豆瓣中产磷脂酶菌株的筛选及系统发育分析

以一级郫县豆瓣为原料筛选磷脂酶高产菌株,通过磷脂平板初筛和摇瓶复筛法,以磷脂酶水解圈作为筛选模型,并对产酶菌株进行了酶活力的检测及细菌16S rRNA系统发育分析。结果表明,从一级豆瓣中筛选出10株产磷脂酶菌株,其中产酶活力最高的为编号LZ8,酶活力为68.32 U/mL,经鉴定该菌株为Bacillus sonorensis,属于芽孢杆菌属,其与最高同源性菌株相似性为100%。     

Lactobacillus菌株的益生功能评价

本研究评价了分离自传统发酵乳制品中4株L．paracasei supsp．paracasei菌株在模拟胃、肠液中的存活性,在HT-29细胞上的粘附性,对致病菌的抑制能力,以及刺激外周血单核细胞（PBMCs）增殖的能力。其中菌株Lactobacillus paracasei supsp．paracasei M5AL、J23AL在模拟胃液存活率较高,而菌株Lactobacillus paracasei supsp．paracaseiGl5AL、T3AL在胃液中暴露3h即失去活性;4株菌在模拟肠液中存活率较高。菌株L．paracasei supsp．paracasei M5AL和G15AL在HT．29细胞上有较强粘附能力f〉40bacteria cells per 100HT-29cells）,并抑制病原微生物Ecoli ATCC25922、styphimurium ATCC14028、S.sonnei ATCC25931生长。4株菌活菌体刺激PBMCs增殖,具有潜在免疫调节功能。     

腌鱼中硝酸盐还原菌的筛选及系统发育分析

微生物作用是硝酸盐还原成亚硝酸盐的主要原因,而亚硝酸盐在一定条件下会合成强致癌物质——亚硝胺类化合物,存在潜在的食品安全问题。从浙江省特色腌制水产品腌鱼中分离形态颜色各异的菌株,应用硝酸盐还原实验快速筛选具有硝酸盐还原能力的菌株,进而对筛选的菌株进行形态观察、革兰氏染色、生理生化与分子生物学鉴定。最终筛选出有两株菌具有硝酸盐还原性,F-1菌株为Psychrobacter glacincola,F-2菌株为Psychrobacter faecalis。     

腌鱼中硝酸盐还原菌的筛选及系统发育分析

微生物作用是硝酸盐还原成亚硝酸盐的主要原因,而亚硝酸盐在一定条件下会合成强致癌物质——亚硝胺类化合物,存在潜在的食品安全问题。从浙江省特色腌制水产品腌鱼中分离形态颜色各异的菌株,应用硝酸盐还原实验快速筛选具有硝酸盐还原能力的菌株,进而对筛选的菌株进行形态观察、革兰氏染色、生理生化与分子生物学鉴定。最终筛选出有两株菌具有硝酸盐还原性,F-1菌株为Psychrobacter glacincola,F-2菌株为Psychrobacter faecalis。      

新鲜哈密瓜汁中可培养细菌的分离鉴定及系统发育分析

采用稀释平板法从新鲜哈密瓜汁中分离出48株可培养细菌,通过传统的形态特征鉴定,将其归为10个类群。利用细菌通用引物PCR扩增10个类群代表菌株的16S rRNA基因,并进行序列测定。将获得的序列通过Blast在GenBank数据库中搜索相关菌株的同源性序列,采用Clustal1.81软件比对,用Mega4.1软件构建系统发育树。系统发育分析结合表型特征研究表明,新鲜哈密瓜汁中可培养细菌以芽孢杆菌属为优势微生物类群,主要为枯草芽孢杆菌Bacillus sub-tilis,其次为地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis、苏云金芽孢杆菌Bacillus mojavensis。此外还有铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa、洋葱伯克霍尔德氏菌Burkholderia cepaciastrain、鲍曼不动杆菌Acinetobacter baumannii,以及肠球菌属Enterococcussp、克雷伯氏菌属Klebsiellasp的菌株。     

