咪达唑仑对交感神经元电压门控性钾电流的影响

目的: 观察不同浓度咪达唑仑对交感神经元电压门控钾通道电流的影响, 探讨临床浓度咪达唑仑对钾电流的作用是否与抑制交感神经系统有关。方法: 用酶消化法获得急性分离的SD 大鼠(7 ~ 10 d) 颈上交感神经节细胞, 应用膜片钳技术记录不同浓度的咪达唑仑对电压门控钾电流的影响。结果: 在钳制电位(Vh)-80 mV, 刺激电压(Vt)^-100 mV ~ 30 mV, 时程160 ms 条件下, 不同浓度的咪达唑仑对电压门控钾电流均有抑制作用, 且呈浓度依赖性。临床相关浓度的咪达唑仑(0.3 μmol·L^-1) 使钾通道电流峰值下降3.89 %(P =0.88) 。50 %钾通道电流峰值受抑制时的咪达唑仑浓度(IC₅₀) 约为70.06 μmol·L^-1 。结论: 咪达唑仑对交感神经元电压门控钾电流具浓度依赖性抑制作用, 但临床浓度咪达唑仑对钾电流影响较小。     

地西泮抑制交感神经节细胞钠通道电流的机制

目的 研究地西泮对交感神经节细胞钠通道电流的抑制作用机制。方法 酶消化法急性分离SD 大鼠(7 ~ 10 d) 颈上交感神经节细胞, 全细胞膜片钳技术记录地西泮对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压(V_h) -80 mV, 刺激电压(Vt) 0 mV 条件下,0.3 μmol·L^-1 地西泮使钠电流峰值降低14.76 %(P <0.01), 其抑制作用与浓度呈正相关(r =0.99,P <0.01), IC₅₀为6.06 μmol·L^-1;钳制电位不同, 抑制作用也不同(P <0.05), V_h -60 mV时的IC₅₀ 为4.60 μmol·L^-1。3.0 μmol·L^-1的地西泮使电流-电压曲线峰值平均降低48.94 %, 峰值向去极化方向移动约10 mV; 对激活曲线无明显的影响(P >0.05), 用药前、后50 %的通道激活时的去极化电压(V_1/2)分别为:-24.64 mV、-23.75 mV; 3.0 μmol·L^-1的地西泮使稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(20.12 mV, P <0.01), 用药前、后50 %的通道灭活时的条件脉冲电压(V_1/2) 分别为:-64.13 mV、-84.25 mV。结论 地西泮对交感神经节细胞钠通道电流有明显的抑制作用, 且呈浓度及电压依赖性;其抑制作用主要与优先结合钠通道的失活状态而影响钠通道的失活有关。提示交感神经节参与介导地西泮的循环抑制作用。     

咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的抑制作用

目的 研究咪唑安定对交感神经元全细胞钠通道电流的影响,探讨其循环抑制机制。方法 酶消化法急性分离SD大鼠(8~12d)颈上交感神经节细胞,全细胞膜片钳技术记录咪唑安定对钠通道电流的影响。结果 在钳制电压-80mV,刺激电压0mV条件下,临床相关浓度的咪唑安定(0.3μmol·L^-1)使钠通道电流峰值降低19.98%(P<0.05),随浓度增加,抑制作用逐渐增强,50%的钠通道电流峰值受抑制时的咪唑安定浓度(IC₅₀)约为18.35μmol·L^-1;3μmol·L^-1的咪唑安定使钠电流稳态失活曲线产生明显的超极化方向移动(7.75mV,P<0.05),用药前、后50%的通道灭活时的条件脉冲电压(V1/2)分别为:-40.39mV、-48.14mV;3μmol·L^-1的咪唑安定对钠电流的激活曲线几乎无影响。结论 临床相关浓度的咪唑安定对交感神经节全细胞钠通道电流有明显的抑制作用,且主要与钠通道的失活有关。提示咪唑安定的循环抑制作用可能与其直接抑制交感神经有关。     

