产淀粉酶芽孢杆菌的分离和鉴定

从土壤中分离筛选出产淀粉酶的菌株,经淀粉培养基初筛后,采用DNS法对发酵提取的粗酶液进行总酶活和α-淀粉酶活力的测定,通过形态观察和生理生化反应对筛出的菌株进行鉴定。结果表明:分离到4株产淀粉酶芽孢杆菌,测得其透明圈直径与菌落直径比值在1.7~3.5之间,其中有2株菌株产淀粉酶能力较高,总酶活达到19.760 U/mL和15.432 U/mL;4株芽孢杆菌所产α-淀粉酶酶活在6.4 U/mL~10.4 U/mL之间。经鉴定,1株为枯草芽孢杆菌,3株为蜡样芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌的产淀粉酶能力优于蜡样芽孢杆菌。     

一株木质纤维素酶高产菌株的选育及产酶条件研究

主要通过紫外(UV)和甲基磺酸乙酯(EMS)的交替诱变的方法提高绿色木霉的产酶能力,并成功筛选到了一株产酶活性较高的菌株,其在平板筛选培养基中的透明圈直径与菌落直径之比达到2.1,传代稳定后在产酶培养基中纤维素酶活(CMCase)和滤纸酶活(FDAase)分别达到21.05U/mL和2.4U/mL。之后经培养基的优化进一步提高其酶活,最终诱变菌株在最佳产酶培养基中CMCase达到22.5U/mL,FDAase达到2.52U/mL。     

纳豆菌的分离、鉴定及产蛋白酶液态发酵条件的优化

利用奶粉豆粕培养基,采用稀释平板分离法,以H/C(透明圈直径/菌落直径)为指标,从日本传统食品纳豆中分离出9株蛋白酶产生菌。将这些初筛菌株进行发酵培养,采用Folin-酚法测定酵上清液的蛋白酶活性,选出蛋白酶活性最高的菌株H2,并依据形态特点和主要生理生化特征,鉴定为芽孢杆菌纳豆亚种(Bacillussubtilis sub.Natto)。最后以蛋白酶活性为指标,考察培养基初始pH值、温度、装液量、接种量和种龄等因素对H2菌株液态发酵的影响。结果表明,该菌株液态发酵产蛋白酶的适宜条件是:培养基初始pH值7、培养温度40℃、装液量40 mL/250 mL、接种量3%、种龄25 h。     

开菲尔粒中高产蛋白酶菌株的筛选及培养基优化

采用脱脂乳粉平板初筛法,从开菲尔粒中分离得到10株有明显水解圈的蛋白酶产生菌,对脱脂牛奶平板上透明圈/菌落直径比(HC)>2.00的KX-1、Kx-3、Kx-7三株菌通过时间-酶活曲线进行复筛,得到酶活最高(发酵30 h、酶活146.43 U/mL)的菌株Kx-7。利用单因素试验对培养基进行优化,在此基础上利用Plackett-Burman(PB)试验设计法对影响蛋白酶活性的重要因素进行筛选,结果表明果糖,酪蛋白和Triton X-100,3个因素对产酶影响显著。     

产耐酸性α-淀粉酶菌株的筛选及其固态发酵条件的优化

以酒糟为原料,应用锥虫蓝法,通过比较透明圈直径与菌落直径的比值,能较快选出目的菌株,经筛选得到1株产耐酸性-α淀粉酶的野生AS-Y菌株,其酶活达到64.3U/g。通过鉴定为曲霉AS-Y菌株,并对AS-Y菌株的固态发酵条件进行了优化。     

高产中性纤维素酶菌株的诱变选育和筛选方法

设计了一种根据水解透明圈与菌落直径之比(D／d)以初步判断菌株产酶活力大小的方法,发现菌株的液体发酵酶活的对数(lgE)和菌落透明圈直径与菌落直径之比(D／d)基本上呈线性关系.采用紫外线和γ射线对中性纤维素酶产生菌木霉ZC(39 U／mL)进行了反复诱变和大量筛选,得到了一株高产中性纤维素高产突变菌株BE40-39(99 U／mL),并对出发株ZC和突变株BE40-39的性状进行了比较.     

