L-天冬氨酸α-脱羧酶异源表达和转化条件的优化

为提高L-天冬氨酸α-脱羧酶粗酶液催化L-天冬氨酸生产β-丙氨酸的效率,研究了诱导剂添加时间、诱导剂浓度、诱导温度和培养时间对重组菌株产酶的影响,并优化了粗酶液的反应温度、pH和底物浓度等转化条件.得到最优诱导条件:在OD600达到0.6左右时加入诱导剂IPTG 0.5 mmol/L、25℃下诱导表达18h时,酶活力达...     

高产 β-丙氨酸基因工程菌的构建与优化

为构建高产β-丙氨酸基因工程菌,克隆了来源于枯草芽孢杆菌的L-天冬氨酸-α-脱羧酶(panD)基因,在E.coli BL21 (DE3)中异源表达,得到重组菌后,采用不同方法进行优化。通过选用不同表达载体、对目的基因序列进行密码子优化以及对菌株进行自动诱导的策略,逐步提高目的蛋白的表达量,进而提高β-丙氨酸产量。结果表明,经优化后,菌株30a-1的β-丙氨酸产量提高到140.82mmol/L,较优化前提高了2.5倍。     

α-乙酰乳酸脱羧酶的磁性固定化条件研究

采用分散聚合法,在Fe3O4磁流体存在下,通过PVA分子单体共聚制备出磁性聚乙烯醇微球.微球粒径分布在2.5×10-2～5×10^-2 μm,其中3.7×10-2～4.1×10^-2 μm的微球占总微球的44%,制备微球粒径分布均匀.以磁性聚乙烯醇微球为载体,通过戊二醛交联法进行ALDC的固定化,制备固定化酶,并对其固定化条件进行了初步研究.结果显示,在酶固定化过程中,自由酶的添加量为20 mL/g微球,戊二醛的添加量为0.98%.在其固定化最佳条件下,制备的固定化ALDC的活力为65 180 U/g,而且其比活、活性回收率分别可达872.32 U/mg和42.33%.     

α-乙酰乳酸脱羧酶的磁性固定化条件研究

采用分散聚合法,在Fe3O4磁流体存在下,通过PVA分子单体共聚制备出磁性聚乙烯醇微球。微球粒径分布在2.5×10-2~5×10-2μm,其中3.7×10-2~4.1×10-2μm的微球占总微球的44%,制备微球粒径分布均匀。以磁性聚乙烯醇微球为载体,通过戊二醛交联法进行ALDC的固定化,制备固定化酶,并对其固定化条件进行了初步研究。结果显示,在酶固定化过程中,自由酶的添加量为20 mL/g微球,戊二醛的添加量为0.98%。在其固定化最佳条件下,制备的固定化ALDC的活力为65 180 U/g,而且其比活、活性回收率分别可达872.32 U/mg和42.33%。     

L-亮氨酸摇瓶发酵培养条件的研究

应用单因素试验法研究发酵培养基pH值、发酵温度、摇瓶装液量、摇瓶转速等发酵培养条件对L-亮氨酸发酵的影响。试验结果显示,500 mL三角瓶装液量50 mL,置旋转摇床上转速220 r/m in,pH 7.0、培养温度28℃,发酵72 h,产L-亮氨酸18.54 g/L。     

α-乙酰乳酸脱羧酶的3种固定化方法的比较

用磁性淀粉微球作为载体 ,采用溴化氰活化法、戊二醛交联法及物理吸附法固定化α 乙酰乳酸脱羧酶 (ALDC) ,并对它的理化性质进行了对比 ,得到的结果是戊二醛交联法固定法ALDC的各种理化性质最为理想 ,它的总活力为 1 660U/g ,蛋白载量为 1 2 3 .1 7mg/ g ,比活为 1 6.4 8U/mg ,活性回收率为 1 4 .92 %。它的催化最适温度为 3 0℃ ,最适pH为 5 ,连续 1 0次催化底物后其活力仍保持 77.2 % ,且其半衰期为 2 1 6d。     

α-分离公理的研究

在L-拓扑空间介绍了α-T0,α-T-1,次-α-T0分离公理.给出了它们的等价刻画,并且指出了α-T0意味着α-T-1和次-α-T0,证明了α-T0,α-T-1和次-α-T0具有遗传性.     

