乳酸菌粘附肠道上皮细胞的研究进展

近些年来,乳酸菌因对人体健康功能的促进作用而成为研究热点。目前普遍将乳酸菌的粘附能力作为评价乳酸菌益生性的首要指标。乳酸菌对肠道上皮细胞或细胞外基质组分的粘附会引起机体产生有益的生物学效应。本文从乳酸菌的黏附素和宿主受体的相互作用阐述乳酸菌的粘附机制以及影响其粘附能力的内、外因。归纳目前国内外有关评价乳酸菌粘附特性的方法,以期为乳酸菌粘附特性的研究和应用奠定理论基础。     

传统发酵牦牛酸乳中益生性乳酸菌的体外筛选

为获得具有潜在益生特性的乳酸菌,实验以抗人工胃液、胆盐中生长效率和细胞表面疏水性为筛选指标,对羊八井地区传统发酵牦牛酸乳中分离出的38株乳酸菌进行体外筛选。最终通过测定结果综合比较得出菌株编号为YBJ-3、YBJ-11、YBJ-15、YBJ-17、YBJ-30和YBJ-33乳酸菌的益生特性较好,其中4株乳酸菌抗人工胃液能力大于90%,在胆盐中良好生长。通过16S r DNA序列分析鉴定,菌株编号YBJ-3为屎肠球菌(Enterococcus faecium)、YBJ-11为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、YBJ-15为耐久肠球菌(Enterococcus durans)、YBJ-17为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、YBJ-30为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、YBJ-33为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)。     

内蒙古奶豆腐中潜在益生性乳酸菌的筛选

对从内蒙古奶豆腐中分离的16 株乳酸菌进行16S rDNA分子鉴定,其中9 株鉴定为乳酸片球菌、5 株为屎肠球菌、1 株为植物乳杆菌、1 株为鼠李糖乳杆菌。进一步对分离得到的菌株进行模拟人工胃液和胆盐耐受性、疏水性、体外降胆固醇和抗氧化特性研究。结果表明：植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对模拟人工胃液有较高的耐受性;屎肠球菌M7-1、M8-1和M8-2具有较高的胆盐耐受性;植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1对甲苯和十六烷的疏水性显著高于其他菌株。体外功能性实验结果表明,屎肠球菌M1-1、植物乳杆菌M1-2、乳酸片球菌M1-3和M2-1的体外降胆固醇能力较高,胆固醇降解率均超过30%;鼠李糖乳杆菌M6-1对过氧化氢的耐受性、羟自由基（•OH）和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除能力最高。综上所述,植物乳杆菌M1-2和鼠李糖乳杆菌M6-1具有较好的益生特性,可作为今后开发功能性产品的潜在益生菌株。     

具有抗氧化和抑菌能力的益生性乳酸菌筛选及鉴定

为筛选出具有抗氧化和抑菌能力的益生性乳酸菌菌株,对本实验室保存的18株乳酸菌进行耐酸耐胆盐、疏水性、自由基清除能力和抑菌能力分析,利用16S rDNA和管家基因pheS和rpoA序列同源性分析对筛选菌株进行鉴定。结果表明,菌株A1、A7、A13、A14、A15在pH 3.0时的存活率均大于70%,在牛胆盐质量分数为03%时的存活率均大于40%。菌株A15的产酸能力最强,24 h时的pH值为3.68。菌株A1、A7、A14、A15均具有高疏水性。菌株A15完整细胞悬液的羟自由基清除能力(39%)和DPPH自由基清除能力(51%)最强,菌株A14次之。此外,菌株A15对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的生长均有抑制作用。16S rDNA和管家基因pheS和rpoA序列同源性分析结果表明:A1为乳肠球菌、A7为副干酪乳杆菌、A14为副植物乳杆菌、A15为植物乳杆菌植物亚种,为开发新型营养健康乳酸菌发酵食品奠定基础。     

产β-半乳糖苷酶乳酸菌的筛选及其益生性研究

分析比较了实验室保存的13株乳酸菌β-半乳糖苷酶的活性,并对β-半乳糖苷酶活性较高的菌株进行耐受性、疏水性及凝乳效果的测定。结果表明,德氏乳杆菌保加利亚亚种ML12-2-2和嗜热链球菌KC4的β-半乳糖苷酶活性较高,对酸和胆盐耐受性较好,对碳氢化合物也表现出很好的疏水性,同时对脱脂乳具有较好的凝乳性能。这两株菌种具有作为益生菌用于乳品发酵的潜力。     

