两组天麻提取物的制备及对灰树花发酵的影响

在灰树花深层发酵体系中,分别添加两组天麻的醇提液,分析其对灰树花菌体生长和胞外多糖(Extracellular Polysaccharide,EPS)合成的影响,利用HPLC测定两组天麻醇提液中天麻素的含量。结果显示,两组天麻醇提液的添加体积浓度在4%时均能显著促进灰树花菌体的生长和胞外多糖(EPS)的产量(p<0.05),然而试验组2的天麻醇提液对灰树花细胞生长和胞外多糖的促进作用优于试验组1。天麻素含量的测定显示,试验组2的天麻醇提液中的天麻素含量是试验组1的1.33倍。研究表明,不同加工条件的天麻,所制得的天麻醇提液对灰树花菌体生长和胞外多糖的影响效果差异显著,说明天麻制品的制作方法不同,将得到不同的使用效果。     

天麻提取物对灰树花深层发酵胞外蛋白合成的影响

在灰树花深层发酵系统中加入天麻提取物,以灰树花生物量和胞外蛋白合成量为指标,对天麻提取物添加量进行优选;利用HPLC对天麻提取物成分进行分析,研究天麻提取物灭菌前后主要成分(天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛及巴利森甙)含量的变化,并研究其促进灰树花生物量和胞外蛋白合成的关键成分在灰树花发酵体系中的含量变化。结果发现,7%(体积分数)天麻提取物可以促进灰树花菌丝体生长和胞外蛋白的合成,生物量和胞外蛋白合成量在发酵第11天时达到最大值;在天麻提取物灭菌后,巴利森甙含量明显减少,天麻素含量明显增加;天麻提取物加入灰树花发酵体系14d后,天麻素、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛含量均降低,但巴利森甙含量增加了161.11%。     

对羟基苯甲醛等3 种天麻成分对灰树花胞外多糖生物合成的影响

在灰树花液体发酵体系中,分别添加不同量的天麻素、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛3 种天麻成分,分析这3 种成分对灰树花菌体生长和胞外多糖（exopolysaccharide,EPS）合成的影响,采用苯酚-硫酸法测定胞外多糖含量。结果表明：适宜质量浓度的这3 种天麻成分均能促进灰树花菌体生长和胞外多糖的生物合成,其中对羟基苯甲醛添加量为0.15 g/L时效果最佳,并且略低于体积分数7%天麻醇提取物。动态分析0.15 g/L对羟基苯甲醛和7%天麻醇提取物对灰树花EPS合成促进作用的结果表明：在整个发酵过程中,二者促进灰树花EPS生物合成的效果基本一样,并且从发酵第7天开始,二者的EPS产量均显著高于空白组（P＜0.05）。采用高效液相色谱法动态测定发酵期间对羟基苯甲醛含量变化,结果表明：在发酵的第5天,对羟基苯甲醛基本被完全吸收,而此时灰树花EPS开始大量积累。因此,灰树花可利用对羟基苯甲醛来促进EPS的生物合成。     

天麻和苦荞复配液对灰树花胞外多糖合成的影响及其发酵动力学研究

通过向灰树花发酵体系中单一添加天麻醇提物、苦荞醇提物及两种提取物的复配液,研究其对灰树花菌体生长和胞外多糖合成的影响,同时对添加复配液后发酵体系中的残糖(还原糖)含量、pH值的动态变化进行研究。结果表明:当复配液中天麻醇提物添加量为7 g/L、苦荞醇提物添加量为5 g/L时效果较佳,相比空白组(未添加提取物)和单一添加组(天麻、苦荞),胞外多糖产量分别增加了49.08%、13.76%、33.88%,菌丝体生物量分别增加了51.10%、11.35%、26.69%,均显著地高于空白组(P<0.01)和单一添加组(P<0.05)。发酵动力学研究表明,灰树花菌体生长和胞外多糖产量在第7天达到峰值,复配组相对于空白组能消耗更多的碳源物质促进胞外多糖的合成。因此,天麻和苦荞中的有效成分能够显著促进灰树花菌体生长与胞外多糖的合成。     