人γ-干扰素基因工程菌培养条件的研究

对表达重组人γ-干扰素的基因工程菌的培养条件进行了较详细的研究．确定了最佳的培养及诱导时间，并利用正交试验设计，对影响工程菌生长和重组人γ-干扰素表达的条件如培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的量及摇床转速、装液量、接种量、pH等进行了优化．结果表明，在优化条件下，表达的γ-干扰素包涵体占菌体总蛋白的60％以上，每升发酵液可获得包涵体约为1．6g．     

α-葡萄糖苷酶产生菌的筛选及其产酶条件的研究

从某些霉菌中通过筛选获得了一株产α－糖苷酶活力较高的黑曲霉菌株Ｈ－８；采用均匀设计试验法探讨了该菌株产酶的最适培养条件。研究结果表明，在适宜条件下本菌产酶水平可达６９７．４Ｕ／ｇ，具有实际应用前景。     

L-谷氨酰胺高产菌株的选育和发酵条件优化

采用嗜乙酰乙酸棒杆菌(Corynebacterium acetoacidophilum)ATCC13870为出发菌株，经亚硝基胍、硫酸二乙脂和^60Co诱变处理，定向选育出一株L-谷氨酰胺产生菌G21—8．在适宜的条件下积累L-谷氨酰胺，平均质量浓度为32．5g／L，最大时可达36．7g／L，谷氨酸产量较少．     

白豆中α-淀粉酶提取条件的研究

比较了几种豆类中α-淀粉酶的活力,结果表明,白豆中α-淀粉酶含量较高.对白豆发芽前后α-淀粉酶活力的测定结果表明,发芽第三天的白豆α-淀粉酶含量最高.同时对提取时pH、温度、提取时间及金属离子对酶活力的影响进行了研究,确定出白豆中α-淀粉酶的最佳提取条件为:pH7.0,温度40℃,提取时间1.5 h,金属离子Ca2 、Mg2 对酶的提取有激活作用.     

快速筛选耐酸性α-淀粉酶生产菌株的平板透明圈法

以可溶性淀粉为底物配制固体培养基，然后低温处理(4℃)平板培养物，产淀粉酶的菌株其菌落周围的培养基由白色变成灰色且透明．该方法不具有破坏性，不需要预先接种菌落，能直接发现和分离分解利用淀粉的微生物．利用淀粉琼脂平板还能快速验证淀粉酶的耐酸性，根据在pH4．2和pH6．0的琼脂平板上透明圈的直径d与淀粉酶活力的对数InA的关系，求出淀粉酶在pH4．2和pH6．0时的淀粉酶活力．pH4．2时比pH6．0时的比值大，说明该淀粉酶产生菌的耐酸性较强．     

α-硫辛酸及其R型异构体的合成

以6,8-二氯辛酸乙酯、硫化钠为起始原料,甲醇和水作为溶剂合成中间产物硫辛酸乙酯,水解酸化得外消旋α-硫辛酸。外消旋产物利用R-（＋）-α-甲基苄胺为拆分剂,在甲苯溶剂中考察不同原料配比下ALA的手性拆分效果,确定了最佳的拆分条件。结果表明：在反应温度40℃,甲苯溶剂量30 mL,n（PEA）∶n（ALA）=0.5∶1的条件下,进行非对映体盐法拆分,产物（R）-（＋）-ALA的收率达到53.0%,旋光纯度达到98.6%。其结构经1H NMR、GC-MS和IR表征。     