黏豆包发酵液中乳酸菌分离鉴定及其益生性能

从农家自然发酵黏豆包谷物发酵液中分离乳酸菌,对菌株进行鉴定,并对益生性能进行研究。利用梯度稀释法从黏豆包中筛选获得6 株乳酸菌,经形态学分析并结合16S rRNA 序列分析分别为棒状乳杆菌（Lactobacillus coryniformis）、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、短杆菌（Levilactobacillus brevis）、发酵乳杆菌（Lactobacillus fermentans）、清酒乳杆菌（Latilactobacillus sakei）和曲氏乳杆菌（Lactobacillus curvatus）。对菌株的益生性能评价结果表明：菌株HSDF3（曲氏乳杆菌）的抗逆性和耐酸性能较好,pH3.0 的环境中存活率为100%;耐盐测试中,菌株HSDF9（清酒乳杆菌）的耐盐效果最好,在盐含量10%的MRS 肉汤中仍可存活,活菌数可达8.93×106 CFU/mL;耐胆盐测试中,菌株HSDF12（棒状乳杆菌）存活率最高,在0.3%胆盐浓度的MRS 肉汤培养基中培养3 h 之后的存活率为7.171%;耐人工胃液测试中,经过3 h 的模拟胃液培养之后,菌株HSDF3（曲氏乳杆菌）的存活率最高,达到82.91%;耐人工肠液测试中,经过6 h 的模拟肠液培养之后,HSDF12（棒状乳杆菌）存活率最高,达到93.42%;抗生素敏感性试验中,菌株HSDF15（短杆菌）对四环素、羧苄西林、头孢氨苄、米诺环素、头孢唑啉、氨苄西林、头孢拉定等抗生素均敏感。     

酵素源乳酸菌的益生功能及抑菌特性评价

为筛选到发酵性能稳定且高效的功能性菌株,以韶关紫背桃源生产的酵素中分离出的12株乳酸菌为试验菌株,测定其益生特性。分别对12株乳酸菌进行了自聚集性、耐酸性,以及对胆盐、胃蛋白酶、胰蛋白酶与抗生素的耐受性和对肠道致病菌的拮抗作用实验,结果表明：12株受试乳酸菌均表现出良好的自聚集性;除XZJ07外,其他11株菌株在pH值为2.5的模拟胃液中培养3 h存活率仍达75%以上;在人工模拟胃液以及肠液中对胃蛋白酶和胰蛋白酶孵育2、3 h存活率仍超过75%;在含有胆盐浓度为3 g/L MRS培养基中培养3 h后,活菌数仍达106 CFU/mL,另外,受试菌株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌均有一定的抑制作用,对大肠杆菌抑菌圈直径均大于15 mm,对金黄色葡萄球菌抑菌圈直径均大于17 mm;受试菌株对氨苄青霉素敏感,对四环素、红霉素、土霉素较为耐受。研究结果预示着受试菌株具有作为优质益生性发酵剂的潜在能力。     

乳酸菌合成共轭亚油酸及其应用研究进展

共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是一种具有多种生理活性的功能性脂肪酸,在食品、保健品中具有广阔的应用前景。然而,天然来源的CLA含量很低,不能满足人类需求。乳酸菌可以合成CLA,且广泛用于食品加工领域,利用乳酸菌开发富含CLA的功能食品是当今的研究热点。为推动CLA功能食品的研究开发,该文对合成共轭亚油酸乳酸菌的研究进展、合成共轭亚油酸乳酸菌的益生性研究以及将产CLA乳酸菌应用到食品和饲料中的研究现状进行综述,并对利用乳酸菌合成CLA进而应用于功能食品进行展望。     

一株强抑菌活性植物乳杆菌的分离及益生性能研究

以健康黔北黑猪肠道黏膜内容物为原料,采用厌氧罐培养法分离出肠道细菌,结合抑菌试验筛选出其中具有强抑菌活性菌种进行分子生物学鉴定,并对其耐受性及抑菌物质的稳定性进行研究。结果表明,该菌株被鉴定为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,对金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠埃希氏菌ATCC25922和鼠伤寒沙门氏菌ATCC14028等指示菌具有强抑制作用,其发酵上清液对3种指示菌的最大抑菌圈直径分别约为44.7 mm、23.1 mm和31.8 mm;菌株发酵上清液抑菌物质耐高温,120 ℃处理30 min抑菌活性无显著变化（P＞0.05）;胰蛋白酶处理后,上清液的抑菌圈直径显著减小（P＜0.05）,而过氧化氢酶和胃蛋白酶处理后抑菌圈直径无显著变化（P＞0.05）,表明主要抑菌物质为有机酸和活性肽;菌株经pH 2、0.3%猪胆盐或人工胃肠液处理6 h后存活率分别为0.06%、0.61%、40.80%和25.65%,显示出良好的益生性能。     