太子参乙醇提取物对灰树花菌体生长及胞外多糖的影响机理初步研究

为探讨太子参乙醇提取物参与灰树花发酵及其促胞外多糖增加的机理。本试验开展太子参乙醇提取物对灰树花生物量、胞外多糖的影响研究;动态分析灰树花发酵期间多糖合成关键酶活性的变化,同时,从氧化应激角度探讨太子参乙醇提取物的添加对菌丝体生长及胞外多糖的影响。试验表明：太子参85%乙醇提取物添加量为9 g/L,发酵7 d,生物量和胞外多糖含量均达到峰值(P<0.01),与未添加太子参乙醇提取物的相比,分别增加了53.20%和50.71%;动态分析灰树花多糖合成关键酶的变化,发现在灰树花发酵体系中添加太子参85%乙醇提取物后,发酵7d,灰树花胞内磷酸葡萄糖变位酶(PGM)、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶(UDPG)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)活性达到最高,与未添加太子参乙醇提取物相比,PGM、UDPG活性分别提高9.44%、18.57%,GPI活性降低19.46%(P<0.05);添加太子参乙醇提取物的灰树花胞内活性氧水平(ROS)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H₂O₂)含量变高,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、过氧化氢酶...     

天麻提取物及其3 种主要成分对灰树花产胞外漆酶和菌丝体的影响

以天麻提取物为外源添加物,加至灰树花液体深层发酵体系中,通过外源诱导实验,考察天麻提取物对灰树花液体发酵产菌丝体及胞外漆酶的影响,并进一步重点研究起显著影响作用的关键成分。研究表明,天麻提取物及单一成分天麻素（gastrodin,GA）、对羟基苯甲醛（p-hydroxylbenzaldehyde,HBA）、对羟基苯甲醇（p-hydroxybenzyl alcohol,HA）均对灰树花菌丝体和胞外漆酶活力有显著的促进作用。结果显示,当添加3?g/L的天麻醇提物时,对灰树花菌丝体生物量和胞外漆酶活力有最大的促进作用,与对照组相比,分别提高了1.62?倍和7.41?倍（P＜0.05）。同时,利用高效液相色谱对3?g/L天麻醇提物中的GA、HBA、HA含量进行分析,以相应量添加到灰树花发酵体系中。结果表明,HA和HBA均能显著提高灰树花漆酶活力和菌丝体生物量,与添加3?g/L天麻醇提物实验组相比,添加HA使酶活力提高10.25%,生物量增加9.17%。本研究可为中药提取物及成分促进真菌生长和产漆酶提供理论依据。     

对羟基苯甲醇对灰树花产胞外多糖的影响及其发酵动力学

通过向灰树花发酵液中添加不同质量浓度梯度的对羟基苯甲醇,分析其对灰树花菌体生长和胞外多糖合成的影响,并且进一步研究了添加对羟基苯甲醇后发酵液中菌丝体生长、残糖（还原糖）含量、胞外多糖产量、pH值、对羟基苯甲醇和天麻素含量的变化情况,并做动力学分析。结果表明：当对羟基苯甲醇添加量为200 mg/L时效果最佳,相比于空白组（未添加对羟基苯甲醇）使菌丝体生物量提高了22.73%,胞外多糖产量提高了10.24%,均显著高于空白组（P＜0.05）。动力学研究结果表明：在整个发酵过程中,灰树花生长从第8天趋于稳定,葡萄糖作为碳源不断被消耗并且胞外多糖逐渐合成,到第10天二者趋于稳定。此外,对羟基苯甲醇含量减少,部分转化为天麻素。     

