let-7a及其靶基因在肝细胞癌中作用机制的研究进展

肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是全球范围内最具侵袭性的恶性肿瘤之一,具有较高的复发率和死亡率。大多数恶性肿瘤中微小RNA(microRNA,miRNA)呈异常表达,可影响肿瘤的发生、发展、转移和复发。miRNA可通过靶向不同靶基因,参与不同信号通路,从而在疾病的发生发展、生物发育、器官形成、病毒防御、表观调控及代谢等生命活动起到调控作用。let-7a是let-7 miRNA家族成员之一,参与细胞的增殖、凋亡等生物学过程,且在多种癌症中发挥肿瘤抑制因子的作用。本文就let-7a及其靶基因在HCC中作用机制的研究进展作一综述。     

肝细胞癌患者血浆骨桥蛋白表达水平与术后复发及预后的关系

目的 分析肝细胞癌(HCC)患者血浆骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达水平和术后转移复发及生存预后之间的关系,评价OPN在预测肝癌术后复发及预后中的作用.方法 应用酶联免疫吸附(ELISA)法测定101例HCC患者的血浆OPN表达水平,统计分析血浆OPN表达水平和临床病理指标以及生存预后的关系.结果 101例HCC患者外周血中均有OPN表达,中位水平为176.90 μg·L-1(13.73 μg·L-1～780.00 μg·L-1),平均水平为(218.94±149.18)μg·L-1,血浆OPN水平和肿瘤数目(P=0.002)、分化(Edmondson分级)(P=0.015)以及TNM分期(P=0.016)有关.有术后复发的患者比无复发患者血浆OpN表达明显增高(213.55 μg·L-1和153.70 μg·L-1,P=0.0013).OpN低表达组患者(≤200 μg·L-1)的总生存(OS)时间和无瘤生存(DFS)时间均明显高于OPN高表达组(＞200 μg·L-1)(P=0.0001),OPN低表达组患者的OS和DFS时间分别为774d和571d;而OPN高表达组患者的OS和DFS时间分别为635d和398d.应用COX回归模型进行单因素和多因素分析均表明血浆OPN浓度是影响肝癌患者生存预后的一个独立危险因素.结论 血浆OPN表达水平与肝细胞癌患者术后复发和生存预后密切相关,有望成为临床有用的一个预测指标.     

鱼精蛋白1在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义

目的比较鱼精蛋白1(Protamines 1,PRM1)在结肠腺癌组织中的表达及其临床意义。方法通过实时荧光定量PCR法检测53例结肠腺癌及正常结肠组织中PRM1基因mRNA水平,并分析PRM1 mRNA检测对于结肠腺癌诊断的敏感性;SP免疫组化染色法检测组织中PRM1蛋白的表达水平。结果结肠腺癌组织中PRM1基因mRNA水平明显高于正常结肠组织,差异有统计学意义(P<0.05),总体阳性率为96.23%(51/53);结肠腺癌组织高表达PRM1,且能够分泌入腺腔。结论结肠腺癌细胞在基因及蛋白水平均高表达PRM1,PRM1 mRNA检测对结肠腺癌的诊断具有参考价值。     

PLCH1基因在食管鳞状细胞癌中的表达及其对细胞增殖、迁移的影响

目的 检测PLCH1基因在食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中的变异及表达情况，分析PLCH1在食管癌中的功能，并初步探讨其作用机制。方法 利用GISTIC分析PLCH1在ESCC中的拷贝数变异情况，TCGA数据库及免疫组织化学法检测PLCH1在ESCC与正常食管组织中的表达情况。通过实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot检测ESCC细胞系中PLCH1的表达情况。采用MTT、克隆形成试验、Transwell法等检测PLCH1沉默对ESCC细胞增殖及迁移能力的影响。结果 PLCH1在ESCC中存在显著的拷贝数扩增（G-scores> 0.1,P <0.05）,ESCC中PLCH1 mRNA及蛋白表达水平均显著高于正常组织（F=36.00～1 101.00,P均<0.000 1）。PLCH1沉默后，ESCC细胞KYESE180和TE-9的增殖能力、克隆形成能力及迁移能力均显著降低（F=35.49～634.00,P均<0.001）。结论 PLCH1在ESCC中发挥癌基因作用，对ESCC的转...     

