DMN诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布

目的:探讨二甲基亚硝胺(DMN)诱发大鼠肝纤维化库普弗细胞与肝星状细胞的分布及其意义。方法:选取40只Wistar雄性大鼠连续4周腹腔注射10 g/L DMN制备肝纤维化模型。采用随机数字表法分为模型组(n=20)与正常组(n=20),两组均应用DMN进行肝纤维化造模。采用Reiman法测定大鼠第4周和第7周ALT、AST水平,免疫组化法测定两组大鼠库普弗细胞与肝星状细胞标志物ED1与α-SMA分布情况,收集并分析两组肝/体质量比、肝组织病理变化、胶原纤维面密度。结果:模型组第4周和第7周ALT、AST、面密度水平均高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组第4周和第7周总蛋白(TP)、肝/体质量比水平均低于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组第4周与第7周肝/体质量组内比较,差异均无统计学意义(P=0.11);模型组第4周和第7周光镜下可见ED1、α-SMA阳性细胞数量较多,主要分布于增生的纤维组织及纤维间隔弥漫部位。结论:DMN可导致大鼠肝功能障碍及弥漫肝硬化。大鼠肝纤维化模型的库普弗细胞可激活、活化肝星状细胞。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制作用及对PPARγ、C-ski 表达的影响

目的:研究荔枝核总黄酮(total flavone from litchi,TFL)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的抑制作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome prolif-erator-activated receptor-γ,PPAR-γ)、C-ski表达的影响,探究荔枝核总黄酮抗肝纤维化的可能作用机制。方法:体外培养HSC,分为空白对照组、荔枝核总黄酮浓度20 mg·L~(-1)组、40 mg·L~(-1)组、80 mg·L~(-1)组、160 mg·L~(-1)组、200 mg·L~(-1)组,分别干预48 h后,通过CCK-8法检测每组细胞的增殖情况。再设置为空白组、PPARγ天然配体前列腺素J2(15-d-PGJ2)对照组(5μmol·L~(-1))、15-d-PGJ(2 5μmol·L~(-1))+TFL(100μmol·L~(-1))对照组、TFL组(100μmol·L~(-1)),ELISA法检测每组细胞中Smad3/4的含量;qPCR法检测每组细胞中PPAR-γ、C-ski mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,在作用时间相同的情况下,随着TFL作用剂量的增加,药物对细胞增殖的抑制率增高(P<0.05);ELISA结果显示,TFL实验组中的Smad3/4含量明显降低(P<0.05);qPCR结果显示,TFL实验组中PPARγ、C-ski mRNA的表达量均明显增加(P<0.05)。结论:荔枝核总黄酮能够抑制HSC-T6细胞增殖,降低细胞外基质分泌,该机制可能与抑制HSC-T6细胞中的Smad3/4含量,上调PPAR-γ及C-ski mRNA表达相关。     

二甲双胍对肝星状细胞凋亡的调控作用

目的探究二甲双胍对肝星状细胞(HSC)的作用及其可能的抗肝纤维化的作用机制。方法 将人HSC LX-2分为对照组(PBS)、模型组(PDGF-BB)和药物组(PDGF-BB+Met)。将30只SPF级C57BL/6J小鼠随机分为3组,对照组(n=10,橄榄油)、模型组(n=10,CCl4)和药物组(n=10,CCl4+Met)。用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活力,AnnexinV-PE/7-AAD染色法检测细胞凋亡率;Western blot检测α-SMA、Beclin1、PARP、Bax及bcl-2蛋白表达;取小鼠肝脏石蜡包埋,石蜡切片进行Masson染色检测小鼠组织病理学情况。结果 二甲双胍能抑制活化的HSC的增殖(IC50=42.66),细胞流式检测发现,二甲双胍能促进HSC凋亡(C=5 mM,P﹤0.001);与模型组相比,药物组α-SMA表达量减少(P﹤0.001);且药物组PARP、Bax表达量升高(P=0.03,P﹤0.001),Bcl-2表达量明显降低(P﹤0.001);Masson染色发现药物组胶原纤维分泌少于模型组(P=0.03)。结论 二甲双胍促进肝星状细胞的凋亡,从而改善CCl4诱导的肝纤维化。     

