2011—2012年广东省市售牡蛎中诺如病毒污染调查分析

目的 调查2011-2012年广东省市售牡蛎中诺如病毒的污染状况,为采取有效措施减轻牡蛎中诺如病毒污染程度提供建议,达到预防和控制食用牡蛎引起诺如病毒胃肠炎疾病的目的.方法 2011年3月-2012年10月,在广东省部分沿海城市进行市售牡蛎的采样检测,对其诺如病毒污染状况进行连续两年监测,采用荧光RT-PCR检测诺如病毒阳性标本基因分型,并对不同城市、季节及场所牡蛎中诺如病毒的污染情况及基因分型情况进行比较.结果 牡蛎中诺如病毒总检出率为14.9％ (41/275);四个季节牡蛎中诺如病毒检出率依次为4.4％、15.7％、18.2％和36.7％;从基因分型分析,GⅠ型病毒株检出率为4.0％,GⅡ型病毒株检出率为6.2％,GⅠ和GⅡ型病毒株同时检出率为4.7％.结论 2011-2012年广东省市售牡蛎的诺如病毒污染情况在市场、餐饮场所以及不同地区间比较差异无统计学意义,其基因分型间比较差异无统计学意义,但呈现明显季节性特点,以冬季污染最严重.     

长牡蛎类HBGAs的提取与组织分布以及温度和盐度对其表达的影响

类组织血型抗原(HBGAs-like)为长牡蛎富集诺如病毒的重要受体。本研究通过比较5种常用糖蛋白的浸提方法,分别建立长牡蛎内脏和鳃中类HBGAs的提取方法。运用建立的提取方法结合ELISA,对24份(240只)长牡蛎进行类HBGAs组织分布与分型检测,结果发现长牡蛎内脏和鳃中类HBGAs存在多态性的特点,且类A型HBGA在内脏中稳定表达(检出率为100%),类A及Leb型HBGAs在鳃中稳定表达(检出率分别为83.3%和91.7%)。通过改变温度和盐度牡蛎养殖条件,分析长牡蛎内脏和鳃中主要型别类HBGAs的表达变化。结果表明,低温和高盐均能促进牡蛎内脏中类A型HBGA的表达,这与诺如病毒疫情暴发的季节吻合,间接表明诺如病毒疫情暴发的季节性与牡蛎类HBGAs的表达量存在一定的相关性。     

北京市市售带壳牡蛎致病性弧菌污染状况调查

目的了解北京市市售带壳牡蛎致病性弧菌污染状况。方法 2014年2~11月每月在某水产品批发市场的摊位抽样200只带壳牡蛎,共80份样品(其中腮和肠样品分别为40份)。用常规培养方法检测牡蛎腮和肠(含便)中致病性弧菌,对副溶血性弧菌进行血清学分型,荧光定量PCR检测副溶血性弧菌毒力基因tdh、trh和tlh。结果 80份牡蛎样品中,致病性弧菌阳性样品检出率为62.50%(50/80),副溶血性弧菌阳性菌株检出率为33.75%(27/80),溶藻弧菌阳性菌株检出率为31.25%(25/80);各牡蛎腮和肠样品中,致病性弧菌阳性检出率为67.50%(27/40)和57.50%(23/40);27株副溶血性弧菌共9种血清型;毒力基因检测结果表示,tlh均为阳性,tdh和trh均为阴性。结论北京市市售带壳牡蛎中致病性弧菌污染严重,以副溶血性弧菌和溶藻弧菌检出为主。     

广州地区贝类中人类杯状病毒感染调查研究

从2007年10月~2009年9月,在广州市水产品市场收集127个牡蛎、94个毛蚶、342个花蛤、265个带子,采用荧光定量PCR方法检测人类杯状病毒HuCV的感染,旨在为贝类的安全监控提供基础研究资料。研究结果表明:牡蛎的HuCV阳性检出率最高,为24.41%(31/127);毛蚶和带子样品中HuCV总阳性率分别为11.70%(11/94)和1.89%(5/265);而花蛤中未检出HuCV。牡蛎中存在着人类杯状病毒不同基因型的混合感染。结果还显示贝类中的HuCV感染一般在秋冬季节流行:在2007年10月～2008年2月和2008年10月～2009年2月期间,牡蛎中HuCV总检出率分别为23.08%(12/52)和35.85%(19/53);而在2008、2009年的3月~9月间,牡蛎中均未发现HuCV感染。     

