花椰菜中总DNA的提取方法

DNA提取是生物技术研究的基础步骤。主要针对花椰菜组织中多糖严重干扰基因组DNA提取质量的问题,本研究用改良CTAB法提取花椰菜中DNA,结果显示改良的CTAB法提取DNA量大,产率高,无明显降解,杂质少,A260/A280比值1.80左右,完全满足后续实验要求。     

黄芪干燥根与鲜品总DNA提取方法评价

以采挖的2份新鲜黄芪根为原料,经干燥处理另制成2份干燥根样品。利用传统SDS法和改良CTAB法对干品和鲜品黄芪总DNA提取,为黄芪中药材资源的分子生物学试验提供基础原料。结果显示:改良的CTAB法提取的干品和鲜品总DNA的A260/A280比值在正常范围值内,而SDS法提取的4个样品比值均低于1.6。对8个样品总DNA进行琼脂糖电泳显示,CTAB法提取的样品条带清晰无拖尾现象,鲜品提取的总DNA浓度和质量高于干品。     

治疗用质粒DNACTAB纯化工艺的优化

目的优化治疗用质粒DNA十六烷基三甲基溴化铵(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)纯化工艺,为其规模化生产奠定基础。方法采用碱裂解法裂解含质粒pEGFP的大肠埃希菌(E.coli)DH5α菌种,在碱裂解液中加入不同终浓度的CTAB及不同终浓度的NaCl、KAc、LiCl、CaCl2、MgCl2溶液,确定CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度,并分析盐对质粒DNA选择性释放的影响。分别采用BCA蛋白浓度测定试剂盒、内毒素检测试剂盒和Real time-PCR法检测纯化的质粒DNA中宿主蛋白含量、内毒素含量和细菌基因组DNA含量;通过A549细胞及动物转染试验检测纯化质粒DNA的体外和体内生物活性。结果 CTAB纯化质粒DNA的最佳浓度为0.004%;用NaCl、KAc或LiCl提取的质粒DNA中,RNA均未完全去除,而用CaCl2或MgCl2提取的质粒DNA中,RNA含量(RNA/nucleic acid)均小于1%,CaCl2最佳终浓度范围为0.4～0.5 mol/L,MgCl2最佳浓度范围为0.3～0.4 mol/L;使用0.4 mol/L MgCl2的CTAB法纯化的质粒pEGFP的杂蛋白质、细菌基因组DNA、内毒素和RNA含量均符合FDA对治疗用质粒DNA的要求;纯化的质粒pEGFP DNA回收率达80%以上,且体外生物活性显著高于市售试剂盒纯化的质粒(P<0.05),而体内生物活性与试剂盒纯化的质粒相当(P>0.05)。结论优化了CTAB法纯化质粒DNA的工艺,该方法操作简便,经济高效,纯化得到的质粒DNA各项指标均符合FDA质量标准,且转染基因表达效率较高,质量可靠,适用于质粒DNA的大规模纯化生产。     

磁性纳米颗粒的功能化及其在DNA提取中的应用

提出了一种应用功能化的磁性纳米颗粒进行DNA提取的新方法．该方法首先通过3-氨丙基三乙氧基硅烷（APTES）在纳米颗粒表面修饰上氨基（-NH2）官能团,然后利用氨基化的磁性Fe3O4纳米粒子（NH2-MNPs）进行DNA提取。结果表明,利用100μgNH2-MNPs从200μL全血中提取的基因组DNA大于2．89μg,OD260／OD280比值介于1．78和1．82之间。     

高效液相法测定牙膏中6-姜酚的含量

目的：以6-姜酚为质量指标,建立牙膏中活性物含量的测定方法。方法：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB—C18（Analytical 4．6&#215;250mm 5-Micron）;流动相：A为水,B为乙腈;梯度洗脱;流速：1．0mL／min;枉温：40℃;检测波长：280nm;进样量：20μL。结果：6-姜酚浓度在1．2～19．2μg／ml范围内与峰高呈良好的线性关系;相关系数：0．9999;回收率：98．88％。结论：该方法操作简单、准确、精确度高、重现性好,可用于含姜提取物牙膏中活性成分6-姜酚含量的测定。     

冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中α-烯醇化酶基因mRNA的转录水平

目的研究冷应激前后大鼠心脏、肝脏、脾脏中α-烯醇化酶(α-enolase,ENO1)基因m RNA的转录水平。方法将大鼠随机分为正常对照组(24℃,正常饲喂7 d)和冷应激组(置4℃,应激12 h),提取各组大鼠心脏、肝脏及脾脏细胞总RNA,反转录成c DNA,以其为模板,PCR扩增ENO1基因,应用生物信息学软件DNAstar进行同源性分析,实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏、肝脏、脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平。结果冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏总RNA的1%琼脂糖凝胶电泳可见28S、18S和5S 3条带,A260/A280值为1.8~2.0;ENO1基因经2%琼脂糖凝胶电泳分析可见107 bp的目的基因条带;ENO1基因序列与NCBI上公布序列的同源性为100%;冷应激组大鼠肝脏、脾脏组织中ENO1基因m RNA的转录水平明显高于正常对照组(P0.01),正常对照组大鼠心脏组织中ENO1基因m RNA转录水平明显高于冷应激组(P0.05)。结论冷应激前后大鼠心脏、肝脏及脾脏中ENO1基因m RNA的转录水平均发生显著改变,本实验为动物应激状态评估及应激发生机制的研究提供了实验依据。     

浓盐法提取啤酒酵母中核糖核酸的工艺参数研究

以啤酒酵母为原料,通过浓盐法进行了核糖核酸(RNA)提取的研究,对影响RNA提取率的因素,如提取温度、提取时间、加盐量及酵母质量浓度进行了考察,获得了最大提取率的条件：提取温度95℃,提取时间为60min,氯化钠的加入量为10%,酵母质量分数为10%。正交实验表明,加盐量为反应过程的显著影响因素。在上述条件下,90g湿酵母(相当于20g干酵母)能够提取1g RNA,A260/ A280是1．983。对RNA粗品进行精制,得到固体白色粉末。     

涤纶荧光增白剂S-ER的高压液相色谱分析

本叙述了涤纶荧光增白剂S—ER的测定方法。采用HPLC法，用BFSZY1104型液相色谱拄。以甲醇：水（90：10）为流动相；流速为1．0ml／min，检测波长为280hm；主峰与杂质峰分离良好，方法快速、灵敏、准确度高，可用于产品的质量控制和评价。     

阻燃剂磷酸双酚A四苯酯（BAPP）的液相色谱分析

用高效液相色谱法（HPLC）分离阻燃剂磷酸双酚A四苯酯,液-质谱联用定性分析,面积归一化法定量。采用Spheri SorbC18／SiO2（粒径5μm,规格250mm×4．6mm）为色谱柱,以乙腈／四氢呋喃／0．04％磷酸水溶液（三者体积比为35：30：35）为流动相,流速0．8mL／min,乙腈的吸收波长为210nm,四氢呋喃吸收波长为280nm,样品BAPP分别在270nm、254nm波长下有两个吸收峰,通过对乙腈、四氢呋喃、BAPP紫外光谱的分析,选择测定波长254nm。该分析方法可以作为BAPP纯度的分析方法来表征所合成的产品质量,虽然双酚A组分相对偏差较大,基本能够满足控制分析方法的需要。     

