抗人M型红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体的理论化特性研究

本文报告了理化因素对抗人Ｍ型红细胞膜血型糖蛋白Ａ单克隆抗体活性听影响。在ＰＨ７。５－９。５，反应温度２０－３０℃范围内，只有４Ｅ６特异性凝集具有Ｍ血型抗原的红细胞，其余各单克隆抗体与Ｎ型红细胞有交叉凝集反应。     

抗人红细胞表面抗原glycophorin A杂交瘤细胞株的建立

应用杂交瘤技术,用纯化人红细胞表面抗原glycophorin A“N”型免疫纯系BALB/c小鼠,用glycophorin A“M”型作为固相抗原,用EIA间接筛选出识别“M”、“N”血凝抗原以外的抗glycophorin A的抗体,进而利用Coombs原理,加入抗免疫球蛋白,筛选出非凝集型抗glycophorin A抗体,得到61株非凝集型抗glycophorin A杂交瘤,其中12株有限稀释法克隆4次后得到5株稳定分泌非凝集型抗体的杂交瘤并进行初步鉴定。单抗上清血凝效价可达1:20～50,腹水血凝效价为1:800～1:1 600。     

检测M、N血型抗原的双位点一步ELISA方法的建立

目的　建立一种特异性强、灵敏度高的检测MN抗原的新方法。方法　应用抗M、抗N及抗血型糖蛋白A单克隆抗体 ,建立双位点一步ELISA法。结果　检测M、N抗原的最适pH值分别为 6 0及 7 5。适宜的反应温度为 2 0 30℃。利用表面活性剂l o n octyl β D glucopyranoside(OBG)浸泡血痕 ,可明显提高ELISA法检测陈旧血痕中N抗原的灵敏度 ,检测微量液体血和新鲜血痕的灵敏度分别为 0 .0 3μg血液和 0 .0 1～0 .0 5 μg干血。 结论　该法特异性强、灵敏度高 ,为法医血清学MN分型检验提供了一种新方法     

抗M血型抗原单克隆抗体特性的研究

以OM型人红细胞膜血型糖蛋白A为抗原，通过交瘤技术，获得一株稳定分泌抗M血型抗原的单抗细胞株（4E6）。所分泌抗体类型为IgG2b。4E6能特异性识别M型血型糖蛋白A的双聚体及单体；4E6与M型PanelA红细胞呈持异性反应；临床初步应用表明，4E6可用于对M、N血型系统的分型。     

抗人GPA~N单克隆抗体的制备及鉴定

目的　制备抗GPA单克隆抗体以建立“GPA体细胞突变分析法”。方法　用O ,N型人红细胞 ,以及纯化人GPAN 免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备 ,用细胞凝集、间接免疫荧光筛选 ,用ELISA、Westernblot、酶处理红细胞的间接免疫荧光标记鉴定。结果　获得抗GPAN 单克隆抗体 6A8杂交瘤细胞系。其单抗属lgG3亚类 ,λ型轻链 ,识别和结合GPAN 氨基端 1～ 8位决定位点 ,对糖链依赖。流式细胞分选结果显示 6A8特异结合二甲亚胺固定的人MN和N型红细胞。结论　对分析由于基因突变和糖基化变异所致N ,MN红细胞GPAN 突变有理论研究和应用价值。     

国产单抗血型定型试剂质量研究

对国产抗A、抗B单抗血型试剂进行了质量、稳定性、与亚型细胞识别检定及临床应用。临床应用对象包括1岁及1岁以下婴儿、59及59岁以上老人、肿瘤患者及非肿瘤患者、健康献血员、少数民族人群。共414044人,正反定型及与人血清试剂相符率为99．998％。质量及临床应用结果表明,我国单抗血型定型试剂,已达到人血型定型试剂要求,可以取代人血清型试剂推广应用。     

人MNS_s血型系统抗N单克隆抗体的研制

应用杂交瘤技术,将 NS-1细胞与完整的红细胞免疫的 BALB/c 鼠脾细胞融合,获得MNS_s 血型系统分泌 IgG 抗 N 抗原的杂交瘤细胞株——10D_6。细胞培养上清效价1∶1024,亲和力7秒,经过8个月以上的连续传代培养,细胞增殖良好,性状稳定,持续分泌高效价,高亲和力,抗N 抗原的单克隆抗体。可作为血型检测的又一标准试剂。     

磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒螺旋体

目的应用磁凝集法梅毒检测试剂检测梅毒特异性抗体和反应素。方法应用磁凝集法梅毒检测试剂(Tre-ponema pallidum magnetic particle agglutination,TPMPA)检测梅毒阳性血清,分析梅毒阳性血清符合率、梅毒血清抗体滴度、假阳性检出率及交叉反应。结果用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测26份梅毒阳性血清样品,结果均为阳性,与省血液中心和省疾控中心的检测结果的符合率为100%;应用TPMPA-B试剂检测梅毒抗体滴度结果均较用梅毒甲苯胺红不加热血清试验诊断试剂(TRUST)检测结果高2个滴度;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测正常血清,结果均为阴性,与省血液中心检测结果相符;用TPMPA-A、TPMPA-B试剂检测5份风湿病患者血清和13份慢性肝病患者血清,均未出现交叉反应。结论磁凝集法梅毒检测试剂具有良好的特异性和敏感性,操作简便、省时,可初步用于检测梅毒特异性抗体和反应素。     

孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN的意义

目的探讨孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN的意义。方法筛查4200份孕妇血清中红细胞血型不规则抗体,阳性者检测抗体特异性、免疫球蛋白类型及效价;对检测出IgG类不规则抗体者,分娩时取脐血(或新生儿血)检测血清(浆)游离抗体,并进行红细胞直接抗球蛋白试验和红细胞放散试验,以诊断其是否发生HDN。结果4200份孕妇血清中检出红细胞血型不规则抗体44份(阳性率为1.05%),其中20份孕妇血清的抗体为IgG类或IgG及IgM混合抗体,脐血(或新生儿血)检测结果,10名婴儿发生了Non-ABO-HDN,1名发生了宫内死胎。致病的抗体特异性分布为:抗-D2例、抗-c1例、抗-E2例、抗-cE1例、抗-M4例(其中1例并有抗-A)。结论孕妇体内IgG类的Rh血型系统的抗体及抗-M易引起non-ABO-HDN,检测孕妇IgG类红细胞血型不规则抗体对早期诊断Non-ABO-HDN、鉴别引发HDN的抗体型别、评估HDN的严重程度及制定治疗方案均具有重要意义。     

抗人M型红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体的理化特性研究

本文报告了理化因素对抗人M型红细胞膜血型糖蛋白A单克隆抗体（4E6、4H6、4D8、2C8）活性的影响。在PH7.5～9.5，反应温度20～30℃范围内，只有4E6特异性凝集具有M血型抗原的红细胞，其余各单克隆抗体与N型红细胞有交叉凝集反应。选择pH8.0，20℃适宜的反应条件，用4E6单充隆抗体对516份成人外周血及65份胎儿脐带血进行MN分型，结果与市售MN分型用动物免疫标准血清完全一致。4E6对猪等8种动物红细胞无交叉反应。     

1份正反定型不符献血者标本的血清学及分子特性分析

目的对1份正反定型不符的献血者标本进行血清学及分子特性分析。方法采用吸收放散试验进行红细胞弱抗原检测,SSP-PCR方法进行基因分型,PCR产物克隆后进行测序分析。结果该标本血清学反应格局符合Ax亚型,分子生物学检测为A型。测序结果表明,Exon4含有2个连续碱基错义突变位点,分别为nt187G>A,nt188C>T,导致第63位氨基酸的改变(Arg63His)。结论该Ax亚型是由于Exon42个碱基突变,引起氨基酸的改变,导致糖基转移酶活性的降低,从而使红细胞上表达的A抗原大大减少。     

污水的生物处理--生物转盘法

从生物转盘的处理原理及基本特性出发,综述了该技术在生活污水、脱氮除磷、含酚废水和其他工业废水处理领域中的应用情况,分析了生物转盘废水处理过程中的几个重要因素,如盘片材料、转盘转数、浸没百分比、水力停留时间等对处理效果及投资与维护的影响,最后提出转盘材料的研发及系统长期稳定运行条件的研究等问题是生物转盘今后在水处理中的主要发展方向。     

Proteome of Stored RBC Membrane and Vesicles from Heterozygous Beta Thalassemia Donors

Genetic characteristics of blood donors may impact the storability of blood products. Despite higher basal stress, red blood cells (RBCs) from eligible donors that are heterozygous for beta-thalassemia traits (βThal⁺) possess a differential nitrogen-related metabolism, and cope better with storage stress compared to the control. Nevertheless, not much is known about how storage impacts the proteome of membrane and extracellular vesicles (EVs) in βThal⁺. For this purpose, RBC units from twelve βThal⁺ donors were studied through proteomics, immunoblotting, electron microscopy, and functional ELISA assays, versus units from sex- and aged-matched controls. βThal⁺ RBCs exhibited less irreversible shape modifications. Their membrane proteome was characterized by different levels of structural, lipid raft, transport, chaperoning, redox, and enzyme components. The most prominent findings include the upregulation of myosin proteoforms, arginase-1, heat shock proteins, and protein kinases, but the downregulation of nitrogen-related transporters. The unique membrane proteome was also mirrored, in part, to that of βThal⁺ EVs. Network analysis revealed interesting connections of membrane vesiculation with storage and stress hemolysis, along with proteome control modulators of the RBC membrane. Our findings, which are in line with the mild but consistent oxidative stress these cells experience in vivo, provide insight into the physiology and aging of stored βThal⁺ RBCs.     

