烟草黑胫病拮抗菌的筛选鉴定与防病促生作用研究

为获取优良黑胫病生防菌株,从大连海域生长的海绵中分离到一株具有高拮抗活性的放线菌DL157,根据培养和显微形态、生理生化数据及16SrRNA序列分析,鉴定DL157菌株为浅紫链霉菌（Streptomycesviolascens）。菌株DL157在平板对峙、盆栽试验与大田试验中均表现出较高的抑菌活性,抑制率分别为60.28%、69.2%和83.5%。DL157菌株可以通过分泌蛋白酶、纤维素酶和几丁质酶破坏烟草疫霉菌菌丝细胞壁结构,致使其细胞壁受损,原生质渗漏,进而表现出抑制作用。DL157菌株可以促进烟草种子萌发和幼根伸长,提高萌发烟草种子可溶性蛋白含量与淀粉酶活性。此外,DL157菌株具有遗传稳定性,经过50次传代培养,依然保持较高抑菌活性。综上,浅紫链霉菌DL157具有开发为烟草黑胫病生防制剂的潜力。     

烟草根际促生菌(PGPR)的筛选、鉴定及促生机理研究

筛选并鉴定了贵州烟区烟草根际促生菌（PGPR）菌株。测定PGPR产激素能力、定殖能力以及对烟草苗期促生作用,以具备多项促生能力为筛选标准,确定目标PGPR,再通过16S rDNA、平板对峙以及PCR技术对目标PGPR进行属鉴定、抗病能力测定。通过筛选获得的7株目标PGPR均能产生脱落酸、细胞分裂素、赤霉素和生长素。烟苗盆栽试验表明7株PGPR均具有促生效果,其中LX-7处理的烟苗鲜重和根系活力最大;大田移栽30d后,LX-7根际定殖数量可维持107cfu/g根,显著高于其它菌株;抑菌试验证实LX-4、LX-5和LX-7具有广谱抗菌作用。综合考量,LX-4、LX-5和LX-7具有显著的促生效果,经16SrDNA鉴定分别为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌。      

两株烟草根际拮抗菌的生防和促生效果研究

使用植物根际促生细菌(PGPR)来防治土传病害是目前生物防治的研究热点。在温室内进行盆栽试验以研究从烟株根际筛选出的两株生防细菌对烟草黑胫病的防治和促生效果,试验设4个处理,分别为接种生防菌YC0573、YC0136、药剂对照(甲霜灵锰锌)和发病对照。结果表明,温室条件下YC0573和YC0136的防治效果分别达到90.9%和95.4%,均高于甲霜灵锰锌(86.4%);接种生防菌的烟株生长状况明显好于对照烟株。对不同生长期烟株叶片叶绿素含量、电解质相对渗透率以及超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化氢酶等系统抗性相关指标进行测定,结果显示,两株拮抗菌可诱导烟株产生系统抗性(ISR),增强对病害的防御力,并且能有效防治烟草黑胫病,促进烟株生长,具有良好的应用潜力。     

烟草镰刀菌根腐病拮抗细菌的筛选鉴定及促生防病效果

为挖掘对烟草镰刀菌根腐病具有较强拮抗作用的生防菌株,采用稀释涂布平板法从健康烟株根际土壤中分离纯化对烟草镰刀菌根腐病（Fusarium root rot）主要病原具有一定拮抗作用的细菌,进行形态学、生理生化特征和16S rDNA序列分析鉴定,并测定促生防病效果。经平板对峙测定,筛选出2株对烟草镰刀菌根腐病病原具有较好抑制作用的菌株YX53和YX72,对茄病镰刀菌（F.solani）的抑制效率分别为83.66%和73.54%,对尖孢镰刀菌（F.oxysporum）的抑制效率分别为57.57%和55.89%;2菌株无菌发酵滤液对病原孢子萌发抑制率为84.82%～100%,其挥发性化合物可抑制病原菌丝生长或产孢,且对烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）、根串珠霉菌（Thielaviopsis basicola）等也有抑制效果。鉴定结果表明,YZ53和YX72分别为蜡样芽孢杆菌Bacillus cereus和枯草芽孢杆菌B. subtilis。经2菌株处理的烟苗胚根增长率分别达到了67.86%和161.61%,盆栽烟苗根长、最大叶面积、鲜质量等均有所增加;YX53盆栽防...     