乳酸菌S-层蛋白及其黏附性相关研究技术

乳酸菌为人体的重要生理性细菌,在维持人体肠道生态环境、提高机体免疫力等方面起到重要的作用。然而,乳酸菌发挥这些生理功能的重要前提是黏附到肠细胞的表面。随着研究的深入,越来越多的研究表明乳酸菌S-层蛋白对宿主细胞具有黏附性,如罗伊氏乳酸菌S-层蛋白可与黏蛋白及人结肠癌细胞HT-29进行黏附。在研究乳酸菌S-层蛋白对宿主细胞的黏附时,人们采用了不同的方法。一些常用的基本方法有SDS-PAGE、层析纯化技术、显微镜观察技术等。随着新技术的应用,表面等离子共振技术、免疫学技术等也用于研究S-层蛋白的黏附性。本文将着重介绍S-层蛋白及S-层蛋白黏附性研究的相关技术。     

Lactobacillus菌株的益生功能评价

本研究评价了分离自传统发酵乳制品中4株L．paracasei supsp．paracasei菌株在模拟胃、肠液中的存活性,在HT-29细胞上的粘附性,对致病菌的抑制能力,以及刺激外周血单核细胞（PBMCs）增殖的能力。其中菌株Lactobacillus paracasei supsp．paracasei M5AL、J23AL在模拟胃液存活率较高,而菌株Lactobacillus paracasei supsp．paracaseiGl5AL、T3AL在胃液中暴露3h即失去活性;4株菌在模拟肠液中存活率较高。菌株L．paracasei supsp．paracasei M5AL和G15AL在HT．29细胞上有较强粘附能力f〉40bacteria cells per 100HT-29cells）,并抑制病原微生物Ecoli ATCC25922、styphimurium ATCC14028、S.sonnei ATCC25931生长。4株菌活菌体刺激PBMCs增殖,具有潜在免疫调节功能。     

乳酸杆菌脂磷壁酸的结构及免疫调控功能研究进展

乳酸杆菌作为益生菌的一种,是人和大多数动物肠道内不可缺少的微生物之一。随着科学技术的发展,乳酸杆菌研究的重点从活细菌转移到细菌表面成分。磷壁酸是细菌细胞壁的主要成分之一,特别是锚定在细胞膜上的脂磷壁酸作为宿主免疫调节的活性成分引起了人们的关注。本文主要综述了脂磷壁酸的理化性质、提取方法和生物学活性,包括脂磷壁酸参与乳酸杆菌对宿主的黏附定植作用、体内外肠道免疫调节以及脂磷壁酸的突变对菌株的影响等,以期为乳酸杆菌相关免疫调控研究提供参考。     

Suitability of Bifidobacterium spp. and Lactobacillus plantarum as Probiotics Intended for Fruit Juices Containing Citrus Extracts

A strain of Lactobacillus plantarum and 4 strains of bifidobacteria were inoculated in apple juice and in a commercial beverage labeled as “red‐fruit juice,” containing citrus extracts as natural preservatives; the suitability of the probiotics was evaluated in relation to their resistance to 2 kinds of citrus extracts (biocitro and lemon extract), survival in juices at 4 and 37 °C, and inhibition of Zygosaccharomyces bailii. Cell count of L. plantarum and bifidobacteria over time was fitted through the Weibull equation, for the evaluation of the first reduction time (δ), death time, and microbiological shelf life (the break‐point was set to 7 log cfu/mL). Bifidobacterium animalis subsp. lactis experienced the highest δ‐value (23.21 d) and death time (96.59 d) in the red‐fruit juice at 4 °C, whereas L. plantarum was the most promising strain in apple juice at 37 °C. Biocitro and lemon extract did not exert a biocidal effect toward probiotics; moreover, the probiotics controlled the growth of Z. bailii and the combination of L. plantarum with 40 ppm of biocitro reduced the level of the yeast after 18 d by 2 log cfu/mL.     

