呼吸道合胞病毒重组F蛋白疫苗的制备及免疫效果评价

目的 制备呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)重组F蛋白疫苗,并对其免疫效果进行评价。方法 制备两种基于RSV F蛋白的RSV疫苗：一种是以细菌样颗粒(bacterial like particle,BLP)为佐剂的黏膜疫苗,一种是以Al(OH)₃为佐剂的注射疫苗。将40只雌性BALB/c小鼠随机分为4组：BLP-F、BLP对照、AL-F和AL对照组,每组10只,BLP-F和BLP对照组经鼻内接种,AL-F和AL对照组经皮下接种。分别于第0、14、28天各免疫1次。末次免疫后2周,ELISA法检测小鼠血清IgG抗体效价及鼻洗液中IgA抗体效价,空斑试验检测中和抗体效价。结果 两种疫苗均诱导了高水平的血清结合抗体和中和抗体,注射疫苗的诱导能力强于黏膜疫苗,注射疫苗可诱导血清中IgG升高,比黏膜免疫应答高约10倍,但不能诱导IgA升高,而黏膜疫苗可诱导高水平的黏膜IgA,但血清中IgG抗体相对较低。结论 两种基于RSV F蛋白的疫苗均为有前途的候选疫苗,每种疫苗均有其自身的优势。后续研究将采用联合免疫的方式评估这两种疫苗作为...     

戊型肝炎病毒ORF2抗原的制备及其免疫原性评价

目的制备戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)ORF2抗原,并对其免疫原性进行分析。方法通过基因合成获得HEV ORF2目的基因,构建重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中优化表达;采用超声、硫酸铵沉淀及层析纯化HEV ORF2蛋白,免疫小鼠分析其免疫原性。结果制备的重组杆状病毒滴度为1×108 PFU/m L;重组蛋白表达条件MOI为1,收获时间为5 d时,表达量最高为20 mg/L;通过纯化获得HEV ORF2蛋白纯度 95%;其疫苗组血清特异性抗体效价与PBS对照组比较差异有统计学意义(P 0. 05)。结论成功表达并纯化了HEV ORF2蛋白,该纯化方法可获得纯度较高的目的蛋白,且制备的HEV ORF2蛋白具有很好的免疫原性,可用于制备和开发预防性疫苗。     

人呼吸道合胞病毒纳米抗体的构建及活性

目的 通过免疫羊驼和噬菌体建库筛选出人呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus,RSV）纳米抗体（nanobodies,Nbs）,并评价其结合活性和中和活性。方法 使用RSV重组F蛋白免疫2只羊驼,构建噬菌体文库,筛选得到纳米抗体的骨架区（framework region,FR）和抗原互补决定区（complementarity determining region,CDR）序列,将序列重组构建出3株RSV纳米抗体,使用Ni-NTA亲和层析纯化后,ELISA法检测纳米抗体的结合活性,RSV A2株评价纳米抗体的中和活性。结果 3株纳米抗体BF-42、BF-46、Fh-24相对分子质量约为17 000,纯化后抗体纯度约为95%;BF-42、BF-46浓度为0.16μg/mL,Fh-24浓度为32 ng/mL时仍有结合活性,三者结合能力存在剂量依赖性;3株纳米抗体浓度为450μg/mL时,均可保护50%Hep2细胞免受病毒感染,出现50%致细胞病变效应（cytopathic effect,CPE）,能够有效中和病毒。结论 构建的3株纳米抗体具有较高的结合活性和一定的中和能力,为RSV纳米抗体的应用奠定了基础。