3株拮抗烟草尖孢镰刀菌的木霉菌筛选鉴定及促生防病效果评价

  目的  为筛选对烟草镰刀菌根腐病菌具有较好拮抗效果的菌株。  方法  从河南省主要烟叶产区健康烟株根际土壤中,分离纯化对尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有一定拮抗作用的真菌菌株,对筛选出的拮抗菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定促生作用和防治效果。  结果  分离纯化得到的3株木霉菌分别为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）Ta-0101、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）Th-0201和毛簇木霉（Trichoderma velutinum）Tv-0207,具有较强的抑菌能力,对尖孢镰刀菌的抑菌率分别为91.24%、84.71%和82.48%。3株木霉菌对烟草种子根长和总长均有显著的促生效果,根长增长率分别为28.89%、25.92%和22.22%,根系活力也显著提高;对烟株最大叶面积和鲜重的促生作用明显,其中棘孢木霉Ta-0101促生效果最显著。3株木霉菌对尖孢镰刀菌的相对盆栽防效分别为78.95%、69.73%和69.73%,均高于70%甲基硫菌灵1000倍液处理的防效。  结论  3株拮抗木霉菌具有较好的抑菌效能和促生防病效果,应用前景良好。      

防治烟草黑胫病的根际细菌分离与筛选

从云南昆明、玉溪、曲靖、楚雄、大理等地13份烟田根际土样中,经分离纯化得到753株根际细菌.通过对黑胫病病原(Phytophthora parasitica.var.nicotiana)的平板拮抗筛选,共得到有抑制病原菌生长的根际细菌97株,用细菌悬液浸泡烟草种子,通过测定烟草种子发芽率和对烟草苗期的促生作用,选出有较好促生作用的细菌19株,再进行温室盆栽测定,选出对烟草黑胫病有防病促生作用的根际细菌6株,分别编号为RB-1、R4、RB-42、RB-59、RB-78、RB-89.在研究过程中发现,从明胶、几丁质培养基和从根表上分离到的细菌,其防病促生作用的机率较高.在防治苗期黑胫病的温室试验中,RB-42和RB-89菌株的相对防治效果分别达到42.22%和37.78%.通过形态学与生理生化初步的鉴定,RB-42、RB-78、RB-89鉴定为假单胞杆菌(Pseudomonas spp.),R4鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.).     

荧光假单胞菌YG-1对烟草根黑腐病菌的体外拮抗

为丰富烟草根黑腐病菌高效拮抗菌资源,从玉溪烟草种植区根际土壤中分离烟草根黑腐病高效拮抗菌,结合生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定高效拮抗菌,测定菌株发酵液挥发性物质及发酵液粗提物对根黑腐病菌的拮抗活性。结果表明,筛选得到的12株拮抗菌中YG-1表现出最强的拮抗活性,经生理生化特性和16S rDNA序列分析鉴定为荧光假单胞菌（Pseudomonas fluroescens）。菌株YG-1发酵液挥发性物质可有效抑制烟草根黑腐病菌的生长,使菌丝扭曲畸形,并且降低产孢量,经GC-TOF-MS测定,YG-1发酵液含有酸、醛、酯以及一些含硫化合物,其中酸类物质和含硫化合物抑菌效果强。菌株YG-1发酵液粗提物能破坏烟草根黑腐病菌孢子质膜,当粗提物质浓度为0.25 mg/mL时,孢子失膜率达55.42%,同时检测到有明显的离子和核酸渗漏。拮抗菌YG-1具备开发为生防菌剂的潜力。     

