氮源对裂褶菌产裂褶多糖和β-1,3-葡聚糖酶的影响

本论文初步探讨了利用裂褶菌发酵体系所产的内切β-1,3-葡聚糖酶对发酵产生的裂褶多糖进行适度酶解,以获得分子量适中溶解度较好的裂褶多糖的可能性。以裂褶多糖产量和β-1,3-葡聚糖内切酶和总酶活为考察指标,采用刚果红琼脂染色法和摇瓶培养,从四株裂褶菌GIM5.42、GIM5.43、GIM5.44、Sc1中筛选出多糖产量和酶活都相对较高的菌株GIM5.43,多糖产量和酶活分别为2.29g/L与0.28 U/m L。在摇瓶中考察了氮源及其添加方式对裂褶菌菌体生长、裂褶多糖产率、β-1,3-葡聚糖酶的酶活及其影响规律。结果表明:菌体生长及其分泌胞外多糖和葡聚糖酶的最适酵母浸膏和氯化铵的添加时间和添加量是不同的。为了保证多糖产率,采用分批补加策略,初始酵母浸膏浓度1.00 g/L,发酵第6 d补加0.10 g/L酵母浸膏,多糖产量为4.16 g/L,比未优化提高了61.24%,总酶活为0.34 U/m L,提高了142.86%。     

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成的优化研究

采用恒温摇床培养法培养裂褶菌,研究了裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成中的碳源、氮源及各种无机盐的单因素参数,并采用四因素三水平正交实验对主要影响因素进行分析,从而确定最佳的产酶培养基配方为:葡萄糖2%,牛肉膏0.3%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%,MgSO40.05%。      

裂褶菌-长枝木霉耦合发酵制备裂褶寡糖

裂褶菌多糖是一类具有β-1,6支链的β-1,3-葡聚糖,具有很好的抗肿瘤、益生元等多种生理活性,但其过大的分子质量和水不溶性影响其功能和应用。该研究以食品安全的长枝木霉为出发菌株,通过常压室温等离子体(atmospheric room temperature plasma, ARTP)诱变筛选后得到高产内切β-1,3-葡聚糖酶的突变株T-6,所产内切β-1,3-葡聚糖酶对热凝胶和茯苓多糖具有较好的水解能力。此外,对发酵得到的突变株T-6粗酶液进行了部分的酶学性质研究,结果表明内切β-1,3-葡聚糖酶的动力学参数K_m=4.005 g/L,最适反应pH和温度分别为6.0、50℃,在pH 5.0～6.5,45～60℃酶活力较高,相对酶活力在85%以上;有严格的底物专一性,只水解含β-1,3-键的热凝胶、茯苓多糖和小核菌多糖。将裂褶菌与突变株T-6进行混合培养,获得裂褶寡糖。结构分析表明该寡糖都是由葡萄糖组成,聚合度为4～15。另外,裂褶寡糖具有良好的DPPH和超氧阴离子(·O^-₂)清除能力。该研究通过真菌耦合发酵制备的裂褶寡糖...     

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

采用不同饱和度的硫酸铵溶液对内切β-1,3-葡聚糖酶粗酶液进行分段盐析,以确定最佳盐析条件,将盐析处理后的酶液经透析浓缩、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等进一步分离纯化,浓缩纯化后的含酶组分,经过SDS-PAGE电泳分析其纯度并初步确定其分子量。结果显示:经过纯化后的内切β-1,3-葡聚糖酶的比活力由20.90U/mg提高到933.37U/mg,纯化倍数为44.7倍,酶活回收率为11.6%,电泳分析呈单一条带,分子量近似为45ku。     

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成的优化研究

采用恒温摇床培养法培养裂褶菌,研究了裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶培养基组成中的碳源、氮源及各种无机盐的单因素参数,并采用四因素三水平正交实验对主要影响因素进行分析,从而确定最佳的产酶培养基配方为:葡萄糖2%,牛肉膏0.3%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%,MgSO40.05%。     

裂褶菌产内切β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

采用不同饱和度的硫酸铵溶液对内切β-1,3-葡聚糖酶粗酶液进行分段盐析,以确定最佳盐析条件,将盐析处理后的酶液经透析浓缩、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等进一步分离纯化,浓缩纯化后的含酶组分,经过SDS-PAGE电泳分析其纯度并初步确定其分子量。结果显示:经过纯化后的内切β-1,3-葡聚糖酶的比活力由20.90U/mg提高到933.37U/mg,纯化倍数为44.7倍,酶活回收率为11.6%,电泳分析呈单一条带,分子量近似为45ku。      

凝胶渗透色谱法测定多元共聚物(ZF422KS)的分子量及其分布

凝胶渗透色谱法(GPC)是测定聚合物相对分子量及其分布的最常用、有效和快速的一种分析方法。本文介绍了多元共聚物(ZF422KS)生产过程中用GPC法测定其分子量及其分布的实验方法,为生产工艺条件的改进提供了参考。     

