已酸乙酯酯化菌及酶研究新进展

本文概述了针对浓香型固态白酒发酵周期长，优质品率低，液态白酒存在“两低、一高”这一老大难问题，为解决这一难题，中科院成都生物研究所名酒研究组近１０年来步入研究酯化功能菌、酯化酶的基础研究和应用研究，近期开发出高效优质生产浓香型酒的酶工程新技术，经国内南北方生产上的典型性试验观察，证明能大幅度提高优质品率和缩短发周期，从而结果了浓香型酒优质品率低的历史。     

一株酯化功能菌分离鉴定及酶学特性研究

从国家级重点文物遗产\     

根霉酯化菌CS825己酸乙酯酯化条件的研究

以根霉CS825为酯化菌，采用不同培养基，就常法和固定化方法对其己酸乙酯的酯化条件进行了研究，结果表明，固定化细胞的酯化效果不理想；用有机溶剂处理菌体细胞，有机相酯化2天，己酸乙酯酯化率可达98%，在无溶剂相系统中酯化30天，酯化率可达70%以上。后者酯化速度虽慢，但后处理工艺简单，不会将有机溶剂的敏感气味带入酒中，特别适合白酒生产。     

合成己酸乙酯酯化酶产生菌的鉴定及产酶条件优化

筛选到1株浓香型酒曲来源且己酸乙酯酯化性能较强的红曲霉并进行菌种鉴定。在形态学鉴定的基础上,通过ITS序列和β-微管蛋白基因序列构建系统发育树,初步鉴定为紫色红曲霉,编号为YJX-8。研究菌株YJX-8最佳产酯化酶条件及酯化酶底物特异性,结果表明,其最适液态培养基组分是:蔗糖90 g/L、黄豆饼粉25g/L、MgSO_41 g/L、NaH_2PO_41 g/L;最适培养条件是:pH 4.5、30℃、180 r/min、6 d;在最优条件下,酯化酶酶活达到(1.177±0.009) U/mL,酶活提高4.56倍。红曲霉酯化酶对己酸具有很强的选择性。     

酯化红曲的筛选和酯化酶酶学性质研究

从洋河大曲中筛选到l株具有较高酯化活力的红曲霉,经26S RNA分子鉴定为紫红曲霉(Monascus purpureus),命名为YHM-6.YHM-6菌株能分别耐受8‰的乳酸和10 ％vol的酒精.以YHM-6为出发菌株,生产得到酯化红曲粗酶制剂催化己酸合成己酸乙酯具有很强的专一性和选择性.结果表明,其最适催化温度为35℃,最适催化pH值为3.5,最适催化酒精浓度为28 ％vol,最适己酸浓度为1％,其适合于浓香型白酒和黄水酯化液的生产.     

一株产己酸乙酯酯化酶霉菌的分离鉴定及产酶条件研究

从浓香型大曲中分离得到1株产己酸乙酯酯化酶霉菌,经Biolog微生物自动分析系统鉴定为黄曲霉。在液体发酵培养基中,36℃、150r／min恒温振荡培养72h,发酵液酶活可达6．75u／mL。对该菌株产酯化酶的培养条件进行研究,结果表明,以黄豆粉为N源,淀粉为C源,初始pH6．0,36℃下培养72h,酶活可达9．16u／mL。     

酯化酶动力学研究

对红曲霉、大曲以及根霉菌对单一酸(乙酸、己酸、乳酸、丁酸)和混合酸(四大酸按1:1:1:1混合)的酯化效果进行了研究,结果表明,红曲霉能促进己酸、丁酸及混合酸与乙醇的酯化作用,生成的酯类物质均为己酸乙酯,而且酯化能力极强;大曲能促进己酸、丁酸及混合酸与乙醇的酯化作用,生成的酯类物质均为己酸乙酯,并且能促进乙酸与乙醇的酯化生成乙酸乙酯;根霉能促进己酸和混合酸与乙醇的酯化作用,生成少量的己酸乙酯和乳酸乙酯.     