产气气杆菌异淀粉酶高产菌株的选育

该文以产气气杆菌为出发菌株,经紫外线和甲基磺酸乙酯(EMS)复合诱变,从大量突变株中筛选出一株产酶稳定且酶活较高的菌株UV2-10-6,酶活由最初的2.9592U/mL提高为14.82U/mL,提高了4倍.并探讨了一种高效的异淀粉酶产生菌的选育方法,为下一步培养基优化打下基础.     

产角蛋白酶菌株的筛选及发酵条件优化

采用以羽毛为唯一碳氮源的无机盐培养基,通过考察HC值(水解圈直径与菌落直径的比值)、羽毛的降解程度,筛选得到10株产角蛋白酶的菌株,经测定10株菌株摇瓶发酵液的蛋白酶活力,确定了一株产酶能力较强的菌株CJPE209,并对菌株进行鉴定,菌株CJPE209被鉴定为芽孢杆菌(Bacillus sp.),其发酵液酶活为267 U/mL。通过单因素实验,确定了菌株CJPE209产角蛋白酶的最适发酵条件:发酵周期48 h,培养基装液量25 mL/250 mL,发酵温度37℃,初始pH7,摇床转速220 r/min,发酵液酶活为337.6 U/mL,是优化前的1.26倍。     

额尔齐斯河野生丁(鐬)肠道产蛋白酶菌株的初步鉴定及产酶条件的研究

采用酪素培养基和脱脂乳培养基筛选额尔齐斯河野生丁(鐬)肠道内产蛋白酶菌株,共获得40株蛋白酶产生菌,其中8株蛋白水解圈较大,菌株编号为P1～P8.选取水解圈直径最大的P15为出发菌株,进行生理生化鉴定,同时摇瓶发酵探讨最佳产酶条件.结果:生理生化反应将P5初步鉴定为芽孢杆菌;蛋白酶最适产酶条件为:40℃、初始pH7.0、接种量3%、15mL/250mL的装液量、180r/min、培养时间35h,最大产酶量168.3U/L;添加微量Mg2 、Mn2 、Ca2 有稳定酶活的作用.     

宋河酒曲中主要霉菌的鉴定及其产酶特性的研究

霉菌是酿酒大曲菌群的重要组成部分,其产酶能力影响大曲质量。对宋河中高温大曲和高温大曲中的霉菌进行分离纯化,采用形态学和18Sr DNA基因分析对主要霉菌进行鉴定,并采用透明圈法初筛主要产酶菌,半固态发酵测酶活法研究几株初筛霉菌的产酶功能。结果表明:共得到具有明显特征的10株霉菌,9株分别归属于4个属即为青霉属(Penicillium)、曲霉属(Aspergillus)、毛霉属(Mucor)和链格孢属(Alernaria),1株未确定;初筛得到7株均能产生淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶和酯化酶的功能霉菌,其中菌株MM9产α-淀粉酶和蛋白酶的活力较高,其酶活分别为32.45U/m L和587.50U/m L,菌株Mh2产纤维素酶活力最高达11.87U/m L;菌株MM10产酯化酶活力最高为16.03U/m L。     