广东虫草多糖脱蛋白及凝胶渗透色谱法表征其分子量分布的研究

通过比较蛋白脱除率和多糖损失率,研究Savage法、三氯乙酸(TCA)法及盐酸法对广东虫草多糖(CGP)脱蛋白的效果,并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测定虫草多糖组分的保留时间tR、重均分子量Mw、数均分子量Mn、峰位分子量Mp、多分散性PD以及各细分的相对含量,以表征广东虫草多糖的分子量分布.结果表明:采用Savage法脱蛋白总体效果较好,处理次数3次为宜;GPC谱图分析结果表明,CGP含有三个不同分子量级别的多糖组分,其重均分子量Mw分别为2.57×106、3.84×104及5.00×103.     

广东虫草多糖的醇沉及凝胶渗透色谱法表征其分子量分布的研究

采用浓度为30%、50%、70%、90%的乙醇对广东虫草多糖(CGP)进行分级醇沉(GEP)和分步醇沉(SEP)处理.并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测定各醇沉组分的保留时间1R、重均分子量Mw、多分散性PD以及各组分的相对含量,以表征不同醇沉方法所得多糖组分的分子量分布.结果表明:不同乙醇浓度醇沉得到的多糖组分的分子量大小有很大差异,且不同分子量范围的多糖在不同醇浓度下的含量也不一致;要获取更多的大分子量虫草多糖,宜采用分步醇沉法,乙醇浓度应从30%逐渐增大到70%;若采用分级醇沉法,则乙醇的浓度应选择在50%～70%.     

广东虫草多糖的醇沉及凝胶渗透色谱法表征其分子量分布的研究

采用浓度为30%、50%、70%、90%的乙醇对广东虫草多糖(CGP)进行分级醇沉(GEP)和分步醇沉(SEP)处理。并利用凝胶渗透色谱法(GPC)测定各醇沉组分的保留时间tR、重均分子量Mw、多分散性PD以及各组分的相对含量,以表征不同醇沉方法所得多糖组分的分子量分布。结果表明:不同乙醇浓度醇沉得到的多糖组分的分子量大小有很大差异,且不同分子量范围的多糖在不同醇浓度下的含量也不一致;要获取更多的大分子量虫草多糖,宜采用分步醇沉法,乙醇浓度应从30%逐渐增大到70%;若采用分级醇沉法,则乙醇的浓度应选择在50%～70%。      

啤酒酵母蛋白酶解物分子量分布研究初探

凝胶层析分离经胰蛋白酶酶解啤酒酵母后得到的多肽粗粉,并采用SDS-PAGE电泳测定啤酒酵母多肽分子量,发现其中含有16～26、5、1·4kDa等三种不同分子量水平的蛋白组分,酶解得率分别为27·08%、11·55%、17·99%。      

中国毛虾酶解产物的分子量分布及ACE抑制活性

利用胃蛋白酶酶解中国毛虾制备具有血管紧张素转化酶抑制活性的酶解产物,并采用凝胶色谱法探讨酶解产物的分子量分布。结果表明:在45℃、pH2.5、酶量2%(w/w)、酶解4h、底物浓度20%(w/v)条件下,中国毛虾酶解产物的ACE抑制率高达85.9%;Sephadex G-15葡聚糖凝胶色谱图上出现5个吸收峰,其中高ACE抑制活性组分的分子量在1320～311之间,IC50为0.77mg/mL。     

Pepsin-induced changes in the size and molecular weight distribution of bovine casein during enzymatic hydrolysis

Bovine casein was digested with pepsin at pH 2.0 in a batch-stirred tank reactor. To investigate the effect of peptic digestion on the aggregate size and molecular weight distribution of bovine casein, the resulting hydrolysates were examined by size-exclusion chromatography coupled with multiangle laser light scattering and dynamic light scattering. Casein was resolved by size-exclusion chromatography into 2 major peaks corresponding to aggregates and monomers, both of which showed a continuous decrease as hydrolysis proceeded. However, the ratio of aggregates to monomers was maintained at almost 1 (2:2.5) during the initial 30-min hydrolysis, indicating that the caseins in solution were in a type of equilibrium between aggregates and monomers. Upon peptic hydrolysis, casein aggregates increased in size and molecular weight, and exhibited a decrease in intermolecular repulsion. This finding was confirmed by dynamic light scattering measurements, which traced the changes in the hydrodynamic radii and light scattering intensities of casein hydrolysates. In addition, the release kinetics of peptide fractions with different molecular weights was also examined. It was concluded that the increase in hydrophobic attraction and the reduction in intermicellar repulsion might promote the growth in aggregate size of bovine casein during the limited hydrolysis.     