CXCR4在乳腺癌中的表达及乌斯他丁对其表达的影响

目的探讨趋化因子受体CXCR4在乳腺癌中的表达及其与肿瘤转移的相关性,以及乌斯他丁(UTI)对其表达的影响。方法采用流式细胞术和RT-PCR法检测22例乳腺癌患者的癌组织、癌旁组织、正常组织以及乳腺癌细胞MDA-MB-231中CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达情况,以及UTI对MDA-MB-231细胞CXCR4表达的影响。结果在乳腺癌组织和MDA-MB-231细胞中,CXCR4在蛋白和mRNA水平的表达均显著高于癌旁组织和正常组织,且CXCR4的表达与乳腺癌的转移密切相关;UTI能下调CXCR4的表达,经UTI作用后,MDA-MB-231细胞的趋化活性降低。结论CXCR4在乳腺癌中高表达,在乳腺癌的转移中起重要作用,下调乳腺癌细胞CXCR4的表达水平可减少或抑制其转移。     

基于芯片数据库荟萃分析及免疫组化检测Ferroportin1在不同肿瘤中表达的研究

目的阐明Ferroportin1(FPN1)mRNA及蛋白在人胃癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌及肝癌等多种肿瘤组织与癌旁组织中的表达分布情况,为肿瘤的诊断和治疗寻找新的靶点。方法利用Oncomine数据库,对多种肿瘤组织及正常组织中FPN1 mRNA的表达情况进行挖掘及荟萃分析。同时,采用免疫组织化学方法,研究FPN1蛋白在人类胃癌、结直肠癌、乳腺癌、肺癌及肝癌肿瘤组织和癌旁组织中的表达。结果结果发现,经数据挖掘FPN1 mRNA在神经系统肿瘤、食管癌、畸胎瘤中表达上调;在白血病、肺癌、卵巢癌、前列腺癌中表达下调。FPN1蛋白在结肠及肝脏组织中表达相对较高(中度阳性),在被检测的五种肿瘤标本中,其表达均有不同程度降低,却仅在乳腺癌及肝癌中存在统计学差异(P0.05)。结论免疫组化证实FPN1蛋白表达在乳腺癌及肝癌组织中显著降低,而芯片数据却未发现其mRNA表达的相同趋势,这可能提示转录后调节在FPN1的表达调节中发挥更为主要的作用,且其有望作为乳腺癌及肝癌的诊断及治疗新靶点。     

胎衣不下奶牛母体胎盘中血管内皮生长因子A异常表达的分析

目的分析胎衣不下(retained fetal membrane,RFM)奶牛母体胎盘组织中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A,VEGFA)的表达情况。方法提取RFM及胎衣正常排出奶牛母体胎盘组织中的总蛋白,采用荧光定量PCR及Western blot法检测两组奶牛母体胎盘组织中VEGFA的mRNA转录及蛋白表达水平。结果与胎衣正常排出组相比,RFM组奶牛母体胎盘组织中VEGFA的mRNA转录及蛋白表达水平均显著降低,差异均有统计学意义(P 0. 01)。结论发生RFM的奶牛母体胎盘组织中VEGFA表达减少,提示VEGFA可能参与该病的发生发展。     

肝癌组织中Wnt通路上下游因子的表达及其临床意义

目的探讨Wnt通路Wif-1、C-myc、Cycling-D1mRNA及蛋白在正常肝组织、肝硬化及肝癌组织中的表达及其与肝癌临床病理参数的相关性。方法运用免疫组织化学SP法与原位杂交技术检测100份肝癌组织、50份肝硬化组织、50例正常肝组织中Wif-1、C-myc、Cycling-D1蛋白及mRNA的表达,并测定肝癌组织中的Wif-1、C-myc和Cycling-D1的阳性率、敏感性及特异性。结果肝硬化与肝癌组织中Wif-1 mRNA及蛋白的阳性细胞表达率明显低于正常肝组织(P<0.05),C-myc和Cycling-D1mRNA及蛋白的阳性细胞表达率明显高于正常肝组织(P<0.05)。肝癌组织中Wif-1、C-myc和Cycling-D1mRNA及蛋白的阳性表达均与HBV分级、TNM分期及β-catenin异质表达显著相关(P<0.05)。Wif-1、C-myc和Cycling-D1mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达呈正相关(rWif-1=0.892,rC-myc=0.354,rCycling-D1=0.378)。肝癌组织中mRNA及蛋白的敏感性:Wif-1:9.09%、11.11%,C-myc:91.38%、89.66%,Cycling-D1:91.67%、82.5%,特异性:Wif-1:97.75%、95.6%,C-myc:82.5%、85.71%,Cycling-D1:92.86%、81.82%。结论肝癌的侵润和β-catenin的异质表达均与Wif-1下降,C-myc及Cycling-D1上调相关。     