横梗霉产酯化酶的纯化及酶学性质

在研究浓香型白酒的过程中为了提高出酒率以及优质酒率可以从酯化酶的研究入手,酯化酶对提高出酒率和产优质酒有着积极的影响。本实验从五粮液大曲中经过严格的筛选得到一株高产酯化酶的菌株横梗霉。纯化分离横梗霉酯化酶发酵液使用盐析、透析、层析等步骤得到纯化的酯化酶,纯化提高到35.66倍,且具有2.54%的活性回收率,相对分子质量约为43000 u。通过酶学性质研究得出,酯化酶作用时的最佳温度是40℃,存在热敏感特性;60℃条件下反应30 min后有67.97%酶活残留;当p H为6～8时,酶活性较佳,当p H达到7.5时,最优;使用纯化后的酯化酶进行酶学性质研究发现金属离子对酯化酶有抑制作用的是Fe~(2+)、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)对酯化酶。得到结论该横梗霉所产的酯化酶有着高产、耐热性差、对热敏感、具有良好的耐碱性的性质,在使用过程中应该注意高温以及酸性环境对活性的影响。     

高活性红曲酯化菌的分离及在黄浆水酯化技术中的应用研究

成功地从宋河酒厂优质大曲中分离、筛选出了SY—5高活性强酯化菌株,并经试验找到了在黄浆水中的最佳酯化条件,如酸度、时间、温度、酒精度及接种量等.酯化后的黄浆水应用到生产上,对提高白酒总酯含量及优质品率行之有效.     

大曲中酯化菌的分离及在黄浆水酯化技术中的应用研究

大曲中酯化菌的分离及在黄浆水酯化技术中的应用研究任鹿海，孙前聚，丁超成，田以清，李学思，翟公先（河南省宋河酒厂）三ＳＹ－５麸曲酯化黄浆水生产性应用试验ＳＹ－５麸曲黄浆水酯化液在生产上应用有多种方法，其最终目的是增加酒中总酯的含量，提高酒的质量。应用方...     

裂褶菌(Schizophyllu.commune)酯酶的分离纯化及酶学性质研究

酯酶（esterase,EC3.1.1.1）在食品工业应用广泛。裂褶菌（Schizophyllum commune）ZM37.8的发酵液经85%饱和度的硫酸氨沉淀、DEAE Cellulose52处理后分离纯化得到一种酯酶,该酶分子量大小约为41.2ku;最适反应温度为50℃,70℃保温30min酶活保留70%,有较好的热稳定性;最适作用pH为6.4,pH在5.4～7.4之间较稳定,有较好的耐酸性;Co2＋、Cu2＋、Zn2＋、Li＋、Hg2＋对酯酶有强烈的抑制作用,而Mn2＋、Ca2＋和Fe3＋对其的促进作用明显;该酯酶属于无底物特异性的非特异性酯酶。酶学性质研究表明该酯酶在食品工业有良好的应用前景。     

高产酯化酶红曲菌的筛选、鉴定及酶学性质研究

该研究从研究室保藏的10株红曲霉菌株中筛选高产酯化酶菌株,通过分子生物学技术对其进行鉴定,并对其最适培养基进 行选择,最后对其所产的酯化酶酶学特性进行初步研究。结果表明,筛选获得一株高产酯化酶菌株X1,并被鉴定为血红红曲霉（Monascus sanguineus）。 其最适产酶培养基为可溶性淀粉70g/L,大豆蛋白胨20g/L,NaNO3 2 g/L,KH2PO4 1 g/L,MgSO4·7H2O 2g/L, 初始pH值4.5。采用最优培养基,在30℃、180 r/min条件下发酵4d,酯化酶活力为315.19 U/mL。 该酯化酶的最适反应温度为40℃,在 25～35℃范围内稳定性较好;最适pH值为5.0,在pH为6.0时稳定性较高;金属离子Ca2+可提高该酯化酶活性,Mg2+、Fe2+、Na+和Ag+则有 不同程度抑制作用,且Ag+抑制作用最明显。     

