基于核酸等温扩增技术金黄色葡萄球菌检测的研究进展

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）作为一种食源性致病菌,是导致食品安全和公共卫生事件的主要病原体之一,开发快速准确的金黄色葡萄球菌检测技术是保障食品安全和提高食源性致病菌防控水平的关键措施。核酸等温扩增技术具有检测速度快、灵敏度高和设备简单等优点,在金黄色葡萄球菌检测方面具有很大的应用前景。基于此,该文简要介绍了核酸等温扩增技术的原理及优缺点,主要阐述了核酸等温扩增技术在金黄色葡萄球菌检测上的应用,并总结了目标产物检测技术,为金黄色葡萄球菌等温扩增快速检测技术的开发提供理论支持,为食品安全控制和食源性致病菌监控工作奠定基础。     

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测乳中携带sea基因金黄色葡萄球菌的研究

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的一种常见的致病菌,而其产生的肠毒素A是乳及乳制品食物中毒事件的主要原因。本研究建立了SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测。该方法能快速、稳定地在8h内完成对乳中金黄色葡萄球菌的检测,对人工污染乳中金黄色葡萄球菌检测的最低检出限为83CFU/ml。     

食源性金黄色葡萄球菌的危害及其快速检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是一种常见的食源性致病菌,可通过污染乳制品、肉制品等蛋白质或淀粉含量丰富的食品引起食物中毒,还易引发人体局部化脓性感染、肺炎、心包炎等疾病,严重时甚至会出现败血症。采用准确、高效的金黄色葡萄球菌检测方法,是预防食源性金黄色葡萄球菌及食品安全质量控制的关键。金黄色葡萄球菌检测方法主要有免疫血清学检测技术、聚合酶链式反应检测技术和生物传感器检测技术等。本文总结了各类检测方法的核心技术特征和应用实例,为食源性金黄色葡萄球菌的快速检测方法的研发和使用提供思路。     

实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌检测中的应用

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是主要的食源性致病菌之一.实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术是近年来广泛应用于食源性致病菌的快速检测方法,具有特异性强、灵敏度高等特点.本文综述了Real-time PCR 技术原理、分类及其在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用,并对其应用前景进行了展望.     

SYBR Green I荧光定量PCR检测乳中携带sea基因金黄色葡萄球菌的研究

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的一种常见的致病菌,而其产生的肠毒素A是乳及乳制品食物中毒事件的主要原因.本研究建立了SYBR Green I荧光定量PCR方法对乳中携带sea基因的金黄色葡萄球菌进行检测.该方法能快速、稳定地在8h内完成对乳中金黄色葡萄球菌的检测,对人工污染乳中金黄色葡萄球菌检测的最低检出限为83CFU/ml.     

二重PCR法快速检测3种食源性致病菌

目的建立快速检测食品中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌属(Salmonella spp.)及志贺氏菌属(Shigella spp.)的二重PCR方法。方法分别针对金黄色葡萄球菌.femA和nuc、沙门氏菌属invA和hilA及志贺氏菌属ipaB和ipaH设计6对特异性引物,检测每对引物的特异性及灵敏度,组合优化各自二重PCR反应体系。结果初步建立了针对这3类致病菌的二重PCR检测方法,整个检测过程不超过18 h,检测灵敏度均可达10 pg DNA/reaction。结论所建立的针对3类致病菌的二重PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强和方便高效等优点,具有良好的市场应用前景。     

快速检测金黄色葡萄球菌活菌的研究进展

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的常见食源性致病菌之一,如何快速准确检测食品中的金黄色葡萄球菌是预防其引起大规模疾病爆发的关键环节。传统的检测方法不易区分死活菌,易导致假阳性或假阴性结果的出现。重点综述了近些年建立的常用金黄色葡萄球菌活菌快速检测的方法,分析比较了各检测方法的优缺点,以期为金黄色葡萄球菌活菌检测技术的进一步开发利用提供方法参考。     

Mini VIDAS与国标法检测金黄色葡萄球菌的比较及其在食物中毒中的应用

笔者使用Mini VIDAS方法和GB4789.10-2010第一法检测金黄色葡萄球菌,并对二者进行比较。GB4789.10-2010第一法(国标法),只检验金黄色葡萄球菌,对可疑食物中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定,应检验其肠毒素。利用Mini VIDAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素与检测金黄色葡萄球菌致病菌相比较,从检测时间、检出率、中毒判断等方面来说明检测肠毒素的重要性。Mini VIDAS检测金黄色葡萄球菌肠毒素检测时间一般为25.5小时,最快只需要90分钟,而GB4789.10-2010第一法检测金黄色葡萄球菌平均检测时间为78小时,而且检出率较前者低。可见,Mini VIDAS能在较短时间内直接检出金黄色葡萄球菌肠毒素,并克服了食物中毒时致病菌已死,无法检出,造成判断失误的弊端。     