三七总皂苷对酒精性肝硬变大鼠肝星状细胞蛋白组学的影响

目的:探讨三七总皂对实验性酒精性肝硬变大鼠肝纤维化治疗作用的分子机制。方法:选取健康成年雄性Wistar大鼠36只,使用体积分数50%酒精16 m L·(kg·d)~(-1)灌胃造模,9周后随机分成模型组、安珐特组、三七总皂苷组,每组12只。安珐特组给予西药安珐特21.6 mg·(kg·d)~(-1)进行灌胃,三七总皂苷组给予三七总皂苷100 mg·(kg·d)~(-1)进行灌胃,模型组继续使用体积分数50%酒精灌胃。同时设置空白组。12周后处死大鼠,剪下肝右叶,提取肝星状细胞总蛋白,测定各组蛋白含量,继而进行等电聚焦双向电泳,比较组间的差异蛋白点。结果:通过组间两两比较发现,组间的蛋白表达均存在着差异,正常组与模型组比较,共有23个差异点;正常组与安珐特组比较,共有33个差异点;正常组与三七总皂苷组比较,共有30个差异点;模型组与安珐特组比较,共有30个差异点;模型组与三七总皂苷组比较,共有31个差异点;安珐特组与三七总皂苷组比较共有30个差异点。结论:三七总皂苷对实验性酒精性肝硬变大鼠具有保护作用,其机制可能与三七总皂苷引起肝星状细胞蛋白质表达差异有关。     

疏肝健脾活血方对肝星状细胞增殖的影响

目的:采用细胞培养的方法,体外观察疏肝健脾活血方药物血清对转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)诱导的大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC-T6)增殖作用的影响。方法:将40只大鼠随机分成正常大鼠血清组,疏肝健脾活血方低剂量组,疏肝健脾活血方中剂量组,疏肝健脾活血方高剂量组。以疏肝健脾活血方给大鼠灌胃,腹主动脉采血并制备血清。采用TGFβ1诱导HSC-T6作为活化的肝星状细胞的研究模型,以不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清作用于体外培养的HSC-T6,分别作用24 h、48 h后,采用CCK-8法检测不同浓度的疏肝健脾活血方药物血清对HSC-T6增殖的影响。结果:疏肝健脾活血方药物血清作用于TGFβ1诱导的HSC-T6,细胞增殖受到明显抑制。各组作用48 h后,空白对照组OD值为(0.617±0.061),疏肝健脾活血方低剂量组、中剂量组、高剂量组OD值分别为(0.446±0.091)、0.417±0.103)、(0.376±0.065),疏肝健脾活血方各剂量组与空白组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。正常大鼠含药血清组OD值为(0.506±0.015),与空白对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:疏肝健脾活血方药物血清对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞活化作用增殖有抑制作用。     

甘参复方对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的:观察甘参复方对大鼠肝星状细胞增殖和胶原合成的影响,并分析甘参复方抗肝纤维化的分子机制。方法:采用体外培养的永生化细胞株大鼠肝星状细胞(hepatic sellate cell-T6,HSC-T6)。将甘参复方稀释成6个不同的浓度梯度,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况,筛选出甘参复方对HSC-T6的有效作用浓度。之后将细胞分为阴性对照组,甘参复方低浓度组、中浓度组、高浓度组。采用ELISA法检测各组细胞上清液中的Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,ColⅠ)水平。然后,应用转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)(1 mg·L~(-1))刺激HSC-T6,观察甘参复方对刺激后细胞的增殖和胶原合成的影响。结果:甘参复方的6个不同浓度对HSC-T6的增殖有明显抑制作用,且浓度为0.5μmol·L~(-1)时抑制作用最明显(P<0.01)。ELISA结果显示,甘参复方能够降低细胞上清中的ColⅠ含量,且与CCK-8结果相吻合,在0.5μmol·L~(-1)时ColⅠ分泌最少。甘参复方能够抑制TGF-β1刺激后的HSC-T6增殖和胶原合成。结论:甘参复方能够显著抑制星状细胞的增殖以及ColⅠ的表达,这是甘参复方抗肝纤维化的作用机制之一。     