不同水源中GⅡ型诺如病毒实时荧光逆转录聚合酶链式反应检测方法建立及应用

目的建立不同水源中GⅡ型诺如病毒(NoV GⅡ)实时荧光逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法 ,对某市疾病预防控制中心送检的10份疑似引起诺如病毒中毒的水样进行NoV GⅡ检测。方法以瓶装水、河水和生活污水为研究对象,采用硝酸纤维素膜-聚乙二醇(PEG)沉淀法富集病毒,对取样体积、病毒洗脱条件、PEG终浓度及PEG沉淀条件等进行了优化,提取病毒RNA、建立实时荧光RT-PCR检测方法 ;通过外加MS2计算方法的回收率,评价所建方法对水样中诺如病毒的回收效果。结果建立的方法对瓶装水、河水和生活污水中NoV GⅡ的平均回收率分别为(60.1±8.0)%、(22.0±6.5)%和(35.7±8.1)%,10份送检水样中3份检出NoV GⅡ。结论建立的实时荧光RT-PCR方法适用于瓶装水、河水和生活污水中NoV GⅡ的检测,饮用水被NoV GⅡ是引发某市人员中毒的原因之一。     

食品中诺如病毒流行现状及其病毒分离方法的研究进展

食品基质是食源性病毒传播的主要媒介,其中诺如病毒(Norovirus,NoV)的检测也备受国内外关注。食源性NoV暴发和污染给人类健康和食品安全造成了极大的威胁。而基于食品基质成分的复杂程度,其样本前处理过程一直是病毒检测研究中的重点和难点,直接影响NoV的精准检测和结果的可靠性,给食品安全监管及疫情防控带来困难。本文综述了NoV在食品中的流行现状,为食源性NoV的风险评估和监管预警提供基础性研究数据。在查阅文献的基础上,就食品中NoV的分离方法进行了全面论述,比较了各个方法的优缺点,旨在为完善和扩充食品中NoV检测基质范围提供方法,为研究简便、快捷、准确的食源性NoV检测方法提供参考和思路,以防范NoV造成的污染及感染事件发生。     

舟山市海产贝类和食源性腹泻病例中肠道腹泻病毒监测

目的了解肠道腹泻病毒在舟山市海产贝类的分布和食源性腹泻病例中的感染特征以及两者相关联系,为预防和控制食源性疾病提供有效的对策和措施。方法采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)方法对466份舟山市海产贝类和422份食源性腹泻标本中诺如病毒(NoV)GⅠ型/GⅡ型、轮状病毒(RV)、札如病毒(SPV)、星状病毒(AsV)和肠道腺病毒(AdV)5种主要肠道腹泻病毒核酸进行检测。结果 466份海产贝类样品病毒总阳性率为18.03%(84/466),其中NoV GⅡ型为4.08%(19/466),SPV为9.67%(45/466),AsV为2.79%(13/466),AdV为1.50%(7/466);春季和冬季病毒阳性率较高,农贸市场的牡蛎病毒阳性率最高(24.75%,25/101),养殖毛蚶病毒阳性率最低(10.12%,17/168),不同的病毒阳性率以及不同来源和不同季节贝类的病毒阳性率差异均有统计学意义(P0.05)。422例腹泻患者粪便标本总阳性率为15.64%(66/422),NoV为4.74%(20/422,以GⅡ为主),RV为4.74%(20/422),SPV为3.55%(15/422),NoV GⅡ型、RV和SPV的阳性率相对较高,春季和冬季病毒阳性率较高,不同病毒阳性率和不同季节病毒阳性率差异有统计学意义(P0.05)。结论舟山市海产贝类中肠道腹泻病毒的污染状况较为严重,与食源性腹泻病例中的病毒感染特征存在相关联系,其流行季节和优势病毒类型相同。     

南海海域养殖牡蛎中麻痹性贝类毒素分析

本研究在2013年3月采集湛江、阳江、钦州、北海、汕头、汕尾、深圳、台山等8个位于南海海域的养殖牡蛎,用小鼠生物(MBA)法和高效液相色谱(HPLC)法进行麻痹性贝类毒素检测。MBA毒性分析结果显示:8个区域养殖牡蛎的毒素含量为0MU/g-2.3MU/g,符合我国贝类食品安全限量要求;HPLC毒素成分分析结果显示:湛江、深圳、汕头、台山和阳江等5个海域的养殖牡蛎体内检测出痕量的麻痹性贝类毒素,湛江、深圳、汕头和阳江海域的养殖牡蛎中检出高毒性的STX和neo STX。本次麻痹性贝类毒素测试MBA法的检出率为25%,HPLC法的检出率为62.5%,HPLC法更适合于检测麻痹性贝类毒素含量低的样品。     

