miR-26a通过调节MTDH基因表达抑制CAOV3细胞系生长

目的检测miR-26a在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-26a调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法运用qRT-PCR检测52例卵巢癌及相应癌旁组织中miR-26a的表达改变;将miR-26a mimics转染卵巢癌细胞CAOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-26a对CAOV3细胞生长增殖的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-26a在52例卵巢癌组织中表达下调;Western blot结果显示,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-26a或干扰MTDH可抑制人CAOV3细胞的生长(P<0.05)。结论 miR-26a通过调节MTDH基因的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

miR-140靶向LRP4基因对甲状腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨miR-140对甲状腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响以及潜在的作用机制。方法:运用qRT-PCR检测甲状腺癌TPC-1细胞和正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-140和LRP4的表达水平;将miR-con组(转染miR-con)、miR-140组(转染miR-140 mimics)、si-con组(转染si-con)、si-LRP4组(转染pcDNA-LRP4)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-140组(转染anti-miR-140)、miR-con+WT-LRP4组(转染miR-con和WT-LRP4)、miR-con+MUT-LRP4组(转染miR-con和MUT-LRP4)、miR-140+WT-LRP4组(转染miR-140 mimics和WT-LRP4)、miR-140+MUT-LRP4组(转染miR-140 mimics和MUT-LRP4)、miR-140+pcDNA组(转染miR-140 mimics和pcDNA)、miR-140+pcDNA-LRP4组(转染miR-140 mimics和pcDNA-LRP4)均用脂质体法转染至TPC-1细胞;采用CCK-8法检测各组细胞增殖;Transwell检测各组细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果:甲状腺癌TPC-1细胞在正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1、miR-140的表达水平显著降低,LRP4 mRNA和蛋白质的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-140、抑制表达LRP4均可抑制TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭;miR-140可靶向负调控LRP4的表达。过表达LRP4可逆转miR-140过表达对甲状腺癌TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-140可抑制甲状腺癌TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向LRP4有关,将可为甲状腺癌的诊断、治疗提供新靶点。     

miR-195表达调控对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-195对大肠癌细胞HT-29增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:应用脂质体转染的方法,将miR-195 mimics转染入HT-29细胞,q RT-PCR检测转染后miR-195的表达,分别采用CCK-8法及流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,qRT-PCR和Western blot检测转染后VEGFA mRNA和蛋白表达变化。结果:与NC组比较,miR-195 mimics转染组明显上调HT-29细胞miR-195的表达,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,下调VEGFA mRNA及蛋白表达,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:上调HT-29细胞的miR-195表达,可明显抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,其机制可能与抑制其靶基因VEGFA表达相关。     

linc00152通过调控DNMT3A和DNMT3B促进人宫颈癌细胞生长与侵袭

探讨linc00152在宫颈癌中的生物学功能及其调控机制。运用qRT-PCR检测人宫颈癌细胞与正常宫颈上皮细胞中linc00152的表达;转染sh-linc00152、si-DNMT3A和si-DNMT3B于HeLa细胞以敲低细胞中linc00152、DNMT3A和DNMT3B的表达水平,采用qRT-PCR与Western blot法检测转染效率;采用Western blot法检测sh-linc00152对甲基化转移酶(DNMT)3A和3B蛋白表达水平的影响;采用MTT、Transwell侵袭实验检测sh-linc00152、si-DNMT3A以及si-DNMT3B对人宫颈癌HeLa细胞增殖与侵袭的影响。结果显示,linc00152在宫颈癌细胞中的表达水平明显高于正常宫颈上皮细胞(P<0.01);在HeLa细胞中,sh-linc00152组DNMT3A和DNMT3B蛋白表达水平明显低于sh-control组;sh-linc00152组、si-DNMT3A以及si-DNMT3B组HeLa细胞的存活率及穿过基质胶的HeLa细胞数量均明显低于各自对照组。linc00152可能通过调控DNMT3A和DNMT3B信号通路促进人宫颈癌细胞生长与侵袭。     