拮抗烟草疫霉菌的木霉菌株筛选鉴定及防病促生作用研究

为了获得对烟草黑胫病菌具有较好拮抗效果的木霉菌株,从河南省各烟区烟草根茎类病害发生较重烟田健康烟株的根际土壤中共分离获得疑似木霉菌28株,通过平板对峙培养,筛选出菌株XYPQ-1、ZMD-1和XYLS-5对烟草疫霉菌具有较强抑制作用,5 d后抑菌率达90%以上。利用分子生物学方法分别将其鉴定为绿木霉菌（Trichoderma virens）、拟康宁木霉菌（Trichoderma koningiopsis）和近渐绿木霉菌（Trichoderma paraviridescens）。对其代谢物抑菌活性及防病促生效果进行了初步研究,结果表明,3种木霉菌产生的挥发性和非挥发性代谢物均对疫霉菌具有明显的抑制作用,其中XYLS-5的抑制效果最好,处理后5 d,其挥发性和非挥发性代谢产物的抑菌率分别达61.71%和100.00%。3种木霉菌对烟草黑胫病均具有较好的室内防效,其中XYLS-5的防效最高,达80%以上,且具有促进烟草种子萌发和根系生长的作用,可作为烟草黑胫病生物防治的拮抗菌加以开发应用。     

两株生防菌对烟草黑胫病的抑制活性及其鉴定

为测定烟草黑胫病生防菌K9-3和L14-2两菌株的生防潜力,通过对峙培养法、孢子萌发试验和盆栽试验测定对烟草黑胫病病原菌的抑制能力,以双层滤纸法和盆栽检测法测定在烟草根际定殖能力,并根据形态特征、生理生化特性和16S rDNA序列分析,鉴定K9-3和L14-2两株生防菌。结果表明:在室内试验中,这两株生防菌可抑制烟草黑胫病病原菌菌丝的生长、游动孢子囊的形成、游动孢子的释放和休止孢子的萌发;在盆栽试验中,有效防治烟草黑胫病,L14-2对烟草黑胫病的防治效果达到96.29%,K9-3的防治效果为77.78%。同时,K9-3和L14-2均具有良好的根际定殖能力,以双层滤纸法测定其在烟草根部的定殖密度分别为1.30×105cfu.cm-1和7.00×104cfu.cm-1,在盆栽试验中两菌株在烟草根际土壤和烟草根部保持一定的定殖密度,在烟草根际土壤中的定殖密度随着时间经过有所下降,但在烟草根部定殖密度均稳定保持在105cfu.g-1以上。另外,两菌株的鉴定结果,K9-3鉴定为普城沙雷菌,L14-2鉴定为绿针假单胞菌。     

烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）拮抗菌L210的鉴定及生防潜力评价

为筛选烟草镰刀菌根腐病（Fusarium spp.）的高效拮抗菌株,通过平板对峙、盆栽和大田复筛试验,从平顶山烟区烟株根际土壤中分离筛选拮抗菌;利用形态观察、生理生化测试和16S rDNA序列分析对拮抗菌进行鉴定,并对拮抗菌抗镰刀菌根腐病的机理进行研究。结果表明：从10份土壤样品中共分离土壤微生物菌株512株,其中以L210菌株对镰刀菌根腐病抑制效果最好,平板对峙抑菌直径71.4 mm,抑菌率为68.2%;盆栽和大田防病试验的发病率分别为0、6%,病情指数分别为0、1.5,防治效果分别为100%和77.9%。初步鉴定L210菌株为液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）,其抑菌机理为溶解尖孢镰刀菌的菌丝,使其失去侵染能力,进而抑制病原菌的生长。菌株发酵液中含有几丁质酶和纤维素酶,可溶解病原菌的细胞壁,还可显著诱导提高烟苗中多酚氧化酶（PPO）、过氧化物酶（POD）和苯丙氨酸解氨酶（PAL）等防御酶的活性。因此,菌株L210在烟草镰刀菌根腐病的生物防治中具有较大的应用潜力。     

