双水相法萃取分离猪胰α-淀粉酶体系的初步研究

采用聚乙二醇(PEG1500)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对猪胰α-淀粉酶分离条件进行了研究。探讨PEG质量分数、p H值和(NH4)2SO4质量分数对猪胰α-淀粉酶在PEG1500/(NH4)2SO4双水相中的分配系数Ka及萃取率Y的影响,并通过正交试验优化双水相萃取条件。结果表明,在p H值为7.0,PEG1500质量分数为18%,(NH4)2SO4质量分数为12%的双水相体系中,α-淀粉酶的分配系数Ka为8.48,萃取率Y为80.25%,α-淀粉酶活为1 690 U/m L。     

聚乙二醇-硫酸铵双水相体系萃取α-葡聚糖酶

采用聚乙二醇-硫酸铵(PEG-(NH4)2SO4)双水相体系对α-葡聚糖酶进行萃取,以两相比、酶活、蛋白浓度、比活力以及萃取率为参数进行比较,探讨了使用不同分子量的PEG、不同的PEG浓度以及不同(NH4)2SO4浓度下对酶分配行为的影响。实验结果表明,α-葡聚糖酶在质量分数13%的PEG4000以及13%的(NH4)2SO4的双水相系统中,可获得较高的比活力2364.97 U/mg以及萃取率99.94%。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取葡萄糖氧化酶的研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]双水相体系对葡萄糖氧化酶的萃取进行了研究。以双水相系统的上、下相的酶活、比酶活、相比R、分配系数K和萃取率Y等为参数,探讨了PEG质量分数、不同PEG浓度和不同硫酸铵浓度对葡萄糖氧化酶在PEG/(NH4)2SO4双水相系统中分配行为的影响。实验结果表明:葡萄糖氧化酶在25%的PEG4000和10%硫酸铵的双水相体系中可获得较高的萃取率达81.11%,分配系数为0.134。     

双水相提取糖化酶的研究

利用PEG/(NH4)2SO4双水相系统从粗酶液中提取糖化酶。研究了PEG、(NH42)SO4、NaCl溶液浓度对糖化酶分配系数、回收率以及分相时间的影响,确定了提取糖化酶的最佳条件,即PEG溶液浓度为24%,(NH42)SO4溶液浓度为20%时,分配系数最小为0.0120,糖化酶回收率最高为98.81%。     

双水相萃取法提取木瓜蛋白酶的研究

对以PEG(聚乙二醇)/(NH4)2SO4为双水相系统提取的木瓜蛋白酶进行了研究。实验考察了不同分子量PEG对木瓜蛋白酶活性的影响以及PEG浓度、(NH4)2SO4浓度、pH和温度对木瓜蛋白酶分配系数的影响。结果表明:双水相体系最佳条件为PEG60027%,(NH4)2SO421%,pH7·0和温度60℃。在上述条件下,木瓜蛋白酶的分配系数可达9·28。     

木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe~(3+)/(NH_4)_2SO_4双水相体系中亲和分配行为研究

目的:研究木瓜蛋白酶在PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系中分配行为。方法:采用浊点法,构建双水相相图,考察各成相剂对木瓜蛋白酶活性的影响;研究不同PEG4000和(NH4)2SO4的质量分数、不同PEG-IDA-Fe3+的取代量时,木瓜蛋白酶在两相体系中分配行为的变化;用响应面法优化亲和双水相萃取木瓜蛋白酶的最佳分离条件;同时对木瓜蛋白酶在萃取体系中的结构进行表征。结果:当两相体系中p H6.9,PEG4000质量分数16%,(NH4)2SO4质量分数20%,PEG-IDA-Fe3+为3%时,木瓜蛋白酶的上相酶活性回收率达90.5%,蛋白分配系数达1.85,而其在PEG/(NH4)2SO4中的酶活回收率及蛋白分配系数都低于PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO4亲和双水相体系。结论:PEG-IDA-Fe3+/(NH4)2SO亲和双水相系统能有效提高木瓜蛋白酶的分配效果,采用Fe3+螯合PEG成相剂的双水相萃取木瓜蛋白酶条件温和,不影响酶的特征结构。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取大豆脂肪氧合酶的研究