天麻醇提物对灰树花发酵菌丝体多糖及β-葡聚糖合成量的影响

在灰树花液体深层发酵体系中添加天麻醇提物,考察天麻醇提物对灰树花发酵菌丝体生物量、菌丝体多糖及β-葡聚糖含量的影响,并进一步研究起显著促进作用的关键特征成分;同时,采用高效液相色谱法对7 g/L天麻醇提物中的特征成分进行定量分析,研究了对灰树花菌丝体生物量、菌丝体多糖及β-葡聚糖起促进作用的关键特征成分及优化添加量。结果表明,适当浓度的天麻醇提物能够显著提高灰树花菌丝体生物量、菌丝体多糖及β-葡聚糖的含量,在其质量浓度为7g/L时,菌丝体干重、菌丝体多糖及β-葡聚糖含量均达到最大值,分别为1.708 g/L、5. 974%和2. 055 mg/g,与不添加天麻醇提物相比分别增加了0. 36、1. 29和1. 44倍(P<0. 05)。天麻醇提物中的特征成分分别为天麻素5. 837 5 mg/g,对羟基苯甲醇1.107 2 mg/g,对羟基苯甲醛0.660 1 mg/g,对灰树花菌丝体生物量、菌丝体多糖及β-葡聚糖起促进作用的关键特征成分均为对羟基苯甲醛,其.优化添加量分别为100、250、150 mg/L。     

天麻影响灰树花深层发酵产胞外多糖的动力学模型及应用

灰树花多糖是灰树花中最具生物活性的成分之一,通过在灰树花发酵体系中添加一定量的天麻,可以提高灰树花胞外多糖（exopolysaccharides,EPS）的产量。基于Logistic和Luedeking-Piret方程,采用MATLAB软件分别得到了天麻醇提液浓度为7%（v/v）时,灰树花菌体生长、EPS合成、基质消耗的动力学模型和模型参数。结果表明模型与实验数据能较好地拟合,基本上反映了天麻醇提液浓度为7%（v/v）时,灰树花发酵产胞外多糖过程的动力学特征。     

灰树花发酵过程天麻成分变化的HPLC检测方法研究

建立HPLC方法对天麻醇提取物成分及灰树花发酵液进行分析.色谱柱为Agilent TC-C18(4.6mm×250mm,5μm),流动相为A:0.1％磷酸水和B:乙腈,以梯度洗脱:0min～35min,B:3％～30％(V/V);35min～45min,B:30％～70％ (Ⅴ/Ⅴ).流速1mL/min,柱温30℃,检测波长221nm.在此条件下,天麻提取液及灰树花发酵液中3种己确定的天麻成分具有良好的分离度,且线性关系良好;精密度高(RSD＜5％);回收率在96％～102％之间,同时检测到经过6d发酵后发酵液中天麻素、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛质量浓度与发酵第0d相比分别下降了46.38％、11.85％和36.75％.该方法可以用于灰树花发酵过程中天麻成分变化情况的跟踪检测,为进一步探明天麻成分与灰树花代谢相互作用打下基础,同时也初步探明了灰树花对于天麻成分的利用情况.     

新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量及影响因素分析

目的: 探究新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量的影响因素。方法: 本研究优化了新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量测定的前处理方法和色谱条件,样品经匀浆、87%乙醇混匀、超声提取、离心、氮吹结合水浴浓缩,过0.45 μm滤膜后,在220 nm波长下,采用C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）、以乙腈-0.05%磷酸水溶液（3:97,V/V）为流动相进行等度洗脱,流速1.0 mL·min-1,柱温25℃,通过高效液相色谱法（HPLC）对遵义市汇川区采集的不同等级大小、不同产地以及不同栽培方式的72份新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量进行分析测定。结果: 方法学验证结果表明,在3个加标浓度下,天麻素、对羟基苯甲醇2种成分在相应范围内线性关系良好,R2>0.9999,回收率在81.20%~107.30%之间,RSD<5%,得到所测72份样品中天麻素与对羟基苯甲醇总含量范围为0.262%~1.150%。本研究使用的鲜天麻前处理制样方法简便、快速且提取效果良好,分析检测方法具有良好的精密度、重现性和分离效果,适用于新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量的研究分析。通过进一步分析不同等级大小、不同产地以及不同栽培方式对新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量影响,结果表明鲜天麻的质量等级越大,天麻素与对羟基苯甲醇总含量越高;由于各天麻种植基地所在的海拔高低、环境植被种类、地理位置、光照等存在差异,且每个种植基地林下种植天麻的发展时间有所不同,因此,不同产地的鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量也存在显著差异;而对不同栽培方式的鲜天麻进行比较分析,发现有性繁殖优于无性繁殖。结论: 汇川区不同产地、不同栽培方式及不同等级大小的新鲜天麻中天麻素与对羟基苯甲醇含量的影响具有一定的差异性。     

