响应面法优化碱蓬根总生物碱的提取工艺及其抑菌活性

为优化碱蓬根总生物碱的提取工艺,并研究其抑菌活性,以碱蓬根为原料,在单因素实验基础上,采用响应面法确定碱蓬根总生物碱的最佳提取条件,管碟法及两倍稀释法检测碱蓬根总生物碱提取物对三种常见致病菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌)的抑制效果。结果表明,当料液比为1:25 g/mL,乙醇浓度86%,提取温度78 ℃,提取时间2.1 h时,总生物碱得率最高为0.521%±0.04%。碱蓬根总生物碱对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果,最低抑菌浓度为0.4 mg/mL,对枯草芽孢杆菌无抑菌性。该提取工艺高效可行,可用于碱蓬根中总生物碱的提取,同时提取物具有一定的抑菌性。     

一种快速高效的DNA提取方法及其在qPCR检测金黄色葡萄球菌中的应用

探究一种高效快速便捷地提取菌体DNA的方法,并将其应用于金黄色葡萄球菌的定量检测。运用热裂解过柱法和直接热裂解法提取菌体DNA,同时用试剂盒法提取DNA作为对比。用qPCR检测技术对样本DNA的提取效果进行验证,并将最优的提取方法应用于纯培养的和人工污染的鱼样品中金黄色葡萄球菌的检测。qPCR检测结果显示热裂解过柱法仅比试剂盒法低一个梯度,体现了热裂解过柱法良好的稳定性、高效性和实用性。热裂解过柱法可高效提取样品中金黄色葡萄球菌的DNA,结合qPCR技术,其检测灵敏度可达1.04×10~2 cfu/m L。     

食用菌总DNA提取方法的研究

采用SDS法、SDS-CTAB法、氯化苄法等3种方法,同时对多种食用菌的总DNA进行提取,提取到的总DNA经琼脂糖凝胶电泳分析,表明采用SDS法提取的几种食用菌的总DNA质量最好,基本无DNA碎带;酶切试验结果进一步证明采用SDS法提取的总DNA已可直接用于限制性内切酶酶切试验,乃至PCR扩增和RAPD分析等.     

一种转基因甘蔗基因组DNA的快速提取方法

采用改良的SDS法快速微量提取转基因甘蔗幼苗总DNA,电泳条带清晰,质量较好,完全能够满足PCR检测需要.     

适合于银柴胡饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法的研究

目的:建立适合银柴胡中药饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法。方法:本实验利用试剂盒提取法(对照)、改良高盐低pH法、改良CTAB法、改良SDS法,对银柴胡饮片样本进行总DNA提取,并对于提取结果进行紫外检测、琼脂糖凝胶电泳检测,并选取最优结果进行PCR扩增检测。结果:三种DNA提取的改良方法中,改良CTAB法效果最好,提取的DNA纯度好、含量多。结论:改良CTAB法提取获得的银柴胡DNA,经PCR扩增结果可满足后续DNA条形码鉴定。     

速冻面米制品中金黄色葡萄球菌DNA提取方法的比较分析

DNA的提取效率是影响食品中致病菌PCR检测的关键因素。以速冻面米制品中最易污染的金黄色葡萄球菌为研究对象,比较4种DNA提取方法(CTAB法、离心柱法、氨基化纳米磁珠法、羧基化纳米磁珠法)的效率和质量,对提取的DNA采用荧光定量PCR方法评价。结果表明,在三大类速冻面米制品(肉馅类、素馅类和无馅类)人工污染金黄色葡萄球菌的样品中,羧基化纳米磁珠法和氨基化羧纳米磁珠法的提取效率显著优于CTAB法和离心柱法,可推荐为速冻面米制品中金黄色葡萄球菌污染快速定量检测的DNA提取方法 。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量。方法用酚-氯仿法、改良CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量。结果改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带。结论改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法。     

黄酒麦曲微生物总DNA提取方法比较

为得到高质量提取麦曲总DNA的方法,采用SDS法、氯化苄法、CTAB法、超声波法、Soil DNA kit法、SDS高盐法及SDS-CTAB法对黄酒麦曲中总DNA的提取效果进行了比较,通过凝胶电泳、PCR、紫外分光光度计及Real-time PCR对不同方法提取产物进行分析得出7种方法中SDS-CTAB法对于提取麦曲总DNA效果最好,蛋白、多糖及小分子等污染较少,DNA提取的质量浓度达到149.6 ng/μL,相对于SDS法,细菌和真菌模板数分别达到其2.343倍和1.753倍。     