Amylolytic Cultures of Lactobacillus acidophilus : Potential Probiotics to Improve Dietary Starch Utilization

ABSTRACT: The amylase activity of twenty strains of Lactobacillus species isolated from intestinal contents of pigs was studied in vitro. Hydrolysis of starch was measured by following the disappearance of starch in a broth medium during the growth of all three strains. The amount of enzyme activity varied among strains. Three strains (A-4, L9 and L23) were selected for further study based on their high amylolytic activity in a broth containing soluble starch as the only carbohydrate source. Strains A-4 and L23 were identified as L. acidophilus and strain L9 was identified as L. fermentum. Among the three cultures, L. acidophilus L23 was selected as a potential candidate for use as a probiotic for improving digestion of starch in pigs based on its growth and hydrolysis of raw starch. The enzyme activity of L. acidophilus L23 was associated with the cell envelope and that of L. fermentum L9 was extracellular. The enzyme activity of L. acidophilus A4 was found in both locations. The enzyme activity of L. acidophilus L23 was inducible rather than constitutive.     

植物乳杆菌Sc52益生特性评价及其在降血糖产品中的应用

目的：考察植物乳杆菌Sc52的体外益生特性以及其在辅助降糖产品中的应用和产品开发,并分析产品的降糖作用。方法：通过酸和胆盐耐受、表面疏水性、自凝聚能力和抗生素最低抑菌浓度的方法评价植物乳杆菌Sc52的体外益生特性。植物乳杆菌Sc52与其他不同益生特性益生菌联合发酵药食同源复方提取物研制辅助降糖固体饮料,利用高脂饲料结合链脲佐菌素的方法建立小鼠糖尿病模型,实验动物分空白组、模型组和产品组,连续灌胃辅助降糖产品4?周后,测定小鼠空腹血糖含量、血糖曲线下面积,血清中血脂、胰岛素和炎症因子水平等相关生化指标。结果：植物乳杆菌Sc52具有较强的耐酸和耐胆盐能力,pH?3.0和1?g/100?mL胆盐条件下分别培养3?h和4?h后,存活率在55%和32%以上;自凝聚能力较强,静置48?h后自凝聚率达到（89±0.3）%;对青霉素和利福平表现出高度敏感性;与模型组相比,辅助降糖产品能显著降低小鼠空腹血糖、血脂、肿瘤坏死因子-α水平,明显提升胰岛素水平。结论：植物乳杆菌Sc52具有良好的体外益生特性,其联合其他益生菌共同发酵药食同源复方提取物研制的固体饮料产品具有明显的降血糖作用。     

In Vitro Assessment of Probiotic Properties of Lactobacillus Strains from Infant Gut Microflora

Lactobacillus isolates from infant feces were identified and investigated in vitro for their probiotic properties. The isolates belonged to the species L. acidophilus, L. rhamnosus, L. paracasei subsp. paracasei, L. fermentum, L. delbrueckii subsp. delbrueckii, L. cellobiosus, L. plantarum, L. brevis and L. crispatus. The strains were examined for acid and bile tolerance, adhesion to Caco-2 cells, antibiotic susceptibility and antimicrobial activity against selected enteric pathogens. According to the obtained results, a L. deblueckii subsp. delbrueckii strain was found to exhibit probiotic properties. Other strains from L. paracasei subsp. paracasei and L. fermentum group also could be further investigated as potential probiotic candidates.     

母乳婴儿源乳杆菌的筛选及其免疫调节能力研究

以分离自母乳婴儿源的乳杆菌——鼠李糖乳杆菌BF-1、植物乳杆菌BF-15、唾液乳杆菌BF-29、干酪乳杆菌BF-55为对象,研究这些菌株对体外模拟人工胃、肠液及胆盐的耐受性,对Caco-2细胞的黏附能力、安全性和对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,探讨菌株的免疫调节活性。试验结果表明:植物乳杆菌BF-15对人工消化液和胆盐有较强的耐受性,对Caco-2细胞黏附能力[(7.10±0.30)CFU/cell]显著高于阳性对照菌株LGG[(3.90±0.30)CFU/cell](P<0.05);BF-15除对氨基糖苷类、糖肽类抗生素的固有耐药性外,对苯唑西林、头孢噻吩也有耐药性,无抗性质粒;BF-15和LGG的活性和热致死菌在一定的菌浓范围(1×10^6~10^7CFU/mL)均促进体外小鼠淋巴细胞增殖,表现出剂量依赖关系,同时活性菌株作用效果明显优于热致死菌株。在相同菌浓条件下,两株菌体外免疫调节能力没有显著性差异(P>0.05)。母乳婴儿源乳杆菌——植物乳杆菌BF-15具有较强的抗逆性,较高的黏附性和一定的免疫调节能力。