异丙酚对大鼠脊髓背角神经元TTX敏感型钠通道失活和去失活效应的影响

目的: 观察异丙酚对急性分离的大鼠脊髓背角神经元TTX敏感型钠通道电流的影响及相关机制。方法: 取出生后7d的雄性SD大鼠,击昏后断头取脊髓腰膨大部位,分离背角神经元,应用全细胞膜片钳记录模式记录钠电流。距离神经细胞100μm施加0.3～30 μmol/L不同浓度的异丙酚,应用-10mV(持续30ms)刺激电压诱发钠电流,求出异丙酚对钠电流的半效抑制浓度(IC₅₀)。观察异丙酚对钠通道失活效应的影响时,应用从-80mV至-20mV的预刺激电压(阶差为10mV,持续30ms),再应用0mV刺激电压(持续30ms)诱发钠电流产生,向神经细胞施加IC₅₀水平的异丙酚。观察异丙酚对钠通道去失活效应的影响时,应用-10mV的预刺激电压(持续30ms),再给予-10mV、持续30ms的刺激电压诱发钠电流产生,两刺激电压的间隔时间为2～24ms。结果: 异丙酚可浓度依赖性地抑制TTX敏感型钠电流,其IC₅₀为(5.35±0.25) μmol/L。钠通道失活实验中,预刺激电压在-60mV到-40mV范围内,IC₅₀水平的异丙酚可显著抑制由刺激电压(0mV)诱发的钠电流(P<0.05)。钠通道去失活实验中,两刺激的间隔时间在2～6ms之间时,IC₅₀水平的异丙酚可显著性抑制由刺激电压(-10mV)诱发的钠电流(P<0.01,P<0.05)。结论: 异丙酚可抑制大鼠脊髓背角电压依赖性钠通道电流,这一作用与促进钠通道的失活和抑制钠通道的去失活有关。     

新的四氢异喹啉类化合物CPUE1逆转K562 A02 细胞的多药耐药性

目的 研究新的四氢异喹啉类化合物CPUE1逆转K562/A02 细胞多药耐药性的作用及机制。 方法 在CPUE1 的作用下, 用MTT 法检测长春新碱(vincristine, VCR) 对K562/A02 多药耐药细胞的细胞毒作用的变化, 使用DNA 分析和Annexin-Ⅴ/PI 双染法研究CPUE1 对VCR 诱导K562/A02 细胞凋亡的影响, 流式细胞仪检测CPUE1 对P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp) 外排罗丹明123 (rhodamine123, Rh123)的作用。 结果 CPUE1 能明显提高VCR 对K562/A02多药耐药细胞的细胞毒作用以及凋亡诱导作用,10 μmol·L^-1的CPUE1 能使K562/A02 对VCR 的IC₅₀值由60.54 μmol·L^-1 降至4.17 μmol·L^-1。CPUE1还能抑制Rh123 外排从而增加细胞内Rh123 的蓄积浓度。 结论 CPUE1 通过抑制P-gp 的活性逆转K562/A02 细胞的多药耐药性。     

盐酸埃他卡林对H2O2所致PC12细胞损伤的保护

目的: 研究 K_ATP 通道开放剂盐酸埃他卡林(iptakalim hydrochloride, Ipt) 对 H₂O₂ 所致 PC12 细胞损伤的保护作用及其作用机制。方法: 采用培养的PC12细胞, MTT 法测定细胞存活率, HPLC 法测定细胞培养液中谷氨酸(Glu) 的含量, 荧光法测定胞内钙离子([Ca²⁺]_i) 浓度。结果: Ipt 可浓度依赖性的拮抗H₂O₂ 介导的细胞毒性, 提高细胞生存率, 降低胞外Glu的释放以及胞内 Ca²⁺ 浓度。该保护作用可被200 μmol°L^-1 5-HD(线粒体K ATP 通道阻断剂) 部分拮抗。结论: Ipt 可拮抗 H₂O₂ 介导的细胞损伤作用, 该保护作用可能与线粒体ATP 敏感性钾通道相关。     