苦瓜基因组DNA提取方法的比较研究

目的 研究不同方法提取的苦瓜基因组DNA的质量.方法 用酚-氯仿法、改良CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)法、试剂盒法提取苦瓜基因组DNA,用Southern杂交和内参PCR检测提取DNA的质量.结果 改良CTAB法提取的苦瓜基因组DNA A260/A280=1.85,A260/A230=1.96,Southern杂交检测和PCR扩增都显示内参条带.结论 改良CTAB法是提取苦瓜基因组DNA的最适方法.     

石斛基因组DNA提取方法比较研究

目的：比较3种基因组DNA提取试剂盒对提取富含多糖多酚类物质的铁皮石斛和霍山石斛鲜叶及冻叶的提取效果。方法：对提取的DNA进行纯度及产率检测、电泳质量分析及ITS2 PCR扩增效率检测。结果：市售基于蛋白酶K消化法的试剂盒不适用于石斛DNA提取；基于改良CTAB法的试剂盒更适用于需要较高DNA模板量的石斛鲜叶的DNA提取；基于改良SDS法的试剂盒更适用于石斛冻叶的DNA提取，该法提取的鲜叶DNA完整性最佳，更适用于对DNA完整度要求较高的DNA大片段的分析研究。结论：基于改良CTAB法和改良SDS法的试剂盒提取的石斛鲜叶及冻叶的基因组DNA均适用于常规分子检测。     

食品质量与安全专业探究性试验教学的实践——以肉制品基因组DNA提取为例

以肉制品为试验材料,对改良CTAB法、高盐法、改良SDS法三种不同基因组DNA提取方法,以及五种不同的样品前处理方法进行比较研究。通过紫外分光光度法测定A260/280、琼脂糖凝胶电泳法、实时荧光定量PCR测定Ct三种不同的方法评估所提取的DNA质量。最终确定60℃烘干处理结合高盐法提取的DNA质量最好。该实践教学中涉及资料检索、试验方案设计、试验结果分析等科研探索步骤,有助于提高学生的试验技能及综合能力,从而培养符合现代社会发展需求的创新型、应用型人才。     

莲雾果实高质量总RNA提取方法的建立

为从莲雾果实中提取高质量RNA,以“黑珍珠”莲雾果实为材料,采用试剂盒法、十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）法、十六烷基三甲基溴化铵（hexadecyltrimethylammonium bromide,CTAB）法、改良CTAB法和Trizol法5 种总RNA提取方法进行比较分析。结果表明,SDS法得到的总RNA质量较差,有严重的降解和DNA污染;Trizol法提取物中有较多蛋白和多糖等残留,无条带出现。CTAB法、改良CTAB法和试剂盒法均能获得质量较好的莲雾果实总RNA,经实时荧光定量聚合酶链反应验证得到条带与目的片段大小一致,表明该RNA均能满足后续分子生物学研究。     

乳品中3种常见细菌多重PCR检测方法的建立

分别以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌标准株为样本,提取其DNA,以大肠杆菌的pho A基因、金黄色葡萄球菌的nuc A基因和沙门氏菌的inv A基因作为靶基因,建立可以同时检测这3种菌株的多重PCR方法。与国标法对照,探讨多重PCR技术检测乳品样品中3种细菌的灵敏性和特异性。结果表明,建立的多重PCR检测方法与国标法检测的结果一致,人工模拟试验结果稳定,多重PCR具有快速、敏感和特异性强的特点。     

晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA提取方法的比较

为了找到一种简单高效的晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA提取方法,本文采取对提取的微生物基因组DNA进行浓度测定的方法,比较了溶菌酶-SDS-蛋白酶K法、改良CTAB法和改良CTAB-溶菌酶法三种方法的提取效果。结果表明:溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果最好,可以获得质量较高的微生物基因组DNA,DNA浓度为1657.53 ng/μL;改良CTAB-溶菌酶法比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法效果差,DNA浓度为1308.08 ng/μL;改良CTAB法对微生物基因组DNA的提取效果比溶菌酶-SDS-蛋白酶K法更差,DNA浓度为1098.36 ng/μL。以提取到的微生物基因组总DNA为模板,进行16S r DNA基因的PCR扩增,在回收产物中目的条带清晰,表明提取到的微生物基因组DNA含量高、结构完整。整体实验结果表明,溶菌酶-SDS-蛋白酶K法对于提取晋西北酸粥发酵过程中微生物基因组DNA效果最好。     