ClC-2氯通道在大鼠小梁网中的表达

目的分析电压门控性氯通道ClC家族中的ClC-2氯通道在大鼠小梁网中的表达,探讨ClC-2在青光眼发病机制中的可能作用。方法经前房内注射玻璃酸钠建立大鼠慢性高眼压模型,取正常大鼠及模型大鼠小梁网组织,采用RT-PCR法检测ClC-2基因mRNA的转录水平,免疫组化法检测ClC-2蛋白的表达水平。结果在正常大鼠和慢性高眼压模型大鼠小梁网组织中,均可检测到ClC-2的表达,且模型大鼠ClC-2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均较正常大鼠降低。结论大鼠小梁组织中存在ClC-2氯通道的表达,该通道的表达受小梁网的一些病理因素的影响。     

抑制乳腺癌耐药蛋白基因逆转肝癌多药耐药的体内实验

目的探讨小片段RNA干扰抑制乳腺癌耐药蛋白(BCRP)基因及其蛋白表达在裸鼠体内逆转人肝癌组织多药耐药(MDR)的可行性。方法建立裸鼠多药耐药肝细胞癌模型,随机分为A组和B组,A组(对照)注射生理盐水40μl+Lipo-fectamine200010μl,B组注射BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP40μl+Lipofectamine200010μl,两组均行瘤内注射1次。5d后,各组均经腹腔注射阿霉素5mg/kg化疗,每5d给药1次,共4次。彩色B超测量肿瘤体积;化疗结束后1周处死裸鼠,RT-PCR及Westernblot法检测各组裸鼠肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平。结果B组每次化疗后肿瘤体积均明显缩小;除第1次化疗外,其余各次化疗后肿瘤体积均小于A组;化疗结束后,B组与A组相比,肿瘤组织中BCRP基因mRNA的转录水平和BCRP蛋白的表达水平均明显降低。结论BCRP基因RNAi质粒pSUPER-BCRP可有效降低裸鼠肝癌组织BCRP基因mRNA的转录水平及其蛋白的表达水平,在一定程度上逆转MDR,为从基因水平逆转MDR提供了初步的实验依据。     

运用实时荧光定量RT-PCR检测人正常组织及肿瘤组织中BRDT表达

目的探讨BRDT基因在正常组织及癌组织中的分布及其作为肿瘤治疗靶分子的可能性。方法运用实时荧光定量PCR方法分析BRDT在人正常组织及癌组织中的表达,使用18S rRNA作为内对照。结果在所检测的正常组织中该蛋白的mRNA只存在于睾丸组织中,而在其它组织不表达;在检测的10例胃腺癌组织标本中,有6例mRNA的微弱表达;在检测的10例食管鳞状细胞癌组织标本中,有3例mRNA的微弱表达;在检测的12例子宫颈鳞状细胞癌组织标本中均未有表达;在检测9例子宫内膜腺癌组织标本中,有2例微弱表达;在检测12例脑癌组织标本中,只有1例微弱表达。结论BRDT不可能作为子宫颈鳞状细胞癌、脑癌、子宫内膜腺癌及食管鳞状细胞癌治疗的潜在分子靶点,是否能够做胃腺癌的靶点还需进一步探讨。     

蛋白酶激活受体-2在胃间质瘤组织中的表达及其临床意义

目的探讨蛋白酶激活受体-2(Protease activated receptor-2,PAR-2)在胃间质瘤组织中的表达及其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性。方法采用RT-PCR、Western blot及免疫组化法检测PAR-2在72例胃间质瘤患者的瘤中心组织、瘤旁组织及正常胃组织中的表达,并分析其与胃间质瘤临床病理特征之间的相关性。结果瘤旁组织和瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显高于正常组织(P<0.05或P<0.01),瘤中心组织中的表达水平明显高于瘤旁组织(P<0.01)。瘤中心组织中PAR-2基因mRNA的转录水平和蛋白的表达水平均随着NIH分级的升高而上调(P<0.05或P<0.01),且与黏膜受侵情况密切相关(P<0.05)。结论胃间质瘤组织中PAR-2的表达水平明显高于瘤旁组织和正常胃组织,PAR-2的高表达可能与间质瘤的侵袭与转移相关。     