应用膜片钳技术研究豆腐果苷对hERG钾通道电生理功能的影响

目的: 探讨豆腐果苷对hERG钾离子电流的影响及潜在心脏毒性。方法: 使用稳定转染hERG基因的CHO细胞,通过全细胞膜片钳技术检测不同浓度豆腐果苷对hERG通道电流活动的作用。结果: 豆腐果苷对hERG钾通道的IC₅₀约为47 μmol/L,比临床常规剂量下人体内峰浓度高1 000倍以上。结论: 临床常用剂量下,豆腐果苷发生与hERG通道抑制作用相关的心脏安全性问题的可能性非常小。     

17-AAG协同顺铂抑制肺腺癌A549细胞的增殖

目的: 观察热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-AAG与顺铂(cisplatin, DDP)联用对肺腺癌细胞株A549增殖抑制的协同效应。方法: 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测不同浓度17-AAG、顺铂及两药联用对肺癌细胞株A549的生长抑制作用,并应用中效原理评价两药联用效应。结果: 顺铂和17-AAG均对A549细胞的生长有较好的抑制作用,并呈现一定的剂量依赖性,顺铂作用 48 h 时,其IC₅₀值为 69.627 μmol/L;17-AAG的IC₅₀值为 0.455 μmol/L。顺铂联合17-AAG显示更强的抑制作用,特别是在低剂量下协同作用更明显。结论: 17-AAG联合顺铂对肺癌细胞的增殖具有协同抑制效应。     

盐酸埃他卡林对大鼠海马神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响

目的: 研究盐酸埃他卡林(Ipt) 对脑神经元谷氨酸受体功能及突触活动的影响。方法: 采用原代培养的大鼠海马神经元, 应用膜片钳全细胞记录技术, 记录Ipt 对培养的海马神经元谷氨酸或天冬氨酸(NMDA) 诱发电流及神经元突触后电流的影响。结果: Ipt (1 ~ 100 μmol·L^-1) 可浓度依赖性地对抗培养的海马神经元谷氨酸或NMDA 诱发电流, 并为ATP敏感性钾通道拮抗剂格列本脲30 μmol·L^-1所对抗。Ipt 抑制培养的海马神经元之间突触联系形成的自发兴奋性突触后电流, 降低其发放频率, 抑制其电流幅度;但对微小兴奋性突触后电流无显著性影响。结论: Ipt 可阻断脑神经元谷氨酸受体功能, 抑制脑神经元谷氨酸的兴奋性突触传递, 其作用与ATP 敏感性钾通道相关。     

17β-雌二醇对离体猪基底动脉的影响

目的与方法 研究17β-雌二醇(E₂)对KCl和5-羟色胺(5-HT)引起离体猪基底动脉收缩的拮抗及保护作用。结果 E₂浓度依赖性地对抗KCl引起的最大收缩作用,IC₅₀为10^-4.8mol/L。E₂预处理后,浓度依赖性地抑制KCl引起的最大收缩,IC₅₀为10^-4.8mol/L,并降低5-HT引起收缩的浓度效应曲线的最大反应,其pD₂'为4.57。结论 E₂对离体猪基底动脉有舒张作用。     

山莨菪碱抑制成年大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩及其机制

目的: 观察山莨菪碱对大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩功能的影响并探讨其机制。方法: 采用单细胞动缘探测系统和双激发荧光光电倍增系统观察山莨菪碱对大鼠离体心室肌细胞钙瞬变和收缩功能的影响, 应用信号转导通路中相关受体的激动剂或拮抗剂探讨其作用机制。结果: 山莨菪碱1 ×10^-9 、1 ×10^-7 、1 ×10^-5 mol·L^-1可直接抑制心室肌细胞钙瞬变和收缩功能;卡巴胆碱可以消除山莨菪碱的作用, 而IP₃ 受体阻断剂肝素(1 ×10^-6 mol·L^-1) 和细胞膜电压依赖型钙离子通道阻滞剂维拉帕米(1 ×10^-6 mol·L^-1) 可以减弱山莨菪碱的作用。结论: 山莨菪碱抑制心室肌细胞钙瞬变和收缩功能可能与其阻断M 受体、抑制细胞内钙库钙离子释放和经过电压依赖型钙离子通道的钙离子内流有关。     