利用Lactobacillus casei Zhang开发益生菌新鲜干酪

通过添加不同比例Lactobacillus casei Zhang发酵剂制作新鲜干酪,并对其在新鲜干酪中的活力和添加Lactobacillus后新鲜干酪的理化性质进行了研究。结果表明,Lb.casei Zhang在新鲜干酪中具有较高的活力,添加2%、1%、0.5% Lb.casei Zhang发酵剂的干酪中,4℃冷藏开始前,Lb.casei Zhang活菌数分别为2.24×10~8 cfu/g,1.38×10~8 cfu/g,5.55×10~7 cfu/g,4℃冷藏28d后,Lb.casei Zhang存活率分别为99.12%,98.31%,98.61%。在制作过程中和4℃冷藏过程中,与空白组相比,添加Lb.casei Zhang对新鲜干酪的pH值、滴定酸度、蛋白水解活性影响都不显著(P>0.05)。     

虫草属真菌的ITS序列分析和系统发育研究

收集不同产地虫草属真菌,进行ITS(Internal Transcribed Spacer)区段克隆测序和序列特征比较分析,并对ITS序列进行核酸序列数据库GenBank同源性检索比对,并与检索获得的7个最相似物种的ITS序列构建系统发育树.结果表明,虫草属真菌的ITS序列长度为570～576bp,GC含量56.29～56.77%,系统发育分析显示,供试菌株中除C-6与九州虫草高度同源外,其他与蛹虫草均具有高度的亲缘关系.     

南极磷虾中产抗菌活性物质菌株的筛选及系统发育分析

分别以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 27661(Sa 27661)和大肠杆菌Escherichia coli ATCC 35218(Ec 35218)为指示菌,以南极磷虾中分离出的59株菌为测试菌,利用牛津杯法进行抗菌活性菌株的初筛及复筛,同时用比浊测定法和牛津杯法对活性菌株的部分特性包括生长曲线、抗菌曲线、最佳温度、最佳p H、最佳盐度进行了测定,以Mega 5邻接法对其16S r RNA基因序列及系统发育地位进行探究。结果发现,初筛获得13株菌对Sa 27661具有抗菌活性,6株菌对Ec 35218具有抗菌活性。复筛得到对Sa 27661和Ec 35218均具有明显抗菌活性的菌株3株,阳性率为5.08%,其编号分别为1A3、A4、1A5。且3株菌分别培养16、20、28 h进入生长对数期,培养36、48、60 h达到稳定期。分别培养56、64、72 h时抗菌活性达到最高,之后基本达到稳定。最佳温度分别为15、20、20℃,最佳p H分别为7、6、6,最佳盐度分别为1%、3%、2%。系统发育分析结果表明,菌株A4、1A5,均属于嗜冷杆菌属Psychrobacter,菌株1A5与已注册的菌株(Psychrobacter sp.OK1)基因序列相似性可达100%。而菌株1A3与不可培养嗜冷杆菌属(Uncultured Psychrobacter)同源性为97%。三株菌均具有较好的耐酸性、耐碱性和耐盐性的能力,同时具有较好的抗菌活性。      

云南重楼内生细菌的分离鉴定及系统发育树分析

利用云南文山采集的人工栽培和野生云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis(Franch)根茎,对其内生细菌进行了分离、纯化及鉴定。分离得到40和44株云南重楼内生细菌。经16S rDNA测序,在NCBI中比对,MEGA4建系统进化树,所得内生细菌分别鉴定为分属于6和8个属。其中,人工栽培云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和肠杆菌属(Enterobacter)分离频率分别为35%、27.5%,是其优势内生细菌群;野生云南重楼内生细菌中,芽孢杆菌属(Bacillus)和克雷伯氏菌属(Klebsiella)分离频率分别为36.4%、20.4%,是其优势内生细菌群。本研究结果体现了人工栽培和野生云南重楼内生细菌分布的差异及云南重楼根中内生细菌的多样性,也为后续重楼内生菌的多样性开发提供了理论和实验基础。     