乳品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌快速检测的新体系

食源性致病菌污染是乳制品安全问题的重要隐患之一,乳品中常见的食源性致病菌有金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、阪崎肠杆菌等。目前,乳品中致病菌的检测以培养法为主,但此类方法操作较为繁琐,且耗时长,不能满足检测的时效需求。本文探索了荧光定量PCR技术在快速检测乳品中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的应用,并进行了大量的验证试验和实际检测,形成了乳品中致病菌快速检测的新体系。该体系可以在24h内完成金黄色葡萄菌和沙门氏菌的增菌与检测,缩短了整体检测时间,降低了检测成本,为进一步改良乳品中致病菌快速检测提供了参考数据。     

食品中金黄色葡萄球菌检测方法研究进展

金黄色葡萄球菌是引起食物中毒的重要致病菌之一,检测食品中金黄色葡萄球菌对于预防和控制金黄色葡萄球菌引起的食物中毒具有重要意义。论述和分析了传统培养方法、传统检测方法的改进、免疫学方法、以分子生物学为基础的快速检测方法以及商业化快速检测方法。     

3种食源性致病菌多重PCR检测体系的建立

目的:探究用PCR方法检测食品中金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、沙门氏菌(Salmonella spp.)及志贺氏菌(Shigella spp.)的检测灵敏度,建立快速检测3种食源性致病菌的多重PCR方法。方法:分别依据金黄色葡萄球菌的fem A、沙门氏菌的hil A基因及志贺氏菌的ipa H基因设计3对特异性引物,对3对引物进行多重PCR反应体系构建与优化。结果:建立的多重PCR方法具有灵敏度高、特异性强、方便快捷的优点。结论:研究结果为上述3种食源性致病菌快速检测试剂盒的研发及在食品安全检测工作中的应用提供了重要技术保障。     

致病菌在四川泡菜发酵过程中生长规律的研究

通过在四川泡菜中分别接种志贺氏菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等致病菌,经过乳酸菌发酵,对3种致病菌在发酵期间的菌落数及pH值进行检测分析.结果表明:随着发酵时间的延长,pH值逐渐下降,3种致病菌生长均受到抑制,在pH值为3.4～3.6时,志贺氏菌不能存活,在pH值为3.56～3.7时,沙门氏菌不能存活,在pH值为3.6时,金黄色葡萄球菌仍然存在.故将金黄色葡萄球菌作为目标致病菌,根据金黄色葡萄球菌生理特性,进而从生产上控制和灭杀金黄色葡萄球菌.     

核酸适配体在金黄色葡萄球菌检测中的应用进展

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种重要的食源性致病菌,快速检测方法的开发对于防控该菌引发的食源性疾病具有重要意义。生物识别物是快速检测的核心,核酸适配体作为新兴的生物识别物,与靶标分子有高度的亲和力及特异性,且易于人工合成和修饰,在食源性致病菌的检测方面具有较大的潜力和优势。本文综述了核酸适配体的筛选技术及其在金黄色葡萄球菌分离富集和快速检测中的应用进展,以期为食源性致病菌新型检测方法的开发和实际应用拓宽思路。     

金黄色葡萄球菌定性定量检测中显色培养基的效果评价

目的 评估显色培养基对金黄色葡萄球菌定性定量的检测效果。方法 对金黄色葡萄球菌标准菌株、食品样本分离菌株：30株金黄色葡萄球菌、30株其他葡萄球菌,5株常见食源性致病菌分别用金黄色葡萄球菌显色培养基和Baird-Parker培养基进行培养试验,并用国标法和全自动微生物鉴定药敏分析系统对培养结果进行确证鉴定。结果 试验定性结果显示金黄色葡萄球菌在显色培养基上呈紫红色,30株其他葡萄球菌呈蓝色或乳白色,5株常见食源性致病菌其中单核细胞增生李斯特氏菌呈蓝绿色、表皮葡萄球菌呈乳白色、其余3株不生长,可在直观上对几种食品中常见葡萄球菌进行有效区别,而且目标菌在显色培养基和Baird-Parker培养基上计数值无显著差异(P＞0.05),确证结果显示全自动微生物鉴定药敏分析系统结果与GB 4789.10-2016方法结果一致。结论 显色培养基能快速锁定疑似目标菌落,为溯源调查指明方向,定量计数直观有效,配合全自动微生物鉴定药敏分析系统更提高了对目标菌的鉴定效率,更适用于金黄色葡萄球菌定性定量检测。     