仙人掌多糖的提取、分离纯化及GPC法测定其分子量

研究了仙人掌多糖水提法的最佳工艺条件,以及仙人掌多糖的分离纯化.试验结果表明,提取液用Savag法脱蛋白后,采用Sephacryl S-400柱层析纯化,得到仙人掌多糖OP,经过高效凝胶渗透色谱和常压凝胶柱色谱分析表明,OP为均一多糖,高效液相凝胶色谱法测定OP分子量(Mw)为172591Da.     

碱法制备脱铬革屑胶原水解物分子量的测定

采用凝胶过滤色谱法测定了不同水解条件下 ,碱法制备胶原水解产物的分子量及分子量分布。试验结果表明 :采用凝胶过滤法测定碱法制备脱铬革屑胶原水解产物的分子量是可行的。随着 Ca O用量的增加 ,反应温度的升高以及反应时间的延长 ,胶原水解物的分子量呈下降趋势。通过控制碱法的不同水解条件 ,可获得分子量在一定范围内的胶原蛋白水解物 ,以适合不同的用途。     

酪蛋白酶解物中抗菌肽的分离及其分子量的测定

使用离子交换层析分离纯化酪蛋白酶解物中的抗菌肽并测定其分子量。选用Q-Sepharose Fast Flow为分离介质,对分离条件进行了研究,并对各洗脱组分进行抑菌活性测定,确定了适宜分离条件下酪蛋白抗菌肽的洗脱体积,同时测定了酪蛋白抗菌肽的分子量。结果表明,离子交换层析对酪蛋白酶解物中的抗菌肽的最佳梯度洗脱条件为:流动相A:pH10.5的0.05mol/L乙醇胺盐酸缓冲液;流动相Β:含1mol/L氯化钠的A相溶液,pH10.5;洗脱程序:7%B,1.55CV;13%B,1.40CV;25%B,1.25CV;100%B,1.55CV,洗脱流速:0.5mL/min,检测波长:280nm,酪蛋白抗菌肽的洗脱体积为76.57mL和89.48mL。酪蛋白抗菌肽的平均分子量为3137u。     

几种南海贝类酶解产物的生物活性及其分子量分布研究

对菲律宾蛤仔、波纹巴非蛤、马氏珠母贝双酶水解产物的自由基清除活性和血管紧张素转化酶（ACE）抑制活性及分子量分布进行研究。结果表明：3种贝类酶解产物均具有清除羟自由基、超氧阴离子、二苯基苦基苯肼（DPPH）等自由基的活性以及ACE抑制活性;3种贝类酶解产物对超氧阴离子的清除作用均较弱;羟自由基清除活性较强的是菲律宾蛤仔酶解产物,其高活性组分的分子量在1479～851 Da之间;DPPH自由基清除活性较强的是菲律宾蛤仔酶解产物,其高活性组分的分子量在1479～851 Da之间;ACE抑制活性较强的是波纹巴非蛤酶解产物,其高活性组分的分子量在633—303 Da之间。     

牡蛎酶解产物的组成特点及其体外免疫活性

香港牡蛎是我国南方高产低值的一种海洋贝类。为了提高其附加值,本研究以香港牡蛎为原料,通过酶法水解结合细胞实验对酶解产物及其超滤组分进行组成特点分析和免疫活性评价。结果表明:牡蛎酶解产物及各超滤组分分子量分布主要集中在<2.5 k Da范围内,含量达53.00%~85.00%,且氨基酸组成齐全;牡蛎酶解产物可促进脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的免疫功能,各超滤组分(>10、10~5、5~2.5和<2.5 k Da)在浓度为0.25~4.0 mg/m L范围内,其体外免疫活性强弱具有一定的浓度相关性,且<2.5 k Da组分和5~2.5 k Da组分的免疫功能优于其他组分。牡蛎酶解产物各超滤组分中<2.5 k Da组分和5~2.5 k Da组分可作为进一步研究的对象。      

鸡肉蛋白的酶解特性及酶解产物的抗氧化性研究

利用碱性蛋白酶(Alcalase)酶解鸡肉蛋白,在单因素的基础上,运用响应面(RSM)以水解度为响应值对最佳工艺进行分析,探讨最佳酶解条件.结果表明:各因素对提高水解度的重要性依次为酶的添加量>酶解温度>酶解时间＞液固比;最佳实验条件为:酶的添加量5μL/g(鸡肉)、反应时间5h、温度47.3℃、pH=8.5、液固比=5,此时水解度为25.53%.对不同水解度的酶解液进行羟自由基(·OH)清除能力和抗氧化能力(AOV)研究,发现酶解产物具有明显的清除羟自由基(·OH)活性和较大的抗氧化能力(AOV),且在一定范围内抗氧化活性随着水解度的增加而增大.