Lactobacillus kefiranofaciens发酵生产Kefiran多糖的初步研究

研究了发酵条件(温度、起始pH、接种量等)对乳酸菌Lactobacillus kefiranofaciens发酵产Kefiran多糖的影响,并对菌体的形态及发酵特性进行了研究。研究结果表明,菌体形态在生长期间会发生改变,为短杆状-链杆状-短杆状;胞外多糖是从菌体生长期开始合成的;接种量为10%、起始pH为5.3、培养温度为25℃时有利于多糖的合成;CaCO3、Tween80和NaCl的添加量分别为1.2%、4%和0.25%时,胞外多糖的产量可达1.50g/L。     

植物乳杆菌及其近缘种部分看家基因的系统发育分析

本文研究了16S rRNA基因、pheS和pyr G部分基因序列对Lactobacillus plantarum(L.plantarum)及其近缘种的区分能力,采用分离自酸面团、酸牛奶和泡菜中的10株L.plantarum为研究对象,以其看家基因pheS和pyr G部分基因序列作为分子标记,结合已上传至Gene Bank的近缘种的相应序列构建系统发育树并与以16S rRNA基因构建的系统发育树进行比较。结果表明:基于16S rRNA基因序列不能区分L.plantarum及其近缘种,而看家基因pheS和pyr G部分基因序列能够很好的区分植物乳杆菌种及其近缘种,其中,pheS在植物乳杆菌种内分型时相较于pyr G基因效果更好,以及将pheS和pyr G部分基因序列串联使用后,试验菌株与参考菌株的分类关系更加明晰,因此,联合基因(pheS-pyr G)可作为16S rRNA基因的辅助工具用于L.plantarum及近缘种和植物乳杆菌种内分型的快速分类鉴定。     

香蕉植株上乳酸菌的分离鉴定、系统发育及抑菌特性分析

为分析香蕉（Musa nana Lour.）植株上乳酸菌的多样性,扩大植物源乳酸菌菌种库,并为今后的青贮饲料发酵业和食品发酵工业等提供植物源乳酸菌,本研究运用经典乳酸菌筛选法与分子生物学相结合方法从香蕉植株上分离纯化乳酸菌,并对其进行生理生化实验、生长速率测定实验和产酸速率测定实验;根据以上实验结果选出代表性菌株,对其进行测序、同源性分析和系统发育树的构建;利用其发酵产物对大肠杆菌（Escherichia coli）、沙门菌（Salmonella）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）和单核细胞性李斯特菌（Listeria monocytogenes）等食品中常见的致病菌进行抑菌实验。结果表明：从香蕉植株上6?个部位共筛出44?株乳酸菌疑似菌株,5?株代表性菌株中有3?株（WFr6-4、WSt6-4、WL7-3）为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,1?株（WFl5-3）为戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）,1 株（WR7-1）为酪黄肠球菌（Enterococcus casseliflavus）。代表菌株都能够明显抑制致病菌,其中WL7-3抑菌效果最好。由此可见,在香蕉植株上乳杆菌属为优势菌种,乳酸菌种类较为多样,而且抑菌效果较好。     

泡菜与乳酸菌

文中论述了国内外泡菜生产发展概况,乳酸菌在泡菜生产中作用机理及其影响因素,泡菜乳酸菌的纯种分离及应用效果,以及泡菜生产的发展前景。     

葡萄酒中植物乳杆菌的鉴定及其耐受性分析

本论文对4株分离自甘肃、宁夏产区葡萄酒中的乳杆菌进行鉴定并通过调整改良MRS培养基分析植物乳杆菌对酒精浓度、pH和SO2浓度的耐受性.结果表明:16S rDNA鉴定得到3株植物乳杆菌,在单一因素影响下,3株菌在pH 3.0条件下有良好生长,在16％vol酒精浓度可生长,110mg/L SO2浓度下可生长.在综合因素影响...     