广西养殖牡蛎中诺如病毒的污染状况及风险评估

目的研究广西养殖场、农贸市场及餐饮场所牡蛎中诺如病毒的污染状况,对广西养殖牡蛎中诺如病毒可能引发的发病风险进行评估。方法采用荧光逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法对广西养殖场、农贸市场、餐饮场所牡蛎样品中诺如病毒污染状况进行检测,采用Risk Ranger软件对牡蛎中诺如病毒进行半定量风险评估。结果 480份牡蛎样品中诺如病毒总检出率为11.04%(53/480),其中养殖场及农贸市场检出率分别为15.83%(38/240)、12.50%(15/120),餐饮场所牡蛎样品未检出诺如病毒;基因分型结果显示检出的诺如病毒均为GⅡ型。风险评估结果显示,加工后食用和生食的风险评分为44和67分,分别为中度和高度风险,预计食用者每人每天患病的可能性分别为3.29×10~(-6)和3.29×10~(-2),预计广西每年患病人数分别为3.10×10~3和3.10×10~7人。结论广西养殖场及农贸市场牡蛎中诺如病毒污染情况较为严重,污染的诺如病毒基因型均为GⅡ型,不生食牡蛎及食用前有效的加工处理是减少诺如病毒食源性疾病发生的有效方法。     

长牡蛎中类HBGAs的分型及与诺如病毒P粒子 结合特性研究

目的了解长牡蛎(Crassostrea gigas)消化道组织中类组织血型抗原(histo-blood group antigens,HBGAs)的类型特点,分析其与诺如病毒的结合特性,以探讨长牡蛎富集诺如病毒的机制。方法利用8种HBGAs单克隆抗体,建立长牡蛎中类HBGAs检测的ELISA方法,并分析其主要型别。同时,利用5种体外表达的GII.4型诺如病毒P粒子分析其与长牡蛎中类HBGA的结合特性。结果长牡蛎消化道组织中存在类A,H1,Lea和Ley型HBGA;55019株(2006b变异株)和97-1l株(95/96US变异株)GII.4型诺如病毒P粒子可通过类A、H1和Ley型HBGA与长牡蛎消化道组织相结合,91(Camberwell_91株)和42(Hunter_2004)株可通过类Ley型HBGA与长牡蛎消化道组织相结合,156株(sakai株)不与任何类型类HBGA结合。结论长牡蛎消化道组织中存在类A、H1、Lea和Ley型HBGA,GII.4型诺如病毒主要通过类A、H1和Ley型HBGA与长牡蛎消化道组织相结合。     

Surveillance of Enteric Viruses and Microbial Indicators in the Eastern Oysters (Crassostrea virginica) and Harvest Waters along Louisiana Gulf Coast

Noroviruses are the most common causative agent of viral gastroenteritis in humans, and are responsible for major foodborne illnesses in the United States. Filter‐feeding molluscan shellfish exposed to sewage‐contaminated waters bioaccumulate viruses, and if consumed raw, transmit the viruses to humans and cause illness. We investigated the occurrence of norovirus GI and GII and microbial indicators of fecal contamination in the eastern oysters (Crassostrea virginica) and water from commercial harvesting areas along the Louisiana Gulf Coast (January to November of 2013). Microbial indicators (aerobic plate count, enterococci, fecal coliforms, Escherichia coli, male‐specific coliphages, and somatic coliphages) were detected at the densities lower than public health concerns. Only one oyster sample was positive for norovirus GII at 3.5 ± 0.2 log₁₀ genomic equivalent copies/g digestive tissues. A stool specimen obtained from an infected individual associated with a norovirus outbreak and the suspected oysters (Cameron Parish, La., area 30, January 2013) were also analyzed. The norovirus strain in the stool belonged to GII.4 Sydney; however, the oysters were negative and could not be linked. In general, no temporal trend was observed in the microbial indicators. Low correlation among bacterial indicators was observed in oysters. Strongest correlations among microbial indicators were observed between enterococci and fecal coliforms (r = 0.63) and between enterococci and E. coli (r = 0.64) in water (P < 0.05); however, weak correlations were found in oysters (r < 0.45) and between oysters and harvest water (r ≤ 0.36, P > 0.05). Our results emphasize the need for regular monitoring of pathogenic viruses in commercial oyster harvesting areas to reduce the risks of viral gastroenteritis incidences.     