神经内分泌因子对体外培养肝细胞ApoB100 mRNA丰度的影响

目的分析神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白对体外培养肝细胞ApoB100 mRNA丰度的影响,以阐明其在奶牛肝极低密度脂蛋白(VLDL)组装与转运中的调控作用。方法在体外培养的肝细胞培养液中分别添加胰岛素、胰高血糖素和廋蛋白,应用实时荧光定量PCR法检测神经内分泌因子对体外培养肝细胞中载脂蛋白B100(ApoB100)mRNA丰度的影响。结果随着细胞培养液中胰岛素和瘦蛋白浓度的增加,肝细胞中ApoB100 mRNA的水平逐渐降低;而随着培养液中胰高血糖素浓度的升高,ApoB100 mRNA水平呈先升高后降低的趋势。结论神经内分泌因子胰岛素、胰高血糖素和瘦蛋白通过影响ApoB100 mRNA的表达水平来调控肝细胞中VLDL的组装与转运。     

CENP-E变异体在不同肿瘤细胞株及癌组织中的表达差异

目的研究CENP-E变异体(CENP-EⅠ)在不同肿瘤细胞株及癌组织和相应的癌旁组织中的表达情况。方法应用巢式RT-PCR检测14个细胞株和17份癌组织及相应癌旁组织标本中CENP-EⅠmRNA(缺失第38个外显子)的表达情况,并比较变异体和野生型CENP-E(CENP-EWT) mRNA的表达差异;应用巢式PCR检测上述标本中CENP-E在DNA水平上的变异;并通过细胞增殖试验、细胞周期检测和染色体核型鉴定,分析CENP-EⅠ与细胞恶性程度的相关性。结果 RT-PCR结果显示,实验样本中CENP-E mRNA均有CENP-EWT和CENP-EⅠ两种形式同时存在于一种组织或细胞中,且在正常细胞株和癌旁组织中CENP-EWT表达量较高,在肿瘤细胞株和癌组织中CENP-EⅠ表达量较高,且差异有统计学意义(P<0.05);样本中CENP-E在DNA水平上不存在第38个外显子缺失,且细胞间CENP-E表达量的差异无统计学意义(P>0.05);CENP-EⅠ与细胞的恶性程度有一定的相关性。结论同一细胞内存在2种或2种以上形式的CENP-E mRNA,CENP-E变异体可能与肿瘤的发生有关。     

人NIRF基因真核表达质粒的构建及其在HepG2.2.15细胞中的表达

目的构建人NIRF基因真核表达质粒,并在HepG2.2.15细胞中表达NIRF蛋白。方法从HeLa细胞中提取总RNA,设计特异性引物,通过RT-PCR法扩增NIRF基因编码区全长序列,插入到pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-NIRF,转染HepG2.2.15细胞,检测细胞中NIRF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果重组真核表达质粒pIRES2-EGFP-NIRF经双酶切及测序鉴定证明构建正确,转染HepG2.2.15细胞后,可检测到细胞中NIRF基因mRNA的转录及蛋白的表达。结论已成功构建了人NIRF基因真核表达质粒,并在HepG2.2.15细胞中表达了NIRF蛋白,为下一步研究其在肿瘤组织中的功能奠定了基础。     

半乳糖化温敏水凝胶的制备及其作为原代肝细胞培养载体的研究

文章在前期工作基础之上,进一步研究半乳糖糖化温敏水凝胶P（NIPAAm-co-GAC）的生物相容性.通过原位胶原酶灌注法分离得到大鼠正常肝细胞,将其接种于P（NIPAAm-co-GAC）水凝胶表面,在未加任何生长因子的前提下研究肝细胞的增殖行为及细胞功能的表达情况,MTT实验结果表明含有肝细胞特异性吸附配体的P（NIPAAm-co-GAC）（r=0.4）水凝胶能够促进细胞粘附增殖,细胞受损伤程度低,细胞膜保持较好的完整性（LDH漏出量少）并降低了细胞的炎症反应（ALT、AST、ALT/AST比值低）,不会引起细胞坏死,并且肝细胞能保持其合成分泌白蛋白、尿素的功能.研究正常肝细胞比研究肝肿瘤细胞或其它细胞系细胞具有更大的临床价值,为其进一步应用于生物人工肝领域提供充分的理论依据.     

