融合蛋白CR2-GDH固定化及不对称还原制备(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯

比较介孔分子筛材料SBA-15、MCM-41、海藻酸钙、改性二氧化硅4种载体固定化融合蛋白CR2-GDH其酶固载量和酶活回收率,选择SBA-15为固定化载体。研究固定化条件对固定化融合酶量的影响以及固定化酶的稳定性,固定化酶在双相体系催化不对称还原反应。结果表明,在pH值为5.5、酶浓度为1.4mg/mL、反应1h条件下,固定化酶量为27.7mg/g。加入25mmol/L的Ca²⁺,固定化酶的酶活回收率由58.6%提高到78.1%。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性显著提高,40℃条件下酶活回收率提高19.1%。固定化酶水相中反复使用7批次后,剩余活性仍超过30%,具有较好的操作稳定性。与游离酶相比,固定化酶更耐受烷烃类有机溶剂。在水/有机溶剂双相反应体系中,Ca²⁺/SBA-15固定化酶和游离酶催化相比,产物得率提高23.8%。     

无融合标签的蜂毒肽在大肠杆菌中的表达纯化和抑菌研究

蜂毒肽（Melittin,MET）是一种具有抗炎和抗肿瘤作用的小分子活性肽,其可溶性表达和无融合标签活性肽的纯化一直是个难题。基于类弹性蛋白（Elastin-like polypeptide, ELP）的相变特性和内含肽（Intein）的自裂解特性,构建重组表达菌株Escherichia coli/pET21a-ELP-Intein-MET,在E. coli BL21（DE3）宿主细胞中实现融合蛋白的可溶性表达。重组菌破碎上清液经过温度诱导的可逆相变循环纯化以及融合蛋白自裂解的pH、温度和时间优化,在pH 7.0、30 ℃的条件下自裂解32 h,再经过凝胶层析纯化,得到了纯度高于95%的无融合标签的蜂毒肽。纯化后的蜂毒肽用于Staphylococcus aureus、Bacillus subtilis 168和Escherichia coli JM109的抑菌研究,发现其对革兰氏阳性菌的抑制作用强于革兰氏阴性菌,蜂毒肽在3种菌中的最小抑菌质量浓度分别为12.5、50.0、100.0 μg/mL。作者通过引入弹性蛋白和内含肽,不仅实现了蜂毒肽的高效可溶性表达,且通过较简便的蛋白质分离纯化获得无融合标签的蜂毒肽,该纯化活性肽的抑菌功能与商品化的蜂毒肽相似,有望为蜂毒肽的工业化制备提供新的思路。     

蜂毒肽在大肠杆菌中的高效融合表达与纯化

生物法制备蜂毒肽是实现大量制备蜂毒肽的关键技术。为实现蜂毒肽的高效表达,通过化学法合成含信号肽、前导肽和成熟肽的蜂毒肽基因promet和蜂毒肽成熟肽基因met,与麦芽糖结合蛋白基因mbp连接,克隆到载体pET15-b,构建重组质粒pET-MBP-MET和pET-MBP-proMET。重组质粒转化大肠杆菌Escherichia coli BL21（DE3）,以0.1 mmol/L IPTG进行诱导,30 ℃下过夜诱导,融合蛋白MBP-MET、MBP-proMET在大肠杆菌中以可溶性形式高效表达。两种目标蛋白质经Ni柱和Dextrin Sepharose HP两步亲和纯化,得到了纯度达90%以上的融合蛋白MBP-MET、MBP-proMET,培养1 L大肠杆菌菌液能制备约20 mg纯蛋白质。通过牛津杯抑菌实验发现,MBP-MET、MBP-proMET能明显抑制细菌生长,产生明显的抑菌圈,MBP-MET和MBP-proMET最低抑菌浓度（MIC）分别为100 μg/mL和140 μg/mL。本研究首次实现了蜂毒肽的高效表达,并进行了抑菌功能验证,为生物法制备蜂毒肽提供了高效、安全的合成途径。     

谈高层建筑电气竖井施工技术

在高层建筑中,电气竖井是配电系统的中枢,多数强电干线系统和各层电气控制设备都集中在电气竖井内,故电气竖井施工的质量直接影响整个建筑物各项功能的正常发挥,要提高电气竖井安装质量,就必须深入研究电气竖井的施工技术。     

溴含量对TBBPAER/DDS固化体系的影响

采用傅立叶变换红外光谱法(FT—IR)结合差示扫描量热法(DSC)研究了不同的溴含量对四溴双酚A环氧树脂／二氨基二苯砜(TBBPAER／DDS)固化体系的固化反应速率常数k、转化率α及固化产物的玻璃化温度(Tg)的影响。理论上,随着取代基体积和极性的增加,k值、α值及Tg值均应增加,但实验结果显示却与此相反,由此得出结论：溴含量所引起的空间位阻作用对该固化体系的固化过程起着重要的作用。选择环氧树脂的含溴量可以控制反应速度、转化率并得到具有不同Tg值的固化产物。     

浅谈我国城市住区的生态规划

以城市住区生态规划的产生背景为基础，分析了我国城市住区规划中存在的主要问题，进而提出了我国城市住区生态规划的实现对策。     

城市生态住区的发展现状及在我国的发展趋势

在分析了城市生态住区的产生背景和主要特征的基础上，对国内外城市生态住区的发展现状进行了总结，并展望了我国城市生态住区的发展趋势。     

水性丙烯酸酯胶粘剂的合成及性能研究

甲基丙烯酸甲酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸为单体,水为溶剂合成了聚丙烯酸酯粘合剂,用DSC、GPC等对产物进行了表征,研究了反应条件、原料配比及用量对产物性能的影响。     

浅析居住区环境设计

分析了当前居住区环境设计中存在的问题,阐述了居住区环境设计的范围、手法和原则,并结合具体小区进行了实例分析,指出优秀的居住区环境设计应以人为本、博采众长,使人身处其中备感舒心惬意。     

ZXJ10交换机运行优化维护研究

基于实际的运行维护,研究了交换机双出口链路优化,呼叫实时观察工具的应用和交换机呼叫失败提示音的修正,对提高ZXJ10交换机的维护水平有促进作用。