雪蛤基因组DNA提取方法的研究及条形码分子鉴定

高质量的DNA是开展分子生物学研究的基础,雪蛤基质由于含有大量脂肪、蛋白质和多糖,严重干扰其基因组DNA的提取。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、加酶洗洁精法、十二烷基苯磺酸钠(SDS)法、SDS结合CTAB法提取雪蛤基因组DNA,通过紫外分光光度法、凝胶电泳法及CoⅠ序列扩增法比较了4种提取方法得到的DNA质量。结果显示,加酶洗洁精法、SDS法、SDS结合CTAB法均可提取到雪蛤DNA,其中以SDS结合CTAB法获得的DNA质量最佳。通过与基原物种的DNA条形码进行比对,证明3种方法均可提供符合要求的DNA,为雪蛤的分子生物学研究奠定了基础。     

用于PCR检测的乳品中金黄色葡萄球菌DNA提取方法比较研究

比较了乳品中金黄色葡萄球菌DNA的6种提取方法的效果,确定了一种可有效从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA的方法。该方法无需对样品进行增菌,可直接从乳品中提取金黄色葡萄球菌DNA,作为模板进行PCR检测,检测效果良好,对UHT全脂乳、脱脂乳和奶酪的最低检出限分别为10、10CFU/mL和55CFU/g。     

不同提取方法对粳米淀粉结构的影响

本实验从淀粉形态学、直链淀粉含量、支链淀粉分子量和支链淀粉侧链分布等方面研究碱法、酶法、SDS结合超声波法提取对粳米淀粉结构的影响.得到以下结论:碱法提取对粳米淀粉结构影响最大,其次是SDS结合超声波法,酶法提取影响最小;与酶法提取的支链淀粉相比,碱法和SDS结合超声波法提取的支链淀粉分子量有所下降,并且侧链中长B链含量下降,而中B链、短B链和A链的含量增加.     

转基因稻米DNA 提取方法的比较研究

目的：建立一种以水稻种子为原料,简便、快速、有效的基因组DNA 提取方法,作为转基因稻米的PCR 检测基础。方法：选择传统的CTAB 法、改良的碱处理法、高温水煮法,以转基因糙米、非转基因糙米、转基因精米为材料提取DNA,并对提取物进行检测。结果：改良的碱处理法提取的DNA 模板的完整性、纯度和PCR 反应方面与传统CTAB 法相近,且比CTAB 法的产率高、耗时短、成本低。结论：改良的碱处理法可以代替传统的CTAB 法用于转基因稻米检测中DNA 模板的制备。     

白砂糖DNA提取方法的比较

为了得到高效的白砂糖DNA提取方法,以5种白砂糖为研究对象,从前处理方法、裂解液成分及DNA纯化方法等方面对传统CTAB法进行改良,并比较了CTAB法和改良CTAB法的提取效果,结果表明:改良CTAB法提取的白砂糖DNA浓度都在2.60μg/m L以上,纯度在1.8左右,且通过实时荧光定量PCR能扩增出18Sr DNA基因的对应荧光信号。因此,改良CTAB法能够高效地提取白砂糖的DNA,可为后续的分子检测奠定基础。     

苹果汁中DNA提取方法的比较及RAPD扩增研究

目的获得一种提取苹果汁饮料中高质量DNA的高效方法.方法以不同加工工制备的澄清苹果汁和果肉型苹果汁为试材,采用简易法、试剂盒法和改良试剂盒法提取苹果汁DNA,分别对所提取DNA的浓度、纯度及DNA扩增效率进行了比较.结果3种方法提取的澄清苹果汁DNA经PCR扩增后的条带均比果肉型苹果汁的清晰,其中,改良试剂盒法提取的澄清苹果汁DNA OD260/OD280的比值均在1.8左右,纯度最好.可用于RAPD扩增.结论试剂盒法和改良试剂盒法均适用于苹果汁饮料DNA的提取.其中试剂盒法对果肉型果汁的扩增效率较好,该方法为采用分子生物技术对果汁进行真伪鉴别提供技术参考.