采用聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对大豆中脂肪氧合酶进行分离萃取研究;通过综合考察酶分配系数、相比和回收率,探讨了(NH4)2SO4、PEG2000、Na Cl浓度以及p H对脂肪氧合酶萃取的影响,并通过正交实验进一步优化实验条件,结果表明在单一因素下的最佳工艺条件为:(NH4)2SO415%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、Na Cl 1%(wt%)、p H5.8;正交实验优选出的最佳工艺条件为:(NH4)2SO417%(wt%)、PEG2000 13%(wt%)、p H5.2,可获得酶的分配系数最高可达9.710,萃取率为87.6%。     

PEG/（NH4）2SO4双水相体系萃取果胶酶

采用PEG/(NH4)2SO4双水相系统对果胶酶进行萃取分离,研究了PEG分子量、pH、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等因素对果胶酶分配系数的影响,结果表明:双水相体系质量组成为PEG100027%,(NH4)2SO419%,NaCl0.002%,pH5.0时果胶酶的萃取效率较好,实验中分配系数最高可达为14.0。     

双水相萃取法提取果胶酶的研究

对PEG/(NH4)2SO4双水相提取果胶酶进行了研究,考察了PEG分子量、pH值、成相物质浓度、NaCl浓度、温度等对果胶酶分配系数的影响,结果表明,双水相最佳提取条件为PEG1000 27%,(NH42)SO4 19%,NaCl 0.002%,pH 5.0,温度50℃,在此条件下果胶酶分配系数(K)可达14.0。     

PEG/(NH4)2SO4双水相体系萃取杏鲍菇多糖

采用PEG/(NH4)2SO4双水相体系萃取杏鲍菇多糖,研究了PEG的分子量、硫酸铵的浓度及PEG的浓度三个因素对杏鲍菇多糖在双水相系统中的分配系数和收率的影响,结果表明：当PEG4000浓度为21.33%,硫酸铵浓度为14%时,多糖的分配系数可达1.9529~2.0152,收率可达60.58~62.82,从而得出一种萃取杏鲍菇多糖的方法。     

无花果蛋白酶在双水相体系中分配行为

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的新型、廉价酶纯化方法。为了扩展该方法应用领域,对PEG(polyethylene glycol)/(NH4)2SO4 双水相体系萃取无花果叶中无花果蛋白酶的实验条件进行研究,考察PEG 相对分子质量、成相物质量分数、pH 值、温度对无花果蛋白酶在两相体系中分配系数(K 值)的影响。结果表明：当两相体系中PEG 相对分子质量为1000、PEG 质量分数为20%、(NH4)2SO4 质量分数为19%、pH 值为6、温度室温(25℃)时蛋白酶在两相体系中分配系数最高可达3.6。     

双水相萃取分离米曲霉中性蛋白酶

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系萃取分离米曲霉中性蛋白酶。探讨了不同成相盐及其浓度、成相聚合物PEG及其浓度、pH和NaCl浓度对中性蛋白酶萃取的影响。结果表明,适宜的双水相萃取体系为20%PEG1000/25%(NH4)2SO4(m/m)、pH8.0、不添加NaCl,此条件下中性蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为99.88%和2.32。     

类芽孢杆菌产β-甘露聚糖酶的分离与纯化

类芽孢杆菌(Paenibacillus sp.)CH-3是一株高产β-甘露聚糖酶的菌株。本研究采用乙醇沉淀法、硫酸铵盐析法、聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系对CH-3菌株产生的β-甘露聚糖酶进行分离与纯化,以选出纯化率高且残余酶活力高的方法。结果发现,乙醇沉淀法和硫酸铵盐析法纯化效果较差,聚乙二醇(PEG)/硫酸铵[(NH4)2SO4]双水相体系的纯化效果较好,PEG浓度为20%(m/m)时,上相测得的总酶活力最高,可以达到221 U/m L。在(NH4)2SO4浓度为18%(m/m)时,上相测得总酶活力最高,可以达到264 U/m L,同时酶萃取率达最大值为86.2%。因此,最优的双水相体系是20%(m/m)PEG和浓度为18%(m/m)(NH4)2SO4。     

双水相萃取长鱼蛋白酶的工艺研究

采用聚乙二醇(PEG)/盐双水相体系以分离纯化长鱼蛋白酶。通过研究不同成相盐及其浓度、不同PEG分子量及其浓度和不同p H对双水相萃取长鱼蛋白酶的影响。结果表明,最优化的双水相体系为25%PEG1000、20%(NH4)2SO4和p H7.0,在此条件下长鱼蛋白酶上相酶活回收率和纯化倍数分别为90.5%和4.40。     