一种测定血型物质含量的新方法

基于补体介导的溶血原理，建立了测定血型物质含量的溶血抑制试验。分型血清抗体与血球结合后，在补体的作用下可以溶解血球而释放血红蛋白，通过测定上清中血红蛋白含量求出所测样品中的血型物质含量。该方法的灵敏度（0．078μg／ml）比常规的血凝抑制试验（0．3125～0．165μg／ml）高4～8倍，重复性好，简便易行，可用于测定生物制品中血型物质的含量。     

24例输血患者血型不规则抗体分析

目的对输血患者中血型不规则抗体检出情况进行分析,探讨不规则抗体筛检及抗体鉴定在临床输血中的意义。方法收集2006年11月～2007年9月,在山西省临汾市人民医院院输血治疗的患者标本3115份,应用盐水法、RhD初筛试验凝聚胺法检测不规则抗体,抗体筛检阳性标本进一步以微柱凝胶抗人球蛋白法鉴定,分析抗体的特异性。结果凝聚胺法检出不规则抗体22份,微柱凝胶抗人球蛋白法检出24份,其中抗-E抗体占20.8%,抗-c抗体占25.0%,抗-D抗体占12.5%,抗-P1抗体占12.5%,抗-Jkb抗体占29.2%。阳性标本中,Rh系统占62.5%,其他系统占37.5%。结论输血前对受血者进行常规的抗体筛检试验,对预防溶血性输血反应,提高临床用血的安全性和有效性具有重要意义。     

韶关地区人群ABO、Rh、MN、P及Jk~(a-b-)血型分布

目的了解韶关地区人群的ABO、Rh、MN、P及Jk(a-b-)血型的分布规律,为献血者招募及科学合理储存血液提供理论依据。方法采用U型96孔微量板法,对献血者血样进行ABO正反定型及Rh、MN、P血型检测,结果可疑者用试管法确认,并进行Jk(a-b-)表型筛查。结果ABO血型基因频率r>p>q,表型分布规律为O>A>B>AB;Rh(D)阴性占0.16%;A2亚型在AB型的检出率高于A型;MN血型的基因频率m>n,表型分布规律为MN>M>N;P血型的基因频率p2>p1,表型分布特征为P2>P1;Jk(a-b-)表型检出率为1∶22161.5。结论韶关地区血型分布以O型所占比例最多,且A型多于B型,A2亚型检出率高,Rh(D)阴性率低,Jk(a-b-)表型更低;应加大O型、A型献血者的招募并相应增加其库存量,特别是要加强Rh(D)阴性和Jk(a-b-)表型献血者的档案管理、Rh(D)阴性血液和Jk(a-b-)血液的冰冻保存工作及Jk(a-b-)人员的自身储血工作。     

Long-Chain Omega-3 Polyunsaturated Fatty Acids in the Blood of Children and Adolescents with Juvenile Bipolar Disorder

Reduced long-chain omega-3 polyunsaturated fatty acids (LCn-3PUFA), including eicosapentaenoic acid (EPA) and docosahexaenoic acid (DHA), have been reported in adult patients suffering from depression and bipolar disorder (BD). LCn-3PUFA status has not previously been examined in children and adolescents with BD compared with healthy controls. Fifteen children and adolescents (9-18 years, M +/- SD = 14.4 +/- 3.48) diagnosed with juvenile bipolar disorder (JBD) and fifteen healthy age and sex-matched controls were assessed for dietary intake and fasting red blood cell (RBC) membrane concentrations of LCn-3PUFA. Fatty acid concentrations were compared between participants diagnosed with JBD and controls after controlling for dietary intake. RBC membrane concentrations of EPA and DHA were not significantly lower in participants diagnosed with JBD compared with healthy controls (M +/- sem EPA = 3.37 +/- 0.26 vs. 3.69 +/- 0.27 microg/mL, P = 0.458; M +/- sem DHA = 22.08 +/- 2.23 vs. 24.61 +/- 2.38 microg/mL, P = 0.528) after controlling for intake. Red blood cell DHA was negatively (r = -0.55; P = 0.044) related to clinician ratings of depression. Although lower RBC concentrations of LCn-3PUFA were explained by lower intakes in the current study, previous evidence has linked reduced LCn-3PUFA to the aetiology of BD. As RBC DHA was also negatively related to symptoms of depression, a randomised placebo-controlled study examining supplementation with LCn-3PUFA as an adjunct to standard pharmacotherapy appears warranted in this patient population.