郁金含药血清对HSC-T6细胞增殖抑制作用的影响

目的:观察郁金含药血清对肝星状细胞-T6(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)细胞增殖抑制的研究。方法:25只SD大鼠随机分5组:郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组(16.2 g·kg-1、8.1 g·kg-1、4.0 g·kg-1),秋水仙碱组(5g·kg-1)以及空白组(给予等体积生理盐水),连续灌胃给药4 d后,于第4天一次性给药1 h后,乙醚麻醉腹主动脉取血制备含药血清;将HSC-T6细胞分为6组,郁金含药血清高剂量组、中剂量组、低剂量组,空白组、秋水仙碱组、阴性对照组(加入等体积的PBS代替大鼠血清),分别取用体积分数5%、10%、20%的含药血清,同时作用于各组HSC-T6细胞24 h、48 h、72 h后,采用四氮噻唑蓝法在酶标仪(490 nm波长)上检测各组OD值,分别计算其增殖率和抑制率。结果:与阴性对照组比较,除作用24 h、体积分数5%组外,大鼠血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖速度,其增殖率与大鼠血清含量呈正相关。与空白组比较,除作用24 h、体积分数5%含药血清各剂量组、低剂量20%组以及秋水仙碱20%组没有明显抑制作用外,其余各郁金剂量组均有增殖抑制作用,其中体积分数10%组的抑制效果明显高于体积分数20%组(P<0.05)。作用48 h后,各干预含药血清的3个浓度组均有明显抑制作用,其中郁金体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P<0.05);作用72 h后,除秋水仙碱组外,各郁金剂量组均有明显抑制作用,其中含药血清体积分数10%组的抑制效果明显高于其他体积分数组(P<0.01)。结论:大鼠郁金含药血清可以明显加速HSC-T6细胞的增殖;郁金含药血清在体外可以有效抑制HSC-T6细胞的增殖,但抑制率与含药血清体积分数、作用时间呈非线性关系,抑制率最为显著的是含药血清体积分数10%,作用时间48 h。     

一种具杀菌功能的haFGF融合基因在毕氏酵母中的表达

目的构建一种双功能活性多肽,实现其在酵母中的表达。方法通过体外DNA重组技术将cecropin AD连接在haFGF的5′端,构建成融合基因CADAF,将其克隆到分泌表达载体pPICZαA上,然后转化到毕氏酵母受体菌X-33中进行甲醇诱导表达。结果经SDS PAGE和Western blot分析,构建的CADAF基因在酵母中获得了表达,经抑菌实验及MTT实验结果表明,融合蛋白具有一定的抗菌功能和促细胞分裂活性。结论成功实现了haFGF与抗菌肽的在酵母中的融合表达,为多功能细胞生长因子在创伤治疗中的应用打下了基础。     

