鞣花酸对人肺癌A549细胞的作用研究

目的:研究鞣花酸对人肺癌A549细胞的抑制作用。方法:通过不同药物浓度以及不同作用时间,以MTT以及LDH为观察指标,并以形态学观察,评价鞣花酸对A549细胞的作用效果。结果:在鞣花酸浓度在10~80μg·m L~(-1)内,对人肺癌A549细胞有明显抑制作用,且在作用时间在48 h时,作用较明显;当鞣花酸浓度超过40μg·m L~(-1),其杀伤作用明显;在一定范围内,其作用效果跟药物的作用时间呈正相关。结论:鞣花酸对人肺癌A549细胞有明显的抑制作用。     

表面活性剂对鞣花酸的增溶及其抗氧化性能研究

主要研究了4种吐温系列非离子表面活性剂对鞣花酸的增溶作用,其中以Tween-20的增溶效果最好。随Tween-20溶液浓度的增大,鞣花酸增溶量逐渐增大,但Tween-20溶液浓度达到10.00 g/L以上时,鞣花酸增溶量则呈现逐渐下降的趋势。35℃时鞣花酸在10.00 g/L的Tween-20溶液中的增溶浓度达到238.59 mg/L,比鞣花酸饱和水溶液浓度(10.12 mg/L)大了近24倍。随着温度的提高,鞣花酸在Tween-20溶液中的增溶量也略有升高。鞣花酸Tween-20增溶体系对ABTS·和DPPH·的清除率IC₅₀分别为0.31 mg/L和0.92 mg/L,而Vc对ABTS·和DPPH·的清除率IC₅₀则为3.32 mg/L和2.40 mg/L。结果表明在表面活性剂的作用下,大幅提高了鞣花酸的增溶量,而且同时保持了鞣花酸优异的抗氧化性能。通过粒径分析和透射电镜实物验证,鞣花酸Tween-20增溶体系的平均粒径为(272.5±3.62)nm。     

HPLC法同时测定石榴皮中4种多酚类成分的含量

建立同时测定石榴皮中没食子酸、石榴皮鞣素、安石榴苷和鞣花酸的含量的高效液相色谱法。方法:色谱柱为Thermo ODS-2 Hypersil柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液梯度洗脱,流速为1.0 m L·min-1,检测波长为272 nm,柱温为室温。结果表明:没食子酸在2.448~19.58μg·m L~(-1)(r=0.9998)的浓度范围内、石榴皮鞣素在20.80~166.4μg·m L~(-1)(r=0.9998)的浓度范围内、安石榴苷在80.00~640.0μg·m L~(-1)(r=0.9997)的浓度范围内,鞣花酸在40.10~320.8μg·m L~(-1)(r=0.9995)的浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为99.8%、100.1%、99.5%、和99.9%,RSD分别为0.87%、1.2%、1.2%和1.3%。本文所建立方法快速准确,专属性强,重复性好,可为全面控制石榴皮质量提供依据。     

人参皂苷Rh2诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的研究人参皂苷Rh2(G-Rh2)对人胃癌细胞SGC-7901的影响。方法采用MTT法检测G-Rh2对SGC-7901细胞存活率的影响;流式细胞分析法检测凋亡小体的含量;免疫印迹技术及体外Caspase-3/-7活力测定方法检测Caspase的激活状态。结果G-Rh2对SGC-7901细胞生长有明显的抑制作用,且呈量-效关系,IC50为9.3μg/ml。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞24h,凋亡细胞数量为6.97%。7.5μg/mlG-Rh2作用SGC-7901细胞20h,出现多聚(ADP-核糖)聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]断裂,Caspase-3/-7活力开始出现,并随作用时间的延长而增强。结论G-Rh2诱导Caspase参与SGC-7901细胞凋亡。     

MMP-2反义寡核苷酸对人胃癌SGC7901细胞增殖和侵袭能力的影响

目的研究基质金属蛋白酶-2(MMP-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将不同浓度的硫代磷酸化修饰的MMP-2ASODN转染入人中低分化胃腺癌SGC7901细胞株,RT-PCR法检测细胞MMP-2基因mRNA的转录水平;Transwell试验检测细胞体外迁移和侵袭能力变化;MTT法检测细胞的增殖活性。结果转染MMP-2ASODN后,SGC7901细胞中MMP-2基因mRNA的转录水平显著降低,细胞的体外迁移和侵袭能力受到抑制,且抑制作用随ASODN浓度的增加而增强;而细胞的增殖活性无明显变化。结论MMP-2ASODN可抑制胃腺癌SGC7901细胞MMP-2基因mRNA的转录水平及细胞的体外迁移和侵袭能力,但与胃癌细胞的增殖活性无明显相关性。     

鞣花酸pH敏感载药微球的释放规律研究

以天然高分子材料为基材,制备了具有pH敏感性的鞣花酸复合微球。考察了微球的形态,测定了微球的载药量、包封率和在不同pH介质中的释放规律。结果表明,鞣花酸复合微球呈球形,表面有褶皱;对浓度为4 g/L的鞣花酸分散体系,载药量为14.36%,包封率为86.16%;微球在不同pH介质溶液中鞣花酸的释放有明显差异,在较强酸性环境中鞣花酸释放率很低,随pH值的升高,鞣花酸的释放略有增加;在偏碱性环境中,鞣花酸的释放得到较大程度的提高,而在人工肠液中24 h累计释放率则达到90.45%。     

