。     

东方马脑炎病毒E2蛋白的表达、纯化及免疫原性

目的表达、纯化东方马脑炎病毒(eastern equine encephalitis virus,EEEV)E2蛋白,并检测其对小鼠的免疫原性。方法利用IPTG诱导重组大肠埃希菌BL21-pET30-EEEV-E2,表达E2蛋白,用包涵体纯化试剂盒纯化重组E2蛋白,进行SDS-PAGE和Western blot分析。将BALB/c小鼠随机分为4组:PBS对照组、弗氏佐剂对照组(弗氏佐剂与PBS按体积比1∶1乳化)、E2蛋白组(E2蛋白与PBS按体积比1∶1混合)和E2蛋白+弗氏佐剂组(E2蛋白与弗氏佐剂按体积比1∶1乳化),每组10只,各组均经小鼠后肢肌肉免疫3次,两次免疫间隔时间均为14 d,免疫剂量均为100μl/只。第2次免疫后第7天,采用流式细胞术检测小鼠体内CD4+和CD8+T细胞比例;第2次免疫后第14天,采用细胞因子ELISA定量试剂盒检测小鼠血清中IL-2、IL-4和IFNγ的含量;第3次免疫后第7天,采用MTT法检测小鼠淋巴细胞增殖情况;每次免疫后第14天,采用ELISA法检测小鼠血清中IgG抗体效价。结果表达的重组E2蛋白相对分子质量约为53 000,表达量为菌体总蛋白的26.3%;纯化的重组E2蛋白纯度达95%以上;表达和纯化的重组E2蛋白均可与鼠抗His标签单克隆抗体结合。与PBS对照组、弗氏佐剂对照组和E2蛋白组相比,E2蛋白+弗氏佐剂组小鼠体内CD4+与CD8+T细胞比值、血清中IL-2、IL-4和IFNγ浓度、体内淋巴细胞增殖指数均明显升高(P﹤0.01);小鼠初次免疫后即可产生E2蛋白IgG抗体,且随着免疫时间的延长,抗体效价逐渐上升,第3次免疫后第14天,抗体效价可达1∶320。结论表达并纯化了重组E2蛋白,其能使小鼠产生较强的免疫反应,为新型EEEV疫苗的研制提供了参考。     

马蹄香对小鼠的急性毒性及对大鼠的亚急性毒性观察

目的观察马蹄香(Valeviana jatamansi Jones)对小鼠的急性毒性及对大鼠的亚急性毒性,以评价其安全性。方法给小鼠灌服5 000、7 500、10 000 mg/kg的马蹄香,对照组灌胃1%羧甲基纤维素钠(CMC),观察小鼠的中毒症状,记录小鼠的死亡数,采用Red-Munchen法计算半数致死量(LD50),并检查小鼠组织和脏器的病理变化;对大鼠分别灌服4 000、1 000和200 mg/kg的马蹄香,连续给药14 d,对照组灌胃CMC水溶液,给药后观察14 d,检测大鼠体重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化情况。结果急性毒性试验结果显示,灌胃马蹄香后,小鼠短时间内出现活动减少,而后趋于正常,病理学检测未发现小鼠组织或脏器有明显异常改变,LD50>10 000 mg/kg;亚急性毒性试验结果显示,马蹄香各剂量组大鼠的增重、脏器系数、血常规指标、血生化指标及组织病理变化与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论马蹄香具有较好的安全性。