响应面分析法优化麦麸酯酶双水相萃取的条件

研究采用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系萃取麦麸酯酶,通过单因素实验考察不同PEG分子量、PEG浓度、无机盐种类、无机盐浓度、pH和离子强度对麦麸酯酶总蛋白分配系数、酶活回收率、纯化倍数的影响,并通过响应面分析法优化了萃取条件。结果表明最佳萃取条件为:PEG1000质量浓度为21%、(NH4)2SO4质量浓度为18%、pH4.4。回归方程预测双水相萃取纯化倍数可达到2.9208,三次验证实验的平均纯化倍数为2.9190,与预测值相对误差为0.06%。     

PEG/(NH4)2SO4双水相体系提取和纯化糖化酶

用PEG／（NH4）2SO4双水相体系提取，纯化糖化酶，研究了影响体系分配系数，回收率和纯化因子的因素从而确定了萃取糖化酶的最佳条件。在WPEG为0．24，W（NH4）2SO4为0．08条件下，分配系数最小，达0．022，回收率为95．6％。     

聚乙二醇/硫酸铵双水相萃取猪胃蛋白酶工艺研究

采用聚乙二醇/硫酸铵[PEG/(NH4)2SO4]建立稳定的双水相体系以分离猪胃蛋白酶。通过上下相体积比(VR)、比活力(SA)、纯化因子(PF)、酶活回收率(η)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析测定萃取效果。结果表明,萃取猪胃蛋白酶的最佳配比体系为25%PEG1000:18%(NH4)2SO4,所萃取的猪胃蛋白酶酶活回收率为91.5%,SDS-PAGE结果显示,萃取的蛋白质和猪胃蛋白酶对照品分子量大小一致。     

灰树花漆酶的双水相萃取及酶学性质

研究双水相萃取法分离灰树花漆酶。以PEG6000/(NH4)2SO4作为成相系统,通过单因素试验研究酶液添加量、PEG6000质量分数、(NH4)2SO4质量分数和体系pH对灰树花漆酶萃取效应的影响,并通过正交试验确定最佳萃取条件,同时进行纯化漆酶的酶学性质研究。结果表明,在pH为6时,PEG6000/(NH4)2SO4双水相萃取的最佳条件为:酶液添加量5%,PEG6000质量分数25%,(NH4)2SO4质量分数17%,此时漆酶的分配系数和酶活收率分别高达7.6和96.6%。纯化漆酶的最适反应温度和最适pH分别为45℃和2.97,在30~45℃和pH 3.5~5.0之间具有很好的稳定性。金属离子Cu2+、Zn2+、Mg2+、Mn2+、K+、Ca2+对漆酶酶活有促进作用,其中Cu2+和Mg2+的促进作用最显著,而Co2+、Fe2+、Na+对漆酶酶活有抑制作用,其中Fe2+的抑制作用最明显。     

两步盐析联合双水相萃取提取纯化蓝藻中藻蓝蛋白

以巢湖新鲜蓝藻为处理对象,采取冻融破壁的方式获取藻蓝蛋白的粗提液,采取两步盐析联合双水相萃取的方法提取纯化藻蓝蛋白。运用0.618法选点实验研究了两步盐析中(NH4)2SO4饱和度对提取纯化影响,构建了聚乙二醇（polyethylene glycol,PEG）-(NH4)2SO4的双水相体系,综合考虑PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH值和藻蓝蛋白质量浓度对提取纯化藻蓝蛋白的影响。结果表明：室温25 ℃条件下,一步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为21%,二步盐析时(NH4)2SO4的最佳饱和度为30%。两步盐析后得到的藻蓝蛋白构建成PEG-(NH4)2SO4的双水相体系后,当PEG相对分子质量1 000、PEG 1 000质量分数10%、(NH4)2SO4质量分数25%时,藻蓝蛋白的纯度可达3.45。     

猪肉内源性脂肪酶三种提取方法的比较研究

比较PEG2000/(NH4)2SO4双水相体系萃取法、反胶团提取法、双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合的三种方法对猪肉内源性脂肪酶萃取效果的影响。通过正交实验进一步优化每一种方法的提取条件。结果表明:在PEG2000浓度25%、(NH4)2SO4浓度12%、pH6.5、壳聚糖浓度为2.5mg/mL的条件下,进行双水相萃取和壳聚糖沉淀相结合法萃取脂肪酶的萃取效果最佳,其萃取率为97.83%,分配系数为5.209,纯化倍数为7.74倍。