神经生长因子对乙型脑炎病毒感染BHK-21细胞的抑制作用

目的观察神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染地鼠肾细胞BHK-21的抑制作用。方法将不同浓度的NGF(100、50、25、12.5、6.3、3.1、1.6和0.8μg/L)加入BHK-21细胞中,采用MTT法检测NGF对BHK-21细胞的毒性作用;将不同稀释度的JEV(10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7)JEV感染BHK-21细胞,蚀斑计数法测定病毒滴度;在JEV感染的BHK-21细胞中加入不同浓度的NGF,观察细胞的CPE情况,并通过蚀斑减少率分析NGF对JEV的抑制作用。结果 NGF浓度在100μg/L以内对BHK-21细胞无毒性;JEV的滴度为Lg 8.70 pfu/ml;NGF(12.5μg/L)+JEV组BHK-21细胞病变程度明显减轻;随着NGF浓度的提高,蚀斑减少率也呈升高趋势(r=0.929,P<0.05),NGF浓度为3.1μg/L以上时,蚀斑减少率达10%以上,具有明显的抗JEV效果。结论 NGF在浓度为0.8～100μg/L的范围内,对JEV具有明显的抑制作用,为今后研究NGF抗病毒的作用机制奠定了实验基础。     

南蛇藤提取物诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡及其机制

目的观察南蛇藤乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物在体外诱导SGC-7901胃癌细胞凋亡的作用,并初步探讨其分子机制。方法制备南蛇藤乙酸乙酯和正丁醇提取物,采用MTT法检测二者对SGC-7901胃癌细胞增殖的影响;应用FITC-AnnexinⅤ及碘化丙锭(PI)双标法,通过流式细胞仪(FCM)观察SGC-7901细胞的凋亡率及P53蛋白的表达。结果不同浓度的南蛇藤乙酸乙酯和正丁醇提取物(15、30、60、120μg/ml)对SGC-7901细胞的增殖均有一定的抑制作用,且呈剂量依赖性。两种南蛇藤提取物(60、120、240、480μg/ml)可剂量依赖性地诱导肿瘤细胞凋亡,且随着浓度的升高,SGC-7901细胞P53蛋白的表达也增加,浓度为240和480μg/ml的提取物组与对照组相比,差异有统计学意义。结论南蛇藤乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物在体外可诱导SGC-7901细胞凋亡,上调细胞中P53基因的表达可能是其抗肿瘤作用的分子机制之一。     

液气射流技术改进单宁酸氧化制备高纯度鞣花酸

针对鞣花酸在实际生产过程中耗时长、纯度低等问题,以单宁酸为基质采用液气射流氧化法制备鞣花酸,考察了金属离子、单宁酸质量浓度、反应温度和反应时间对鞣花酸得率及纯度的影响.进一步探究了溶剂法、结晶法、碱溶酸沉法、反溶剂法对鞣花酸纯度的影响,并通过HPLC、FTIR、UV-Vis光谱和TG对鞣花酸高纯样进行表征.得到液气射流氧化的较优工艺条件为:质量浓度25 g/L单宁酸溶液中引入金属离子Na+(即NaOH)调节反应液pH至8.5,反应温度20℃,反应时间6 h.该条件制备的鞣花酸经碱溶酸沉后收率为46.72％、纯度84.55％;采用甲醇溶剂洗涤法在料液比1:200(g:mL)、65℃下处理1 h,鞣花酸的纯度达98.13％,回收率约为75.03％,提高了鞣花酸的热稳定性.液气射流氧化法与溶剂洗涤法相结合,大幅缩短制备鞣花酸的反应时间并明显提高其纯度,有望在工业生产中提高鞣花酸的生产效率并拓宽其在医药和化妆品领域的应用.     

水飞蓟宾与阿霉素联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制

目的探讨水飞蓟宾(silibinin)与阿霉素(doxorubicin)联合作用对胃癌细胞SGC-7901凋亡的影响及其机制。方法用不同浓度的水飞蓟宾、阿霉素单独或联合作用SGC-7901细胞,采用MTT法检测细胞增殖的活力;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化;Western blot法检测细胞周期调控蛋白Cdk1、Cyclin B1和细胞凋亡调控蛋白pro-caspase 3、pro-caspase 8、pro-caspase 9、PARP、Fas、Fas L表达量的变化及Bcl-2/Bax的比例。结果 0.01μmol/L阿霉素联合水飞蓟宾(25、50、100、200μmol/L)作用SGC-7901细胞后,产生了明显的协同作用,联合作用指数(combined index,CI)分别为0.634、0.418、0.224、0.472,有效提高了细胞的抑制率,同时降低了Cdk1和Cyclin B1蛋白的表达量,引起细胞G2/M期阻滞;Fas和Fas L的表达量升高,pro-caspase 3/8/9的表达量降低,PARP被剪切,Bcl-2/Bax的比例降低,促使SGC-7901细胞凋亡。结论水飞蓟宾与阿霉素联合作用SGC-7901细胞后,水飞蓟宾能有效降低阿霉素的使用浓度,并提升其诱导凋亡的效果。