2020~2021年广州市售牡蛎中GII型诺如病毒污染情况调查

滤食性牡蛎是食源性诺如病毒传播的重要食品媒介。为了解广州市售牡蛎中的诺如病毒污染水平与遗传多样性特点,合理评估消费风险,本研究于2020年6月至2021年5月期间,每月从当地水产市场随机采集牡蛎样本,采用实验室前期建立的蛋白酶K处理偶联聚乙二醇沉淀小体系法,包括荧光定量RT-PCR和巢式RT-PCR技术检测贝类中病毒的污染量以及基因型分布特点。结果共检测牡蛎110只,GII型诺如病毒阳性检出率为52.7%（58/110）,病毒污染含量范围为1.56×103~1.09×106 copies/g（消化腺）。其中,春夏季节（3~8月）牡蛎中诺如病毒的阳性率为35.7%（20/56）,低于在秋冬季节（9~2月）的阳性率70.4%（38/54）;但不同季节中检出的病毒含量无显著差异,分别为春季（2.69±1.46）×105 copies/g（消化腺）,夏季（1.97±2.16）×105 copies/g（消化腺）,秋季（6.91±6.16）×104 copies/g（消化腺）,冬季为（4.83±2.99）×104 copies/g（消化腺）。部分阳性样本测序分析后显示,除1份为GII.17基因型外,其余均为GII.4基因型（n=13）,与当地的临床流行基因型呈现一致性。本研究显示广州市售牡蛎中仍存在较高的诺如病毒污染水平,需要进一步加强病毒防控工作,尤其提醒消费者在食用牡蛎时需加工充分。     

三种分子生物学方法检测牡蛎中诺如病毒的比较研究

采用RT-PCR、RT- 半巢式PCR(seminested PCR)和RT- 环介导等温扩增(LAMP)三种分子生物学方法分别检测了牡蛎中经粪便污染的诺如病毒。三种方法所采用的特异性引物均针对诺如病毒高度保守的N/S 结构域。结果显示：一步法RT-PCR较两步法结果理想但仍不能有效去除食品中的PCR反应抑制物。RT- 半巢式PCR和RT-LAMP的特异性和敏感性都远远优于RT-PCR,但是RT- 半巢式PCR 操作繁琐费时。RT-LAMP 扩增程序简单、反应时间短,且不需要精密的温度循环装置,在产物中加入SYBR Green Ⅰ染料后可用肉眼直接判断反应结果。因此,RT-LAMP 有望发展成为快速检测牡蛎中诺如病毒的有效手段。     

Effects of High‐Hydrostatic Pressure on Inactivation of Human Norovirus and Physical and Sensory Characteristics of Oysters

The purpose of the study was to determine the effect of high‐hydrostatic pressure (HHP) on inactivation of human norovirus (HuNoV) in oysters and to evaluate organoleptic characteristics of oysters treated at pressure levels required for HuNoV inactivation. Genogroup I.1 (GI.1) or Genogroup II.4 (GII.4) HuNoV was inoculated into oysters and treated at 300 to 600 MPa at 25 and 0 °C for 2 min. After HHP, viral particles were extracted by porcine gastric mucin‐conjugated magnetic beads (PGM‐MBs) and viral RNA was quantified by real‐time RT‐PCR. Lower initial temperature (0 °C) significantly enhanced HHP inactivation of HuNoV compared to ambient temperature (25 °C; P < 0.05). HHP at 350 and 500 MPa at 0 °C could achieve more than 4 log₁₀ reduction of GII.4 and GI.1 HuNoV in oysters, respectively. HHP treatments did not significantly change color or texture of oyster tissue. A 1‐ to 5‐scale hedonic sensory evaluation on appearance, aroma, color, and overall acceptability showed that pressure‐treated oysters received significantly higher quality scores than the untreated control (P < 0.05). Elevated pressure levels at 450 and 500 MPa did not significantly affect scores compared to 300 MPa at 0 °C, indicating increasing pressure level did not affect sensory acceptability of oysters. Oysters treated at 0 °C had slightly lower acceptability than the group treated at room temperature on day 1 (P < 0.05), but after 1 wk storage, no significant difference in sensory attributes and consumer desirability was observed (P > 0.05).     

微滴式数字PCR检测冷冻草莓中GⅠ、GⅡ型诺如病毒

目的:建立一种检测冷冻草莓中诺如病毒(GⅠ和GⅡ)的逆转录微滴数字PCR (RT-ddPCR)方法。方法:根据ISO标准选定检测引物,优化反应体系,退火温度,进行了方法学实验,建立了一种快速检测冷冻草莓中GⅠ和GⅡ亚型诺如病毒的新方法。结果:确定了数字PCR检测GⅠ型诺如病毒退火温度为56.5℃,GⅡ型诺如病毒退火温度为58.1℃。RT-ddPCR检测GⅠ质粒标准品标准曲线的R²=0.9947,RT-ddPCR检测GⅡ质粒标准品标准曲线的R²=0.9950,说明该方法具有良好的线性关系。与RT-qPCR灵敏度对比,RT-ddPCR法的灵敏度比RT-qPCR法高一个数量级。在检测范围内,最低检测限低至个位拷贝数。RSD最小为3.8%,表明该实验重复性良好。浓度较低100 copies/μL左右时,RT-ddPCR的重复性不佳。结论:本研究建立的诺如病毒数字PCR法具有特异性强、灵敏度高、检测限低等优点,可用于冷冻草莓中诺如病毒的定量检测。     