华新水泥厂2000t／d回转窑主电机故障及解决措施

0前言众所周知,在于法水泥生产过程中,回转窑是关键设备,其运行状况的好坏直接影响水泥厂的产量和经济效益,因此,回转窑传动装置的电气保护十分重要。华新水泥厂2000d／t熟料新型干法生产线选用了我院开发设计的O3．95mX56m回转窑,窑尾采用五级旋风预热器和离线式分解炉系统。回转窑采用直流传动,直流电机为根据回转窑负载的特殊要求专门开发生产的。该电机主要参数为：型号Z4—280一32B,额定功率250kw,额定电压440V,额定电流6icA,额定转速1500r／min,励磁电压180W他励）,励磁电流16．3A,效率92％,过载2．5倍15S（此时火…     

液相微萃取——高效液相色谱法测定水稻中的吡虫啉

研究了基于中空纤维的动态三相液相微萃取(LPME),并首次将其应用到稻谷、稻叶、田水和土壤中吡虫啉农药残留的快速分离富集。实验采用磷酸二氢钾作接受液,以高效液相色谱(HPLC)为检测手段,系统地优化了LPME技术的有机溶剂、搅拌速率和萃取时间等条件。最佳色谱条件为:SB-Phenyl C18(250mm×4.6mm,5μm)液相色谱柱,以甲醇–水–三乙胺(80∶20∶1,v/v)为流动相,流速0.8mL/min,270nm波长下检测。得到方法的线性范围0.001～10μg/mL,最低检出限为1ng/mL,加标回收率92.50%～110%,富集倍数19.2倍。结果表明该方法是一种简单、快速、准确、环境友好的农药残留检测方法。     

GC-NPD测定室内空气中尼古丁含量

建立室内空气中尼古丁残留量的GC-NPD测定方法,以此作为评价室内空气中烟草烟气(ETS)污染程度的依据。此方法使用被动式采样器进行采样,以1%的硫酸氢钠为吸收液;2 mL二氯甲烷作为萃取溶剂;4 mL 1.5 mol/L的氢氧化钠为洗脱液;超声提取20 min;漩涡混合2 min,GC-NPD测定。方法线性范围0.050~5.0μg/mL,相关系数0.999 6,最低检出浓度0.5μg/m3,相对标准偏差(RSD)为3.1%~4.9%。此方法具有选择性好、灵敏度高、准确度高的特点,可用于室内环境空气中尼古丁的测定。     

一步提取-HPLC检测化妆品中氟喹诺酮类抗生素研究

采用pH=6.0的NaAc-HAc缓冲液直接提取化妆品中氟喹诺酮类(氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星)抗生素,建立反相高效液相色谱同时测定化妆品中氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星的方法。以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以0.05 mol/L柠檬酸与1.0 mol/L醋酸铵(77∶1,用三乙胺调节pH至4.0)混合液——乙腈(85∶15)为流动相,检测波长为280 nm的条件下进行测定。结果表明氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星的响应线性良好,回收率高。     

GC-MS法测定茶叶中的有机磷残留

建立了固相萃取净化-气相色谱质谱法测定茶叶中有机磷农药残留的分析方法。样品用乙腈作为提取溶剂,经Carb/NH2柱净化后供GC-MS分析。方法检出限为0.0050~0.020 mg/kg,在加标水平为0.10 mg/kg时,回收率为85.7%~101.5%,相对标准偏差为3.6%~8.6%。方法具有萃取效率高、净化效果好、精密度好,分析快速等优点,适用于茶叶中有机磷农药残留的分析检测。     

从苹果皮中提取果胶工艺条件研究

以干燥的苹果皮粉末为原料,采用了传统的酸水解法进行了果胶提取的优化设计实验。结果表明,影响果胶产率的强弱因素依次为C〉A〉D〉B,提取果胶的最佳条件为：温度（A）为85℃、料液比（B）为1：15、pH值（c）为1.5、提取时间（D）为90min,即最佳组合条件为A3B2C4D5,此时果胶的提取率达到最优化,果胶质量最好。     