血小板源性生长因子-D和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨血小板源性生长因子-D(Platelet-derived growth factor D,PDGF-D)和表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(Epidermal growth factor receptor typeⅢmutant,EGFRvⅢ)在膀胱移行细胞癌(Bladder transitional cell carcinoma,BTCC)中的表达及其临床意义。方法分别采用RT-PCR法和免疫组织化学SP法检测PDGF-D和EGFRvⅢ在80例BTCC组织和10份癌旁正常组织中的转录及表达情况,并分析二者与患者临床病理特征之间的相关性。结果 BTCC组织中PDGF-D和EGFRvⅢ在mRNA和蛋白水平上的表达均显著高于癌旁正常组织(P<0.05);PDGF-D和EGFRvⅢ的表达与BTCC不同病理分级和TNM分期有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤单发和多发、初发和复发无关(P>0.05);PDGF-D与EGFRvⅢ的表达呈正相关(r=0.994,P<0.01)。结论 PDGF-D和EGFRvⅢ在BTCC组织中的表达与病理分级及TNM分期明显相关,可作为判断BTCC恶性程度、浸润与进展的重要生物学指标。     

细胞焦亡及其在肝细胞癌中作用的研究进展

细胞焦亡是一种新的细胞程序性死亡方式，在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）的发病机理中起双重作用：一方面，引起细胞焦亡的炎症小体以及焦亡过程中释放的炎性介质会促进肝癌的发生发展；另一方面，焦亡可抑制肝癌细胞的增殖、转移和侵袭。随着研究的深入，细胞焦亡在肝癌中的作用越来越突出。本文就细胞焦亡在HCC进展过程中的潜在影响以及在抗癌治疗中的作用作一综述。     

阿魏酸钠对大鼠纤维化心肌组织中结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨阿魏酸钠(Sodium ferulate,SF)对大鼠纤维化心肌组织中结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)表达的影响。方法一次性皮下注射盐酸异丙肾上腺素(Isoproterenol,Iso)15mg/kg体重,复制Wistar大鼠心肌缺血性坏死模型,于不同时间点脱臼处死大鼠,取心脏,采用半定量RT-PCR法检测大鼠组织中CTGF基因mRNA的转录水平,免疫组化法检测CTGF蛋白的表达水平。再次复制大鼠心肌缺血坏死模型,同时注射SF进行同步干预,3周后检测大鼠心肌组织中CTGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果注射Iso后24h,CTGF基因mRNA的转录水平达高峰,较正常对照组明显增加,3周时仍高于正常对照组;CTGF蛋白的表达随纤维化病变程度的加重而增加。SF干预后,CTGF基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显下降。结论 CTGF的表达与大鼠心肌纤维化(Myocardial fibrosis,MF)程度密切相关,提示CTGF可能在MF中起重要作用;SF对CTGF的表达具有抑制作用。     

CDCA7调控CCNB1IP1表达影响食管鳞癌发生发展的作用机制

目的 探讨CDCA7对食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）细胞系KYSE450、KYSE150和KYSE180体外增殖能力的影响,并进一步分析CDCA7促进ESCC细胞增殖的作用机制。方法 利用CDCA7-siRNA敲低KYSE150和KYSE450细胞系中的CDCA7,并利用过表达载体在KYSE180细胞系中进行CDCA7的外源表达;通过qRT-PCR和Western blot法检测KYSE150、KYSE450细胞系CDCA7的敲低效率和KYSE180细胞系CDCA7的外源过表达效率;CCK8、硬克隆试验检测CDCA7对ESCC细胞体外增殖能力的影响;染色质免疫共沉淀测序（chromatin immunoprecipitation sequencing,ChIP-sequence）寻找CDCA7调控的下游靶基因,Western blot和qRT-PCR法分别检测敲低和过表达细胞系中靶基因CCNB1IP1的mRNA和蛋白表达水平;采用TCGA数据库转录组数据分析CDCA7与CCNB1IP1的mRNA表达水平的相关性;双荧光素酶报告...