Depuration and Relaying: A Review on Potential Removal of Norovirus from Oysters

Pollution of coastal waters can result in contamination of bivalve shellfish with human enteric viruses, including norovirus (NoV), and oysters are commonly implicated in outbreaks. Depuration is a postharvest treatment involving placement of shellfish in tanks of clean seawater to reduce contaminant levels; this review focuses on the efficacy of depuration in reducing NoV in oysters. There have been many NoV outbreaks from depurated oysters containing around 10³ genome copies/g oyster tissue, far exceeding the median infectious dose (ID50). Half of the published NoV reduction experiments showed no decrease in NoV during depuration, and in the remaining studies it took between 9 and 45.5 d for a 1‐log reduction—significantly longer than commercial depuration time frames. Surrogate viruses are more rapidly depurated than NoV; the mean number of days to reduce NoV by 1 log is 19, and 7.5 d for surrogates. Thus, surrogates do not appear to be suitable for assessing virological safety of depurated oysters; data on reduction of NoV infectivity during depuration would assist evaluations on surrogate viruses and the impact of methods used. The longer persistence of NoV highlights its special relationship with oysters, which involves the binding of NoV to histo‐blood group‐like ligands in various tissues. Given the persistence of NoV and on‐going outbreaks, depuration as currently performed appears ineffective in guaranteeing virologically safe oysters. Conversely, relaying oysters for 4 wk is more successful, with low NoV concentrations and no illnesses associated with products. The ineffectiveness of depuration emphasizes the need for coastal water quality to be improved to ensure oysters are safe to eat.     

北京市平谷区2018年食源性疾病主动监测结果分析

目的 对北京市平谷区2018年食源性疾病哨点医院的主动监测结果分析, 了解食源性疾病的发病及流行趋势。方法 收集哨点医院主动监测的符合食源性疾病病例定义的347例病人的信息, 对采集的粪便标本进行沙门菌、副溶血性弧菌、致泻性大肠埃希菌、志贺菌、诺如病毒等5种食源性致病微生物的病原学检测。结果 347例食源性疾病患者26~35岁年龄组患者所占的比例最大(32.0%)。疾病发生的场所主要为家庭(80.4%)。在明确的可疑原因食品中, 肉与肉制品所占比例最大(20.7%)。共采集332份患者粪便标本, 检测出致病菌者79例, 检出率23.8%。沙门菌检出率最高(10.2%)、其次为致泻大肠埃希菌(9.6%)。抽取264份标本进行诺如病毒检测, 14份检出阳性, 检出率5.3%。第3季度致病菌检出率高于其他季度, 12、1、2、3月份诺如病毒检出率较高。结论 应加强平谷区食源性疾病的季节性监测, 对易感人群、家庭进行食品卫生知识重点宣传教育, 尤其是肉与肉制品相关知识。     

食品中诺如病毒检测技术研究进展

文章介绍了诺如病毒的富集纯化技术,并就目前国内外可用于食品中诺如病毒检测的技术:核酸检测、免疫学检测,以及生物传感器展开了综述,分析比较了各种方法的优缺点,最后对诺如病毒今后的研究方向进行了展望。     

北京市市售牡蛎中诺如病毒核酸检测及定量分析

目的针对北京市市售牡蛎样品中诺如病毒污染水平及污染浓度进行定量分析研究。方法分离牡蛎消化腺,将消化腺匀浆处理,加入含有蛋白酶K的磷酸盐缓冲液,进行样品前处理,用试剂盒提取病毒RNA,用一步法实时荧光逆转录聚合酶链式反应(real time RT-PCR)检测诺如病毒RNA,并对阳性样品进行定量分析。结果共检测牡蛎样品356份,其中GGI阳性样品12份,GGII阳性样品39份,GGI和GGII同时为阳性的样品6份。对阳性样品中的诺如病毒核酸定量分析,核酸浓度在3.7×10~3~2.8×10~5基因拷贝/g(消化腺)之间。结论北京市市售牡蛎中存在诺如病毒污染的情况,需要加强对牡蛎中诺如病毒的污染监测,并开展污染水平风险评估,保障消费者食用安全,降低由诺如病毒引起的腹泻病的疾病负担。