miR-222下调高糖下小鼠系膜细胞TIMP3表达

目的探讨miR-222是否通过靶向调控TIMP3表达参与糖尿病肾病的发生过程,从而进一步揭示糖尿病肾病的发病机制。方法运用qRT-PCR检测经25 mmol/L葡萄糖处理的小鼠系膜细胞(HG组)和对照小鼠系膜细胞(5 mmol/L葡萄糖,NG组)中miR-222和TIMP3的表达;将miR-222 mimics转染小鼠系膜细胞,以TIMP3 siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对TIMP3蛋白表达水平的影响。结果 qRT-PCR检测结果显示,miR-222在经高糖处理的小鼠系膜细胞中的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显上调,而TIMP3在经高糖处理的小鼠系膜细胞中mRNA的表达相对比正常浓度糖处理的小鼠系膜细胞中明显下调;Western blot结果显示,过表达miR-222或干扰TIMP3可抑制TIMP3蛋白的表达(P<0.05)。结论 miR-222可能通过调控TIMP3的表达参与糖尿病肾病的发生发展。     

AEG-1抑制miR-137对非小细胞肺癌增殖调控作用

目的探讨AEG-1在miR-137抑制非小细胞肺癌(NSCLC)增殖中的作用及机制。方法收集2013年2月~2014年5月在本院手术治疗的65例NSCLC患者肿瘤标本,提取RNA,qRT-PCR检测NSCLC组织、A549、H460及16HBE细胞中miR-137与AEG-1的表达,统计分析NSCLC组织中miR-137与胶质细胞上调基因1(AEG-1)表达的相关性;将A549细胞根据不同转染试剂分成4组:转染miR-137 mimics及空载体组,转染miR-137mimics及AEG-1表达载体组,转染miR-137 inhibitor及siRNA无关序列组,转染miR-137 inhibitor及AEG-1 siRNA组。用Lipofectamine 2000进行转染,生长曲线实验检测转染后细胞增殖情况。结果在NSCLC组织中miR-137与AEG-1的表达呈负相关;miR-137表达高的NSCLC细胞中AEG-1表达降低;共同转染miR-137 mimics与AEG-1过表达载体的A549细胞在48 h的细胞数高于对照组,而共同转染miR-137 inhibitor与AEG-1 siRNA的A549细胞在48 h、72 h的细胞数低于对照组。结论 miR-137与AEG-1在NSCLC组织及细胞中表达呈负相关;AEG-1逆转miR-137对NSCLC细胞增殖的作用。     

探索miR-145介导的黑青斑河鲀IFN-γ对MHC II的精细调控

哺乳类miR-145通过作用于MHC II的反式作用因子CIITA对MHC II的表达进行调控。为探讨在黑青斑河鲀中miR-145是否对CIITA基因存在直接调控作用,进而间接调控MHC II的表达,将黑青斑河鲀CIITA的3′非编码区(3′UTR)序列亚克隆至pMIR-Report载体中,通过双荧光素酶报告系统研究两者是否存在直接的靶标作用。结果表明:将miR-145类似物和构建的CIITA3′UTR载体共转染至Hela细胞后,荧光素酶活性没有出现预期的下调,反而出现上调;增大或减少miR-145的转染量,荧光素酶活性的变化幅度也会随之改变。将miR-145类似物和构建的CIITA3′UTR载体共转染至COS-7细胞,荧光素酶的活性没有改变。离体转染miR-145到河鲀原代脾细胞中,检测MHC II基因的表达水平也没有变化,表明miR-145确实对河鲀CIITA没有靶标作用。     