有机介质中酶催化合成己酸乙酯的研究

本实验研究了有机介质中CRL 脂肪酶催化己酸与无水乙醇合成己酸乙酯的酯化反应条件,并利用红外光谱、GC-MS、气相色谱等现代方法对合成的产物进行了表征。结果显示,合成的产物为己酸乙酯,其纯度为96.91%,分子量144。酯化反应在以正庚烷为反应介质,反应温度为311K,己酸与无水乙醇的摩尔比为1:1.3,己酸浓度为0.2mol/L 的条件下,反应24h 后,转化率达到94.6%。     

浓香型大曲中酯化酶测定方法的研究

对浓香型大曲的酯化酶测定方法作了研究。建立有机相反应体系来代替方法的水相反应，与传统测定方法（需反应100h）相比，它能简单、快捷检测大曲质量，适合工业化生产的要求。有机相中酯化反应条件为：在30mL正庚烷有机反应介质中，35℃的条件下，0.15M的底物酸，己酸与乙醇的浓度比为1：1.25，加入15g（干曲）的大曲，仅用24h有比较出大曲酯化力的高低。     

1株耐高温酸性脂肪酶产生菌的筛选鉴定与其酶学特性研究

以菜籽油为唯一碳源,经过富集、驯化、平板分离初筛和复筛,从长期淤积油污的食堂下水道中筛选获得1株脂肪酶产生菌CQNU 3-3。利用16S r DNA序列系统发育分析,结合形态学与生理生化特征确定CQNU 3-3为代尔夫特菌,并将其命名为Delftia tsuruhatensis strain CQNU 3-3。研究发酵条件对菌株产酶的影响发现,该菌株在初始pH为2的酸性条件下,发酵酶活力最高;发酵第1天酶活力即可达到最大,发酵温度为32~37℃较为适宜。对其产生脂肪酶的酶学特性进行分析,表明该酶最适反应pH为7.0,最适反应温度为50℃,Cu~(2+)、尿素、Mg~(2+)和Na+对酶活力有显著的抑制作用,而Zn~(2+)和EDTA可以显著提高酶活力。油脂降解率实验表明该菌株对样品中油脂的降解率可高达73.54%。     

脂肪酶产生菌产酶条件的研究

对脂肪酶产生菌进行了筛选,并对优势菌株杆菌的产酶条件进行研究.研究包括培养基组成(碳源、氮源、无机盐)、初始pH值等影响因素.通过正交试验,获得了较为优化的脂肪酶产酶条件,获得的最大酶活为68.58 U/mL.     

木薯交联酯化麦芽糊精的抗酶解性能及生理功能

采用复合酶研究了木薯交联酯化麦芽糊精的抗酶解性能,交联酯化作用降低了麦芽糊精的酶解速率,DE值为10.20时其抗性组分含量为23.57%。糖尿病小鼠血糖和血脂调节实验结果表明,木薯交联酯化麦芽糊精略微降低糖尿病小鼠的血糖水平;可以显著降低总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平,升高密度脂蛋白水平;提高肠内丙酸和丁酸含量。     

大曲中酯化菌的分离及在黄浆水酯化技术中的应用研究

大曲中酯化菌的分离及在黄浆水酯化技术中的应用研究任鹿海，孙前聚，丁超成，田以清，季学思，翟公先（河南省宋河酒厂）“大曲中酯化菌的分离及在黄浆水酯化技术中的应用研究”是根据豫科技字（９１１０８０２０１）号文件下达的“继续提高河南省名优白酒质量关键技术研...     

红曲酯化菌21-3选育及特性研究

以本所分离保藏的9株红曲霉为出发菌株，经紫外线诱变，选育出性能稳定、酯化力强的红曲酯化菌21-3（Monascus pilosus），酯化力约为低温曲和次高温曲的2．1倍，约为高温曲的12．5倍。试验表明：能促进己酸、丁酸及混合酸与乙醇的酯化作用，生成的酯类物质均为己酸乙酯，且酯化能力极强。在培养基中加入适量乙醇，有利于21-3的生长，加入适量乳酸或与乳酸菌共生，有利于酯化酶的合成。