一株α-淀粉酶产生菌的分离、鉴定及产酶条件研究

为获得具有高产α-淀粉酶能力的菌株,从不同土壤环境中分离产酶菌株,对其进行分类鉴定和产酶条件研究。通过透明圈法初筛、3,5-二硝基水杨酸(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)法复筛分离得到产α-淀粉酶能力较强的菌株,利用形态学和生理生化反应特征,结合16S rDNA序列分析,对其进行分类鉴定;通过单因素试验和正交试验确定该菌株的最佳产酶条件。结果表明:从土壤环境中分离得到一株产α-淀粉酶菌株MF04,初步鉴定为蜡状芽胞杆菌(Bacillus cereus),其初始产酶活力为32.5 U/mL;产酶条件试验结果显示其最适培养温度为37℃,初始pH值为6.0,培养时间为72 h,经优化后液体发酵得到的粗酶液酶活力为60.2 U/mL,是优化前的85.2%。因此分离得到菌株MF04在工业生产中具备潜在开发价值。     

环麦芽糊精葡聚糖转移酶高活性的土壤微生物菌种筛选

根据环麦芽糊精葡聚糖转移酶(CGTase)催化淀粉和糊精生成环状糊精(CD),环状糊精可以吸附筛选培养基中的刚果红和甲基橙使菌落周围形成透明圈,且透明圈越大,透明度越好,CGTase的转糖基活性越高的酶催化特性,设计筛选模版,进行产酶菌株分离筛选。经初筛、复筛得到了YS-19和YS-40的2株转糖基活性较高CGTase菌种,酶活分别为2.90U/mL和3.15U/mL。     

酒曲中高产蛋白酶和α-淀粉酶霉菌菌株的筛选与分子鉴定

白酒酒曲中的蛋白酶和α-淀粉酶在酒类的糖化发酵过程中起到了重要作用,能够有效地水解原料,加快发酵速率。对从酒曲中获得的30株霉菌进行蛋白酶和α-淀粉酶产生菌的筛选,结果表明,产蛋白酶的菌株有15株,占全部测试菌株的50%;产α-淀粉酶的菌株有9株,占全部测试菌株的30%。其中菌株Y27具有最好的蛋白酶活(酶活性为324.72 U/m L)和α-淀粉酶酶活(225.76 U/g干曲)。因此,Y27菌株具有很好的酿酒开发潜力。系统发育分析表明,菌株Y27与Aspergillus oryzae同源性最高,其序列相似性为99.8%。此研究为米曲霉应用于酿酒工业提供了思路。     

高产蛋白酶细菌的分离筛选及其种类鉴定

从广东、河北、辽宁、湖南、江苏等省份采集土壤样品9个,采用稀释涂布的方法共分离到细菌菌株44株,利用平板透明圈法对44株细菌菌株产蛋白酶能力进行初步筛选,16株菌株出现了明显的透明圈,菌株G1-b、GD-2-2、HX-B-1的蛋白酶活性最强,透明圈/菌落直径比(HC)在3.5以上;比色法测定产酶活性强的3株菌株的蛋白酶酶活力,GD-2-2菌株的产酶能力最强,酶活力达到447.6U/mL。通过对细菌GD-2-2菌株形态学观察、生理生化实验,结合相关文献,初步鉴定菌株GD-2-2属于芽孢杆菌属。对菌株GD-2-2的 16S rDNA序列分析表明,该菌株序列与细菌Bacillus licheniformis strain YB915 (GQ996726.1)的16S rDNA序列同源性达100%,综合形态学观察和生理生化实验结果,鉴定GD-2-2菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。     

山河陈醋大曲淀粉酶系分析

从山河陈醋大曲中用透明圈法筛选得到具有较高淀粉酶活力的7株细菌和5株霉菌,经鉴定,细菌均为芽孢杆菌属(Bacillus),编号:X17,X4,X1,X7,X20,X5,X8,霉菌中编号M4,M13,M17的菌株为曲霉属(Eurotium),编号M7的菌株为犁头霉属(Absidia),编号M1的菌株为毛霉属(Mucor)。分别接入麸皮培养基进行纯种发酵,对淀粉酶系分析。结果:山河大曲的α-淀粉酶活力为1.540U/g,β-淀粉酶活力为215.622U/g,葡萄糖淀粉酶活力为816.815U/g,淀粉脱支酶活力为0.073U/g;细菌中X5的α-淀粉酶活力最高为4.006U/g,X7的β-淀粉酶活力最高,为48.096U/g,X1的葡萄糖淀粉酶活力最高,为792.824U/g,X1的淀粉脱支酶活力最高,为0.064U/g;霉菌中M4的α-淀粉酶活力最高,为6.238U/g;M13的β-淀粉酶活力、葡萄糖淀粉酶活力、淀粉脱支酶活力最高,分别为234.664,1204.368,0.101U/g。     