离子型表面活性剂对PS-b-PAA嵌段共聚物在DMF/H_2O中自组装形貌的影响

以丙三醇为基体,合成了三(2-(N,N-二甲基十六烷基氯化铵)乙酸)丙三醇酯(S1)和(2-十六烷基羧酸酯)丙二羧酸钠(S2)两种结构相近但极性相反的表面活性剂,研究它们对聚苯乙烯-b-丙烯酸(PS-b-PAA)在DMF/H2O混合体系中自组装行为的影响。结果表明,2种表面活性剂均使PS-b-PAA的球形胶束发生了改变,但二者作用的结果不同。随表面活性剂溶液浓度的增大,S1/PS-b-PAA体系的胶束形貌发生由短棒向长棒再到囊泡的转变,形成的棒状胶束长度越来越长(由251 nm→418 nm→1 280 nm);S2/PS-b-PAA体系,胶束形貌发生由球形→较大球形和部分S2的小球形共存→片层和较大球形共存的转变,胶束尺寸逐渐增大(由134 nm→188 nm→1 597 nm)。电离后,电荷数量及其烷基链与嵌段共聚物相互作用的差异是导致2种表面活性剂对胶束形貌产生不同影响的原因。     

固相萃取技术在复方草珊瑚含片中异嗪皮啶定量分析中的应用研究

使用高效液相色谱紫外检测手段,在药典的基础上对复方草珊瑚含片中异嗪皮啶含量测定方法进行了改善,建立了一种基于固相萃取预处理技术的中药制剂含量测定方法,优化提取条件、固相萃取预处理方法、液相条件,并进行了方法学验证。结果表明,使用本方法测定的复方草珊瑚含片中的异嗪皮啶平均加样回收率在96.1%~101.1%,RSD值为1.5%,日内精密度0.9%,日间精密度1.0%。本方法分析准确,重复性好,操作简便快捷,避免了高毒性有机溶剂氯仿的使用,所用有机溶剂少,环境友好。     

SPE萃取-离子对高效液相色谱法测定可乐中4-甲基咪唑

建立了可乐中4-甲基咪唑(4-MI)的SPE萃取-离子对试剂高效液相色谱(HPLC)测定法:采用SPE固相萃取小柱分离并富集样品中4-MI,用高效液相色谱-紫外检测器分析,以甲醇/磷酸二氢钾缓冲液为流动相,在反相C18色谱柱上进行等度淋洗,进样量为25.00μL,检测波长215 nm。该方法的检出限为0.4 mg/kg(5 S),相对标准偏(RSD)均小于2%,具有良好的准确性和精密度,可满足可乐中4-MI含量测定分析。应用该方法测定多种品牌可乐中4-MI含量,范围为0.18~2.01 mg/L。     

HPLC-MS-MS法测定茶叶中的草甘膦和氨甲基膦酸

建立了茶叶中草甘膦（ PMG）及其主要代谢物氨甲基膦酸（ AMPA）残留检测的高效液相色谱-串联质谱法。样品经水超声,混合相固相萃取小柱净化,加9-芴基甲基三氯甲烷（ FMOC-Cl）溶液在硼酸盐缓冲溶液进行衍生化,采用电喷雾离子源、正离子扫描模式和多反应监测模式质谱检测,内标法定量。方法的定量检测低限为0.05 mg/kg,在1.0~20μg/L范围内线性良好,相关系数r2大于0.99,茶叶基质中, PMG和AMPA的3个加标水平下的回收率为65.5%~84.0%,相对标准偏差（ RSD, n=6）为3.5%~10.4%。该方法简单、准确性好,能满足日常检测工作的要求。     

离子色谱法检测玩具材料中可迁移六价铬

文章建立了用离子色谱法检测玩具材料迁移液中六价铬的新方法。选用12.8 mmol/L NaCO3+4.0 mmol/L NaHCO3作为淋洗液,在530nm处用紫外可见检测器检测。实验表明,当进样量为2000μL时,对溶液中六价铬的检出限达到0.009μg/L。本方法灵敏度高、准确度好,对玩具材料的加标回收率在90%~110%之间,满足新指令对玩具材料中可迁移六价铬的检测要求。