调节猪TNF-α表达的miRNAs鉴定

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是脂肪细胞的分泌产物之一,在脂肪中行使着复杂的调节功能,为了研究猪脂肪组织中TNF-α的表达受到哪些miRNA的调控,从猪脂肪组织基因组中获得猪TNF-α3'端非翻译区(UTR)序列,与荧光素酶质粒PGL3-control连接构建猪TNF-α的萤光素酶表达质粒PGL3-TNF-α3'UTR。生物信息学预测miR-19a,miR-124,miR-130a,miR-301,miR-506等miRNAs均靶向猪TNF-α,将这些miRNA分别与PGL3-TNF-α3'UTR质粒共转到细胞中,以乱序序列作为阴性对照(NC),检测miRNA对质粒荧光素酶活性的作用。结果发现miR-19a,miR-124和miR-130a均能够显著抑制萤光素酶的活性(P<0.01),为了验证这3个miRNA是否通过各自种子序列起调控作用,突变了PGL3-TNF-α3'UTR中这3个miRNA种子序列的结合位点,结果发现miRNAs对突变质粒中的荧光素酶均无明显抑制作用(P>0.05)。结果证明,miR-19a,miR-124和miR-130a与猪TNF-α均有直接的靶向关系并通过各自种子序列抑制TNF-α的表达。     

miR-381-3p靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路调控食管癌细胞的增殖和凋亡

目的 探讨miR-381-3p靶向特异性蛋白1（specificity protein 1，SP1）抑制mTOR/p70s6k信号通路对食管癌细胞的增殖和凋亡调控作用。方法 RT-qPCR检测正常食管细胞和食管癌细胞中miR-381-3p与SP1 mRNA的表达，利用Lipofectamine 2000将miR-381-3p mimic 质粒、miR-control质粒、SP1质粒分别或联合转染进入EC9706细胞，基因预测软件预测miR-381-3p的靶基因，双荧光素酶报告检测靶向关系，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡，蛋白质印迹分析检测Ki67、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、B淋巴细胞瘤2（B-celllymphoma，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X Protein， Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cysteine aspartic acid protease 3，Caspase-3）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）、p-mTOR、p70s6激酶(The p70s6 kinase，p70s6k)、p-p70s6k和SP1蛋白表达水平。结果 miR-381-3p在食管癌细胞EC9706中低表达（P < 0.01），而SP1高表达（P < 0.01）；miR-381-3p与SP1 3’UTR区存在结合位点，且miR-381-3p直接靶向抑制SP1表达；过表达miR-381-3p后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01）、Ki67和PCNA蛋白表达明显下调（P < 0.01），细胞凋亡率明显降升高（P < 0.01）、Bax/Bcl-2和Cleaved caspase-3蛋白表达明显上调（P < 0.01），mTOR和p70s6k磷酸化明显减少（P < 0.01）；而高表达SP1可以逆转miR-381-3p对食管癌细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。抑制mTOR/p70s6k信号通路后，食管癌细胞增殖明显降低（P < 0.01），细胞凋亡率明显增加（P < 0.01），增殖标记蛋白Ki67表达明显下调（P < 0.01），凋亡标记蛋白Cleaved caspase-3表达明显上调（P < 0.01），而SP1蛋白表达无明显变化。结论 miR-381-3p可能通过靶向SP1抑制mTOR/p70s6k信号通路来抑制食管癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡。     

MiR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶耐药性的影响

目的探讨miR-195对BEL-7402/5-FU细胞5-氟尿嘧啶药物敏感性的影响。方法采用qRTPCR检测BEL-7402细胞与BEL-7402/5-FU细胞中miR-195的表达水平。将miR-195质粒载体瞬时转染至BEL-7402/5-FU细胞;MTT检测细胞药物敏感性的改变。结果相比于BEL-7402细胞,miR-195在BEL-7402/5-FU细胞中表达水平下调;miR-195转染组的细胞增殖抑制率较miRNA阴性对照组及未转染组明显增高。结论MiR-195能够增加BEL-7402/5-FU细胞对5-氟尿嘧啶的药物敏感性,抑制细胞增殖。