不同菌种对豆酱品质的影响

豆酱是我国传统的调味品,为了生产风味更好的豆酱,通过对四种菌种进行对比试验,确定了一种使成品风味较好的菌种应用于生产。     

PGPR菌肥在烤烟漂浮育苗中的应用

从烤烟根际分离得到2株细菌菌株A03和B04,平板测定对3种烟草病害烟草角斑病、青枯病和赤星病的病原菌有较强的拮抗作用,其中B04菌株具有解磷能力。将该2菌株扩大培养制成菌肥按1％的比例拌入育苗基质中应用于烤烟漂浮育苗,试验不间菌肥处理对烟苗的影响。结果显示：播种后27d,A03菌肥处理种子发芽率比对照显著提高53．1％;播种后39d,A03和B04菌肥处理种子发芽率分别比对照提高5．5％和1．8％。菌株A03和B04菌肥处理成苗素质显著高于对照,菌株A03菌肥处理烟苗茎高、茎粗、茎干重、根鲜重和根长分别比对照提高51．1％、19．8％、84．4％、50．3％和53．7％,叶色深绿;菌株B04菌肥处理烟清茎高、茎粗、茎干重、根鲜重和根长分别比对照提高24．2％、0．8％、71．9％、32．0％和34．7％。菌肥处理移栽成活率均为100％,对各种病害有较强的抗性,表明荫株A03和B04对烤烟具有较强的促生作用,是烤烟根际促生菌（PGPR）,用于烤烟漂浮育苗可明显提高种子发芽率、成苗素质和对烟草病害的抗性。     

Design and application of water-in-oil emulsions for use in lipstick formulations

The addition of water to lipsticks in the form of a water-in-oil emulsion is an attractive opportunity for cosmetics manufacturers to deliver hydrophilic molecules to the consumers, as well as improving the moisturizing properties. In this work, the effect of the emulsifier type and water content on the structural properties of the designed products was investigated. It has been shown that PGPR leads to smaller droplets than the other emulsifiers tested. This was attributed to the ability of PGPR to form elastic interfaces that slow the coalescence between droplets during the process. It was also observed that crystals of wax tend to form structures at the interface upon cooling that prevent coalescence during storage. These structures also prevent leakage of water into the continuous phase. No effect of the water content on the melting properties of the emulsions was observed. Upon addition of more than 10% water, softening of the material was measured, due to the overall decrease in solid content. Addition of crystalline material (hard paraffin) was successfully used to reinstate the material properties.     

Growth and mineral acquisition response of grapevine rootstocks (Vitis spp.) to inoculation with different strains of plant growth-promoting rhizobacteria (PGPR)

BACKGROUND: Effects of the plant growth‐promoting rhizobacteria (PGPR) strains Burkholderia gladii BA‐7, Bacillus subtilis OSU‐142, Bacillus megatorium M‐3 and Azospirillum brasilense Sp 245 on vegetative development and mineral uptake of 1103 P and 41 B grapevine rootstocks were investigated. The roots of nursery plants of the grapevine rootstocks were immersed in bacterial solutions and transplanted to a sterilised peat and perlite mixture in 5 L pots. Plants were cultivated in a semi‐controlled glasshouse during the vegetation period. RESULTS: Vegetative development of grapevine rootstocks was obviously promoted by bacterial inoculation, with the maximum increase induced by Sp 245. Inoculation with Sp 245 also significantly improved the chlorophyll concentrations of the leaves of the two rootstocks. Among the bacteria, OSU‐142 also significantly stimulated vegetative development and mineral acquisition of the plants. Nutrient contents of the leaf blades of the plants were generally higher than those of control plants. CONCLUSION: Overall investigations revealed that A. brasilense Sp 245 and B. subtilis OSU‐142 performed more efficiently than the other strains. Therefore these bacteria seem to have considerable potential in reducing the need for inorganic fertiliser. Copyright © 2012 Society of Chemical Industry     

Short communication: Lack of intramammary niche recolonization during a sanitation program for the contagious mastitis pathogen Staphylococcus aureus genotype B