异丙酚对离体大鼠缺血/再灌注心肌丙二醛和含水量的影响

目的 探讨异丙酚对离体大鼠缺血/再灌注心肌丙二醛(MDA)和水肿程度的影响。方法 采用改Langendorff 离体大鼠心脏模型,将24 只大鼠随机分成4 组。正常对照组:用K-H 液持续灌注80 min;缺血/再灌注模型组:用K-H 液预灌30 min,然后用4 ℃ 的St.Thomas 停搏液使心脏停跳,常温下全心停灌20 min,K-H 液再灌注30 min;异丙酚组和异丙酚+格列本脲组:从预灌第15 min 改用含相应药液的K-H 液灌注,停灌同缺血/再灌注模型组,然后用含相应药液的K-H 液再灌注30 min 。测定心肌含水量、MDA 含量和冠脉流出液肌酸激酶(CK)活性。结果 缺血再灌注可使心肌含水量、MDA 含量和CK活性明显增高(P <0.01),30 μmol·L^-1 异丙酚能显著减轻上述损伤性变化,格列本脲对异丙酚的心肌保护作用无影响(P >0.05)。结论 心肌缺血/再灌注可致心肌水肿,异丙酚减轻水肿作用与其抗氧化有关,而与ATP-敏感性钾通道的开放无关。     

阿芬太尼对再灌注心肌功能的保护作用及其机制

目的: 研究阿芬太尼对缺血再灌注心肌功能的保护作用及其作用机制。方法: 采用 Langendorff离体大鼠心脏模型, 以停灌的方式造成全心缺血25 min, 然后复灌 30 min, 药物于缺血前 10 min给予并持续到复灌末。观察 50 μg·L^-1 和 100 μg·L^-1阿芬太尼及其与纳洛酮和 L-NAME 合用时对缺血前及再灌注期间左心功能的影响, 并测定再灌注末时心肌组织 ATP 和 NOS 的含量。 结果: (1) 在非缺血情况下, 100 μg·L^-1阿芬太尼能使 HR 减慢, 对LVEDP、LVDP、±dp/dt_max 和 CF 无明显影响;(2)50 μg·L^-1 和 100 μg·L^-1 阿芬太尼均能明显促进再灌期间左心功能和冠脉流量的恢复, 且 100 μg·L^-1阿芬太尼比 50 μg·L^-1 阿芬太尼作用更明显;(3)200 μg·L^-1 纳洛酮和 100 μmol·L^-1 L-NAME 均削弱了阿芬太尼对缺血再灌注心肌功能恢复的有利作用。结论: 阿芬太尼对离体大鼠的心肌功能影响轻微且能促进缺血再灌注后心肌功能的恢复, 其作用机制可能与阿片受体和内皮细胞释放的一氧化氮有关。     

缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用1

目的 观察缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞的损伤及川芎嗪的保护作用 。方法 在缺氧-复氧条件下,测量对照组和不同浓度川芎嗪组对杆形心肌细胞百分比、心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比及Ca²⁺浓度的影响。结果 缺氧-复氧对大鼠心室肌细胞有损伤作用,浓度为 4μmol·L^-1的川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞有保护作用,它能抑制损伤细胞挛缩,提高损伤细胞生存率,抑制心肌细胞内 K⁺/Na⁺浓度比的降低 、增加细胞内 Ca²⁺浓度,且剂量越大,保护作用越好,即川芎嗪对缺氧-复氧损伤细胞的保护呈剂量依赖性 。结论 川芎嗪对缺氧-复氧损伤的大鼠心肌细胞具有保护作用,它能显著地对抗缺氧-复氧对心室肌细胞的损伤作用 。