天麻、苦荞醇提物对灰树花胞外多糖合成酶类的影响及天麻苦荞醇提物复配发酵液的抗疲劳作用

该实验探究了天麻（Gastrodin elata Bl.）、苦荞（Tartary Buckwheat）醇提物的添加对灰树花（Grifola frondosa）胞外多糖（Exopolysaccharide,EPS）合成过程中磷酸葡萄糖变位酶（Phosphogluconate Mutase,PGM）、UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose Pyrophosphorylase,UGPase）和磷酸葡萄糖异构酶（Phosphogluconate Isomerase,GPI）三种关键酶的影响。并以此为前提,采用动物实验进一步探究灰树花发酵液的抗疲劳作用。结果表明：天麻、苦荞醇提物的复配添加可显著增强PGM和UGPase的活力,降低GPI的活力,与空白组相比PGM和UGPase的活力分别增加了86.98%和69.12%,GPI的活力降低了65.78%。此外,其复配发酵液在抗疲劳作用方面表现最佳,显著高于空白组（p<0.05）和实验组（p<0.05）。主要在提高小鼠游泳力竭时间、肝糖原（Hepatic Glycogen,HG）和乳酸脱氢酶（Lactate Dehydrogenase,LDH）含量,降低乳酸（Lactic Acid,LA）和尿素氮（Blood Urea Nitrogen,BUN）含量几个方面体现。研究表明复配液的添加可显著改变灰树花EPS合成途径中关键酶类的活力,从而提升发酵液中EPS的含量,使其具有良好的抗疲劳作用。     

莲花菌菌株Sd的液态发酵特性研究

莲花菌是一种珍贵的药、食两用真菌。目前,国内外对于莲花菌的研究多以固态栽培及其多糖的提取为主,而不受自然气候等条件限制的可大规模工业化生产的莲花菌液态深层发酵技术国内外还未见有成功的报道。本研究采用固态栽培上广泛使用的莲花菌菌株Sd,用8L全自动机械通风搅拌发酵罐探讨其液态深层培养特性,并结合发酵生产实际施行了中间补料动态调控,通过观测和综合分析其pH、残糖浓度、溶氧及菌丝量的动态变化过程,可以确定菌株Sd的发酵前40h为发酵的适应期对数生长期在接种后94～104h之间,104～200h之间为稳定期;200h后菌丝开始自溶,处于衰落期,应该放罐。此结果对于指导莲花菌菌株Sd的发酵生产具有重要意义,也将为莲花菌的生理生化及遗传特性的研究奠定基础。     

鲜天麻采后生理品质变化规律及病原菌鉴定的研究

以大方乌天麻为试材,测定其17个生理品质指标(硬度、呼吸强度、含水量、色差外、色差内、可溶性固形物、蛋白质、多糖、天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、SOD、PPO、POD、CAT、APX)的变化规律,鉴定了天麻贮藏期的病原菌,并对各项生理品质指标进行相关性分析和主成分分析。结果表明:在贮藏期30 d时,低温(1±0.5)℃贮藏天麻的多糖、天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛分别为241.36 mg·g-1,632.46、76.48、186.82、6.07 μg·g-1,而常温(25±0.5)℃贮藏天麻的多糖、天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛分别为225.28 mg·g-1,603.32、71.32、173.32、5.32 μg·g-1。所以,低温(1±0.5)℃能够延缓鲜天麻采后的生理品质变化,建议天麻冷藏温度为0~1℃,天麻呼吸类型为跃变型呼吸。天麻贮藏期主要的病原菌为新壳梭孢菌(Neofusicoccum sp.)、间座壳属(Diaporthe sp.)、链格孢属(Alternaria sp.)和镰刀菌属(Fusarium sp.)。相关性分析表明,鲜天麻采后生理品质均呈现良好的相关性,并且天麻的营养指标(天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛)相互之间均呈现极显著正相关(P<0.01)。另外,通过主成分分析建立了天麻17个生理品质的综合评价函数,用于对天麻贮藏品质变化进行评价。     