枯草芽孢杆菌发酵小米糠对其抗氧化肽含量与抗氧化活性的影响

为提高小米糠的附加值,本实验以多个枯草芽孢杆菌为起始菌株,透明圈直径与菌落直径之比（HC值）为初筛指标,通过酪蛋白平板培养法进行高产蛋白酶菌株的初步筛选。将初筛所获得菌株在小米糠基础培养基上进行发酵,对其发酵上清液的总蛋白酶活力、多肽含量及总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）进行测定,进一步筛选出最适菌株。用此菌株对小米糠进行发酵,并对其最适发酵时间及上清液的抗氧化活性进行测定。结果表明：NattoD-3为最佳发酵菌株,其产蛋白酶活力为90.22 IU/mL,发酵小米糠72 h时所获得发酵上清液4 种体外抗氧化活性相对最高,分别为T-AOC值38.04 U/mL、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率75.37%、总还原力0.18及Fe2+螯合能力44.34%,最终发酵上清液的多肽含量为4.28 mg/mL,纤溶酶活力为522.64 IU/mL。     

鲢鱼鱼露酿造用米曲霉的筛选研究

以筛选酿造鲢鱼鱼露的米曲霉为研究目标,从酱油曲精中分离得到68株菌株,初筛确定10株具有典型米曲霉形态且在蛋白酶产生茵培养基平板上有液化圈的菌株.分别测其蛋白酶酶活,筛选出4株具有较高蛋白酶活力的米曲霉菌株.分别以上述4株菌株作为发酵菌株进行三级筛选,发酵后测其α-氨基氮的含量,结果得到1株发酵后α-氨基氮含量高的菌株,达0.963 g/100 mL,并将该菌株命名为Aspergillus Oryzae L-9.     

一株高产淀粉酶嗜盐海洋菌的筛选鉴定及其发酵条件研究

采用透明圈法从本实验室保存的40株海洋菌中,筛选得到15株具有淀粉酶活性的菌株,其中编号为399S3-11519的菌株具有较高的淀粉酶生产能力.通过16SrDNA分子鉴定,并结合菌落形态与KOH鉴定,确定其属于芽孢杆菌属.随后,对该菌株的发酵条件进行研究,确定其最佳碳源为淀粉,最佳氮源为大豆粉,最适温度37℃,最适pH值为7.0,最佳盐浓度5％,最佳底物浓度2％,最佳装液量50mL(250mL摇瓶),最佳接种量为3％;正交优化试验证明碳源和盐度对该菌产酶有较大影响,在最佳产酶条件下,酶活可达到293.8U/mL,比优化前提高了0.8倍.     

原生质诱变选育高产酸性α-淀粉酶黑曲霉菌株

以产酸性α-淀粉酶的黑曲霉0-2-1为出发菌,选用180s的紫外线照射剂量对其孢子原生质体进行诱变,利用固体平板透明圈法初筛和发酵液酶活测定复筛;筛选到3株酶活有较大提高的突变株UV9、UV17、UV31,其酸性α-淀粉酶活力分别为184.66、162.73、167.31U/mL,比出发菌株分别提高了54.9%、38.1%和42.0%,遗传稳定性实验证明3株突变株传代过程中均保持相对稳定的较高酸性α-淀粉酶活力。     

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF(苯甲基磺酰氟)及DTT(二硫苏糖醇)对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。