肿瘤抑制基因 PTEN对人气道平滑肌细胞迁移和增殖的影响

目的：观察肿瘤抑制基因 PTEN 对人气道平滑肌细胞（HASMCs）迁移和增殖的影响机制。方法用重组PTEN 腺病毒转染体外培养的 HASMCs（Ad-PTEN 组）,并与携带绿色荧光蛋白（GFP）的腺病毒空载体（Ad-GFP组）和空白对照（MOCK）组对比,采用 MTS 测定细胞增殖、Transwell 法观察细胞迁移、共聚焦显微镜观测细胞骨架的变化、免疫印迹法检测 PTEN、p-Akt、Akt、p-FAK、FAK 蛋白的表达。结果Ad-PTEN 组的吸光度（A）值和每单位面积迁移的细胞数显著低于 Ad-GFP 及 MOCK 组（均 P ＜0．05）,Ad-GFP 和 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,提示过表达 PTEN 基因能抑制 HASMCs 的增殖和迁移的作用。Ad-PTEN 组细胞轮廓变细,伪足及应力纤维明显变少,而 Ad-GFP、MOCK 组细胞有少量短而细的应力纤维,很少丝状伪足形成。与 Ad-GFP 及 MOCK 组比较,Ad-PTEN 组 p-Akt 表达水平和 FAK 蛋白的磷酸化水平显著下调（均 P ＜0．05）,Ad-GFP及 MOCK 两对照组间差异无统计学意义（P ＞0．05）,说明过表达 PTEN 能下调 Akt 蛋白和 FAK 蛋白的磷酸化水平。结论过表达 PTEN 可能通过下调 p-Akt 及 p-FAK 的表达,抑制 HASMCs 的增殖和迁移,参与哮喘气道重塑的调控。     

丹参对大鼠肝组织Bcl-2表达的影响及意义

目的探讨丹参对大鼠肝组织Bcl-2基因表达的影响和对肝纤维化的作用及其机制。方法利用CCl4诱导形成大鼠肝纤维化模型。将30只SD大鼠按随机数字表法分成纤维化模型组（A组,n=15）和丹参干预组（B组,n=15）。用RT-PCR法检测各组大鼠肝脏Bcl-2的表达,常规HE和网状纤维染色检测肝组织标本。结果大鼠肝纤维化模型成功建立。丹参干预组纤维化程度、肝细胞脂肪变性及肝组织炎症较纤维化模型组显著减轻。丹参干预组和纤维化模型组Bcl-2基因表达量分别为（0.84±0.02）%（、1.03±0.03）%。丹参干预组Bcl-2基因的表达显著低于纤维化模型组（P〈0.01）。结论丹参能够阻断CCl4诱导的肝纤维化和减少肝脂肪变性。其机制不仅直接通过抗炎作用,也可能通过调节Bcl-2基因表达从而阻断肝纤维化。     

大数据时代下计算机网络信息安全现状及对策研究

随着时代的发展以及现代化进程的不断推进,在当前大数据的时代发展背景下,计算机网络的信息安全成为当前时代发展的首要问题。文章在此基础上分析了计算机网络在大数据背景下的发展弊端,并提出了解决方案。     

葛根素抑制人子宫颈癌细胞株HeLa增殖和诱导凋亡作用研究

目的:探讨葛根素对人子宫颈癌细胞株HeLa的作用及其机制。方法:取对数生长期的HeLa细胞分别用不同剂量的葛根素处理(0μmol,12.5μmol,25μmol,50μmol)。细胞培养48 h后,利用MTT法检测HeLa细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡水平,RT-PCR法检测Bax mRNA和Bcl-2 mRNA水平。Western blotting法检测Wnt、β-catenin、Bax、Bcl-2、p53和p21表达水平。结果:葛根素成剂量依赖性地抑制HeLa细胞增殖,促进细胞凋亡,促进BaxmRNA表达,减少Wnt、β-catenin、Bcl-2 mRNA、p53和p21表达。结论:葛根素可抑制宫颈癌HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制与减少Wnt/β-catenin信号通路活化相关。     

黄芩素对喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用

目的:探讨黄芩素对人喉癌Hep-2细胞的增殖抑制作用。方法:Hep-2细胞在含黄芩素(10~80μmol/L)的培养基中,分别培养24 h及48 h,用MTT法检测对细胞增殖的影响;用台盼兰染色法检测对细胞活力的影响;用吖啶橙染色法(AO染色法)检测对细胞形态的影响。结果:黄芩素呈时间-剂量依赖性的抑制Hep-2细胞的增殖,并可使细胞活力明显降低;AO染色法显示,黄芩素可诱导Hep-2细胞形态发生明显变化,呈凋亡形态。结论:黄芩素可抑制喉癌Hep-2细胞增殖,降低细胞活力,诱导喉癌Hep-2细胞呈典型的凋亡形态。     

蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛇床子素对人黑色素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响。方法:人黑色素瘤细胞株A375细胞体外培养,将对数生长期的A375细胞以不同浓度的蛇床子素处理,MTT法检测A375细胞增殖;流式细胞术检测A375细胞凋亡;RTPCR法检测A375细胞Bcl-2 mRNA和Bax mRNA表达水平;Western blotting检测A375细胞IκB-α、p-NF-κB、NF-κB、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:蛇床子素可降低A375细胞增殖率以及Bcl-2 mRNA、p-NF-κB和Bcl-2蛋白表达水平,呈浓度依赖性;同时增加A375细胞凋亡率以及Bax mRNA、IκB-α、Bax蛋白表达水平,呈浓度依赖性,但对NF-κB表达无明显影响。结论:蛇床子素能诱导A375细胞增殖抑制和凋亡,呈浓度依赖性,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

太阳能与燃气热水器联合供热水系统在村镇中的应用

对上海地区村镇建筑目前采用的生活热水供应形式进行分析,采用调研与实际应用结合的方法进行研究。洗浴主要方式中太阳能热水器占了55.6%,燃气热水器和电热水器都约为30%,但很少采用复合式功能系统。结合用能形式与资源条件提出太阳能与燃气热水器联合供生活热水系统,对系统设计与控制方面提出了相应的措施,并对其技术和经济性进行分析。太阳能热水器和燃气热水器联合使用与单独采用燃气热水器相比节能率约为60%,节约运行费用约62%。     

酸性氧化电位水对人角质形成细胞生长增殖的影响

目的 探讨酸性氧化电位水（electrolyzed oxidizing water,EOW）对角质形成细胞生长、增殖的影响.方法 分别以0%、10%、20%、40%、60%和80%的EOW作用于角质形成细胞,用MTT比色法测定其1、2、3、4、5、6 d 时的吸光度值.结果 表皮细胞在24 h内开始贴壁,细胞逐渐由圆形伸展成椭圆形,体积变大,3 d时开始形成小集落,7~10 d细胞汇合连接成片.不同体积分数的EOW组在相同时间点与空白对照组吸光度值比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 EOW对体外培养的角质形成细胞生长、增殖无明显抑制作用.     

miR-30a抑制BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2的成骨分化

目的:确认miR-30a在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9处理间充质干细胞C3H10T1/2,通过碱性磷酸酶(ALP)检测试剂盒检测早期成骨指标ALP、Western blot和PCR检测晚期成骨指标OPN,茜素红S染色检测钙盐沉积了解BMP9对C3H10T1/2细胞的成骨分化作用,同时用Real-time PCR检测miR-30a在该成骨分化中的变化。然后用BMP9条件培养基分别作用Ad-mmu-miR-30a和Ad-RFP预处理10h的C3H10T1/2细胞,检测早期成骨指标ALP、晚期成骨指标钙盐沉积和骨钙素OPN的表达。最后探讨miR-30a在BMP9诱导C3H10T1/2细胞成骨分化中的可能作用机制。结果:Ad-BMP9处理C3H10T1/2细胞5d,7d后,ALP的活性的表达增高;第9d后,OPN的表达增加;第14d后,钙盐的沉积明显增多。而miR-30a过表达后,抑制了这一现象。同时发现过表达miR-30a后,Runx2蛋白水平较对照组下降而mRNA水平基本没有变化。结论:miR-30a可以抑制BMP9诱导C3H10T1/2细胞的成骨分化,其作用机理可能和Runx2相关。