天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒的调配酒初探

为开发一种含有天麻素的调配酒,采用固态白酒浸泡的方式提取天麻素得到天麻提取液,并利用剩余天麻渣进行液态发酵酿酒,将天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒按一定比例调配得到一种新型的天麻调配酒。采用单因素及正交试验确定天麻素最佳提取条件,并探究不同调配比例对酒感官的影响。试验结果表明:提取天麻素的最佳条件为提取温度100℃、固液比1:15、提取时间60 min;在液态发酵阶段,添加天麻渣可以提高酒液的酒精度发酵速率,且最佳添加量为8%;天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒的调配比例为1:3,其感官总评分为99分,所得调配酒清亮透明且无悬浮物、香气纯正且有轻微天麻药香、口感酣厚且回味持久。最终证实了利用天麻提取酒液与天麻渣液态发酵酒开发调配酒具有一定的可行性。     

天麻中香草醇对灰树花菌丝体生物量和胞外多糖合成的影响

目的 探讨高血压亚急症患者循环内皮祖细胞(EPC)功能的改变以及一氧化氮(NO)、肱动脉血流介导的内皮依赖性舒张功能(FMD)与EPC功能的关系。方法 招募高血压亚急症患者13例,血压正常者20例(对照组),取外周血提取原代EPC培养后以Transwell小室和CCK-8法评估EPC的迁移、黏附和增殖能力,通过检测FMD、血浆和EPC分泌的NO、粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素6(IL-6)水平评估血管内皮功能。结果 高血压亚急症组与对照组相比,EPC细胞功能(包括迁移、增殖和黏附能力)明显下降(P＜0.05);血浆及EPC分泌的NO水平有明显差异(P＜0.05);血浆及EPC分泌NO水平均与EPC迁移、黏附和增殖能力呈明显的线性关系(P＜0.05);FMD与EPC迁移、黏附和增殖能力具有明显相关性(P＜0.05)。两组血浆和EPC分泌的GM-CSF、VEGF、IL-6水平均无明显差异(P＞0.05)。结论 相对血压正常者,高血压亚急症人群的EPC功能(迁移、黏附和增殖)明显下降,且NO水平和FMD均与EPC功能正相关。     

天麻水提物活性成分分析及其抗氧化活性

目的:测定天麻水提物中营养成分含量及其抗氧化活性。方法:采集湿天麻,炮制后烘干粉碎,热水回流提取,脱色,冷冻干燥得到天麻水提物干粉,进而测定天麻水提物中水分、灰分、淀粉、粗蛋白、粗脂肪、总多糖、碳水化合物、总多酚、总黄酮、原花青素和天麻素等成分含量,并通过4种方法评价了天麻水提物的抗氧化活性。结果:天麻水提物中水分、灰分、淀粉、粗蛋白、粗脂肪、总多糖和碳水化合物的含量分别是4.60、1.55、40.30、9.21、4.01、38.24、79.80 g/100 g,矿物质中钾元素的含量最高,为25477.45 mg/kg;天麻水提物中总多酚、总黄酮和原青花素含量分别为17.0、9.0、3.3 mg/g,天麻素和对羟基苯甲醇的含量为2.87%和0.64%。通过超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)检测到7种多酚成分,其中荭草素的含量最高,为161.96 mg/100 g。天麻水提物具有一定的还原能力和对自由基的清除能力,且随着提取物浓度的升高,其还原力和对自由基的清除能力以剂量依赖性方式增强。在实验范围内其最大浓度的抗氧化活性最强,其中天麻水提物浓度为0.2、10、1、0.1 mg/mL时,总还原力、DPPH·清除率、OH·清除率、O₂-·清除分别达到1.05、90%、76%和58%。结论:天麻水提物具有较高的营养价值和一定的抗氧化活性,开发和应用前景广阔。