In Switzerland, sanitation programs of dairy herds infected with the contagious mastitis pathogen Staphylococcus aureus genotype B (GTB) have been established for several years. In recent years, Streptococcus uberis and non-aureus staphylococci have emerged as the bacteria most frequently isolated from bovine milk samples. The latter cause subclinical mastitis, and some species are more persistent or pathogenic than others. The present study aimed to investigate the developments in the intramammary colonization spectrum of 5 dairy herds undergoing a sanitation program for Staph. aureus GTB. We collected single-quarter milk samples aseptically from all lactating cows at 3-mo intervals during the sanitation period; after classical bacteriological analysis, MALDI-TOF mass spectrometry was used to identify the isolates to the species level. Non-aureus staphylococci were found to be the bacterial group most frequently occurring on the selected farms, with Staphylococcus chromogenes and Staphylococcus xylosus being predominant. The present study demonstrated that GTB-infected cows treated with antibiotics lacked systematic recolonization with other bacteria during herd sanitation for the contagious Staph. aureus GTB.     

PGPR菌剂配合化肥减施对植烟土壤nosZ型细菌群落的影响

研究化肥减施情况下PGPR(plant growth promoting rhizobacteria)菌剂对植烟土壤反硝化作用的微生物调控机制,为植烟土壤科学施肥、培肥地力提供理论依据。本试验在四川攀枝花米易县的传统烤烟种植区通过化学分析和末端限制性长度多态性分析手段(T-RFLP)分别对PGPR菌剂配合化肥减肥处理下的植烟土壤理化性质及土壤nosZ型细菌群落组成和多样性进行研究。结果表明,与常规施肥相比,PGPR菌剂配合化肥减施的处理土壤pH和碱解氮含量显著提高,有机质、全氮含量提高但未达显著水平,部分处理速效磷、速效钾含量显著提高。PGPR菌剂配合化肥减施改变了nosZ型细菌的物种组成,Rhodobacter(红杆菌属)和Bacterium(杆菌属)为5个施肥处理共有的优势菌属,而Bradyrhizobium(慢生根瘤菌属)和Azospirillum(固氮螺菌属)仅为施用PGPR菌剂处理的优势菌。全量化肥配施PGPR菌剂处理下的Shannon多样性指数和均匀度显著低于其他处理,其他各处理细菌群落多样性之间无显著差异。冗余分析表明,土壤pH、有机质和速效钾是影响植烟土壤nosZ型细菌群落结构变化的主要因子。综上所述,PGPR菌剂配合化肥减施影响了土壤理化性质进而导致土壤nosZ型细菌群落结构组成发生改变。     

乳酸菌在肠道定植的影响因素及研究方法

乳酸菌是一类无芽孢的革兰氏阳性菌,能利用碳水化合物发酵产酸,其作为益生菌家族中重要的一员,具有调节肠道菌群平衡、参与免疫应答和抑制肠道病原菌的生长繁殖等多种益生功能。这些益生功能持续发挥作用的先决条件是乳酸菌能定植于肠道中,但到目前为止,乳酸菌在肠道定植的机制还并不清楚。本综述介绍了乳酸菌在肠道定植中的干扰因素（黏附能力、运动性、乳酸的分泌、与肠道菌群的作用、宿主基因与体征因素、胃酸与胆盐的耐受性以及饮食）,概述了乳酸菌肠道定植的研究方法（平板计数法、荧光标记、聚合酶链式反应以及新型纳米材料）,旨在加深对乳酸菌在肠道定植的认识,为进一步揭示乳酸菌定植肠道的机理提供参考。     

乳酸乳球菌NZ9000在小鼠体内的定植研究

将经分子探针cFDASE标记好的乳酸乳球菌以大约109个活菌给BALB/c小鼠灌胃口服,在之后的1、2、4、6、7d分别取小鼠的十二指肠、空肠、回肠和结肠各肠段,检测肠黏膜表面附着的cFDASE标记的乳酸乳球菌细胞数。结果表明,小鼠在口服乳酸菌后在肠道黏膜的不同部位乳酸乳球菌菌能够能够以一定的比例存活并附着在肠黏膜表面。在测定的第7天,存留在肠道黏膜表面的乳酸乳球菌数量在十二指肠、空肠、回肠和结肠分别占第1d的22.17%,33.29%,36.33%和35.76%。