食品中金黄色葡萄球菌核酸层析检测技术的研究

核酸层析检测技术是将PCR与免疫层析技术相结合,用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测。该技术根据金黄色葡萄球菌n犹基因序列,设计特异性的引物,分别标记生物素和异硫氰酸荧光素（FITC）,用胶体金免疫层析技术进行检测。通过12株金黄色葡萄球茵及26株常见致病菌的检测结果说明其特异性强,检测灵敏度达到5×10^3du／mL,样品检测限达到0．5efu／g,与传统方法（GB／T4789．10—2010）结果相比较,无显著性差异x^2=0,P〉0．05）,可以应用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测与鉴定。     

金黄色葡萄球菌LAMP可视化快速检测方法的建立

建立金黄色葡萄球菌LAMP可视化检测方法。通过对2套引物的筛选,最终选取nuc基因的6条引物建立LAMP反应体系。整个反应在63℃恒温条件下进行45min,即可通过肉眼直接对反应结果进行判定。对金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为0.001ng/μL,且与其他致病菌无交叉反应。该方法快速、特异性高,操作简便,适合基层快速检测。     

核酸扩增信号放大技术在食源性金黄色葡萄球菌检测中的应用进展

基于核酸扩增的信号放大技术的蓬勃发展,引起了食源性致病菌检验检测技术的革新。如何构建可视化、低设备要求的快速检测方法并将其应用于已经成为食品安全领域关注的焦点。功能化纳米材料以其优异的物理、化学性质及较高的生物亲和性成为搭载生物识别分子的优异信号平台。本文归纳总结了近五年来基于信号放大技术、纳米生物传感器技术在食源性金黄色葡萄球菌检测中的应用现状及研究进展,对不同方法的原理、应用范围、优势等进行了综述,以期为食源性金黄色葡萄球菌检测方法的研发和应用提供新的思路。     

基于实时荧光环介导等温扩增技术同时检测副溶血弧菌与金黄色葡萄球菌

分别针对副溶血弧菌及金黄色葡萄球菌的特异性基因bla_CARB-17、nuc设计引物,通过优化反应条件,建立一种能够同时检测副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的实时荧光环介导等温扩增(real-time loop-mediated isother-mal amplification, RT-LAMP)的检测方法,对其特异性、灵敏度和适用性进行了研究。结果表明该方法特异性好、灵敏度高,对副溶血弧菌和金黄色葡萄球菌的检出限分别为3.62×10²、1.45×10⁴ copies/mL,灵敏度是普通PCR方法的10倍。实现了一次LAMP反应中同时检测2种食源性致病菌,既缩短检测时间,也提高了检测效率,为多重LAMP检测食源性致病菌的研究提供参考。     

淮安地区小龙虾及其外环境中致病菌分布规律和耐药性分析

目的了解淮安地区生鲜小龙虾及其外环境中致病菌的分布规律以及相关菌株的耐药性,为食源性疾病的防控提供依据。方法根据食品微生物检测国家标准,检测70份小龙虾样品(养殖环节30份、销售环节40份)和40份外环境水体样本(养殖环节15份、销售环节25份)中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希菌O157和副溶血性弧菌,并对沙门氏菌进行血清型鉴定,然后用纸片扩散法测定沙门氏菌和金黄色葡萄球菌的耐药性。结果小龙虾中致病菌的总检出率为41.43%,致病菌类型包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特菌。外坏境水体中致病菌的总检出率为22.50%,致病菌类型包括沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和副溶血性弧菌。沙门氏菌分离株主要对萘啶酸和氨苄西林具有较强的耐药性;金黄色葡萄球菌分离株则对红霉素、甲氧苄氨嘧啶/磺胺甲(?)唑和克林霉素具有较强的耐药性。结论淮安地区小龙虾及其外环境水体中存在致病菌污染,并且沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分离菌株的耐药情况严重。     

微滴式数字PCR技术定量检测发酵乳中金黄色葡萄球菌

基于微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)技术,建立发酵乳中金黄色葡萄球菌定量检测方法。以金黄色葡萄球菌nuc基因为目的片段设计特异性的引物和探针,优化反应体系,通过活菌提取和ddPCR方法对靶标基因的检测特异性和灵敏度进行实验,并对定量结果进行分析。本研究建立了发酵乳中ddPCR技术定量检测金黄色葡萄球菌的方法,检测特异性良好,检测灵敏度为3.3×10~1 CFU/g,定量的偏差率为+10.18%,证明了ddPCR用于绝对定量检测的可行性,为其他食品污染菌和致病菌标准化控制体系提供有益的示范作用。