瑞士乳杆菌和嗜酸乳杆菌的益生免疫特性的研究

以瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1、KLDS AD2为研究对象,详细研究了它们对体外模拟人工胃肠道的耐受性,并评估了三株乳杆菌对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,初步探讨了三株乳杆菌的免疫活性。结果表明,三株乳杆菌对人工胃液、人工肠液、胆汁盐环境具有很好的耐受性,瑞士乳杆菌KLDS 1.8701和嗜酸乳杆菌KLDS AD1较强于嗜酸乳杆菌KLDS AD2。乳杆菌对脾淋巴细胞增殖活性的作用表现出明显的量效关系,活菌数为107CFU/mL时,对脾淋巴细胞活性影响大小为KLDS AD1>KLDS 1.8701>KLDS AD2;KLDS 1.8701对脾淋巴细胞的增殖具有很好的促进作用,只有当KLDS AD1的活菌数达到107CFU/mL时才具有促进作用,而KLDS AD2没有促进作用。      

乳酸杆菌糖酵解途径中关键酶基因的比较分析

通过比较乳酸杆菌属(Lactobacillus)中63株不同种的菌株的糖酵解途径中葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose-6-phosphate isomerase,PGI)(EC 5.3.1.9)、磷酸丙糖异构酶(Triose-phosphate isomerase,TPI)(EC 5.3.1.1)、磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycerate mutase,PGM)(EC 5.4.2.1)和丙酮酸激酶(Pyruvate kinase,PYK)(EC 2.7.1.40)等关键酶基因的序列,构建这些菌株的系统发育关系,并与这些菌株的16S rDNA序列的系统发育关系进行比较,从而揭示糖酵解代谢途径的进化。     

酸马奶中乳酸菌的分离及耐环丙沙星的研究

对从内蒙古锡林郭勒盟牧区采集的牧民自制的酸马奶样品中分离到的8株乳酸菌进行了耐药性研究,并确定了环丙沙星溶液对8株乳酸菌的最低抑菌浓度。     

植物乳杆菌的降胆固研究

对植物乳杆菌MA2的体外和体内降胆固醇活性进行了研究,结果显示:培养基中添加的胆固醇的初始浓度对植物乳杆菌MA2的胆固醇去除率影响显著,当胆固醇的终质量浓度为30mg/dL,不添加胆盐的条件下,菌株MA2的胆固醇去除率达到(55±4.5)%。死菌体和休眠菌体也可去除培养基中的胆固醇,且菌体细胞浓度的影响显著。添加胆盐对菌株MA2的胆固醇去除率影响显著。体外实验表明植物乳杆菌MA2通过吸附胆固醇,进而将胆固醇吸入菌体细胞中来降低培养基中的胆固醇。MA2菌株可显著降低大鼠血清总胆固醇、甘油三酯的水平,表明其作为降血脂的益生菌的应用潜力。     

嗜酸乳杆菌的表面疏水性分析

对嗜酸乳杆菌的表面疏水性进行分析。利用微生物粘着碳氢化合物法测定嗜酸乳杆菌的表面疏水率,通过采用不同环境条件和胰蛋白酶处理菌体细胞表面,初步确定嗜酸乳杆菌表面疏水性的影响因素。结果表明,影响菌体表面疏水性的因素有时间、温度、pH值、浓度、Ca2+和胰蛋白酶,菌体表面疏水性具有时间、温度、pH值和浓度依赖性,Ca2+和胰蛋白酶对其有一定作用,且表面疏水性与黏附能力之间存在着相关性;此外,推测能够介导嗜酸乳杆菌表面疏水性的某些物质可能是一类蛋白质。     

两株乳酸菌发酵上清液对E.coli作用分析及培养条件优化

以植物乳杆菌和保加利亚乳杆菌为研究对象,以大肠杆菌为指示菌,通过琼脂扩散法首先分析植物乳酸杆菌和保加利亚乳酸杆菌的发酵上清液对大肠杆菌的抑菌活性差异,然后再观察不同培养温度、葡萄糖浓度、pH和培养时间对植物乳杆菌发酵上清液抑菌效果的影响。结果显示,植物乳杆菌在35℃,8%葡萄糖,pH为9时,发酵上清液抑菌效果较好。经过正交优化实验得出最佳条件组合为:培养温度35℃,培养基pH7,葡萄糖浓度8%,培养时间36h,抑菌圈直径为(1.451±0.016)cm。研究还发现,保加利亚乳杆菌发酵上清液对大肠杆菌无抑制作用。