甾体C11α—羟化菌株AF9612发酵条件的研究

论文讨论了发酵工艺条件（培养基、种龄、通风量、预诱导作用、温度、ＰＨ值、接种量、度物）对转酮酶缺陷菌株ＡＦ９６１２羟化能力的影响，初步确定了最佳发酵工艺条件，在底物质量分数为２．５％时，转化率达到５０％。     

新型耐酸性α-淀粉酶液态发酵条件的研究

通过基因工程技术导入了产生耐酸性α-淀粉酶和糖化酶的多考贝融合基因而获得的白曲酶基因工程菌株TR12作为试验菌株，分别在摇瓶条件下和2L通气发酵罐上进行耐酸性α-淀粉酶的液态发酵工艺条件的试验研究。正交试验结果表明，优化摇瓶发酵培养基配方A3B3C2D1，即玉米粉4％，玉米浆1.5％，黄豆粉2％，麸皮4％，摇瓶产酶活力81.69u/mL，2L发酵罐的产酶活力达到了83.6u/mL的水平。     

α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株的筛选与鉴定

从富含淀粉的土样中,初筛出22株产α-环糊精葡萄糖基转移酶菌株,然后用透明圈法筛选出3株酶活力较高的菌株,最后绘制酶活力曲线,得到一株酶活力为0．64U／mL的菌株N1．通过菌落形态、显微观察和生理生化特性,鉴定N1为肠杆菌科的产酸克雷伯氏菌．     

核苷类药物中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸的合成

2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸是酶法合成核苷类药物的重要中间体,以往的化学合成法立体选择性不高,笔者以α/p混合构型的1-氯-3',5’-二(O-对氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖为原料,采用结晶诱导不对称转化技术,合成了单一构型的2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸盐,HPLC测定其α构型含量为96.8％,总收率82.14％.考察了反应物投料比,反应时间,反应温度等因素的影响,得到了较佳工艺条件为:投料摩尔比为1∶3,-5～0℃下结晶诱导反应23 h然后在含有3％环己胺的甲醇溶液中,45℃下反应36 h脱除保护基.该工艺反应条件温和、操作简单、产物立体选择性好且收率高,是经济价值较高的合成路线.     

一种耐高温α-淀粉酶高产菌株的选育方法

以一株产耐高温α-淀粉酶菌株（地衣芽孢杆菌）为出发菌株,经过原生质体制备后由NTG（亚硝基胍）药物诱变,从大量突变株中筛选获得一株高产、稳定的耐高温α-淀粉酶产生菌.摇瓶发酵酶活由选育前的2800u/ml提高到了4100u/m左右,提高了近45%.     

核苷类药物中间体2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸的合成

2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸是酶法合成核苷类药物的重要中间体,以往的化学合成法立体选择性不高,笔者以α/β混合构型的1-氯-3′,5′-二(O-对氯苯甲酰基)-2-脱氧-D-核糖为原料,采用结晶诱导不对称转化技术,合成了单一构型的2-脱氧-α-D-核糖-1-磷酸盐,HPLC测定其α构型含量为96.8%,总收率82.14%.考察了反应物投料比,反应时间,反应温度等因素的影响,得到了较佳工艺条件为:投料摩尔比为1∶3,-5～0℃下结晶诱导反应23h然后在含有3%环己胺的甲醇溶液中,45℃下反应36h脱除保护基.该工艺反应条件温和、操作简单、产物立体选择性好且收率高,是经济价值较高的合成路线.     

人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因的亚克隆及表达

将人参皂苷-α-鼠李糖苷酶基因亚克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K,再将构建后的表达载体电转化到毕赤酵母GS115中,并诱导表达该基因。结果显示,重组酵母菌在甲醇体积分数为0.5%,72 h培养后,所提取的酶蛋白经酶活性检测,发现具有人参皂苷-α-鼠李糖苷酶的活性,经SDS-PAGE分析,确定其分子质量为52 ku,与理论值基本相符,表明该基因得到了表达。