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研究建立了一种实时荧光单引物等温扩增(RF-SPIA)技术以检测牛乳中的金黄色葡萄球菌。针对金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶(nuc)基因设计引物,对金黄色葡萄球菌进行特异性检测。结果表明,6株金黄色葡萄球菌的检测结果为阳性,而其他17株非金黄色葡萄球菌的检测结果均为阴性。RF-SPIA检测金黄色葡萄球菌纯培养物的灵敏度为2.0×101 CFU/m L,检测人工污染牛乳的检出限为6.0×101 CFU/m L。该方法特异性强、灵敏度高,能够实现对金黄色葡萄球菌的实时、快速检测,为金黄色葡萄球菌的检测提供了一条新途径。 相似文献
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建立改良环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测酸土脂环酸芽胞杆菌的方法。以酸土脂环酸芽胞杆菌的16S r RNA基因保守区域设计4条特异性引物,优化反应体系,通过荧光曲线、琼脂糖凝胶电泳和白色沉淀判定扩增结果。同时,对LAMP引物特异性、灵敏度、检出限进行研究。LAMP法在61℃,60 min内完成酸土脂环酸芽胞杆菌的检测。2株酸土脂环酸芽胞杆菌呈阳性结果,17株非酸土脂环酸芽胞杆菌呈阴性结果,表明该种检测方法具有高特异性。检测纯菌灵敏度为7.2 CFU/m L,对人工污染苹果汁样品中酸土脂环酸芽胞杆菌的检出限是18 CFU/m L。LAMP法检测酸土脂环酸芽胞杆有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点,应用前景广阔。 相似文献
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为构建一种基于链置换扩增技术(SDA)和电化学适配体传感器技术检测食品中赭曲霉毒素A(OTA)的方法,根据OTA特异性适配体设计发卡结构,并在发卡结构的茎部设置SDA反应识别位点,进行SDA扩增。将扩增产物与修饰二茂铁(Fc)的电化学探针进行杂交,使电信号发生变化,从而建立电化学适配体传感器检测OTA的方法。通过对7组不同毒素的测定评价该方法的特异性,测定其灵敏度和检出限,并与赭曲霉毒素A酶联免疫分析方法(ELISA)国家标准(GB 5009.96-2016)进行对比试验。结果表明:最优条件下,电化学适配体传感器灵敏度线性范围为0.1 pg/mL~10 ng/mL,检出限(LOD)为0.05 pg/mL。当OTA存在时,检测结果为阳性,当OTA不存在时,检测为阴性,说明该方法特异性良好。在人工加标试验中,该电化学适配体传感器的加标回收率为96.60%~99.04%,ELISA(国家标准)的加标回收率为94.00%~98.50%,该方法的加标回收率优于国家标准。结论:该方法能够快速检测食品中的OTA,具有实用应用价值。 相似文献
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目的建立环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测酸奶中嗜酸乳杆菌。方法以嗜酸乳杆菌16S r RNA保守区的基因序列为靶序列设计引物,优化建立LAMP反应体系和程序,并研究引物的特异性,同时确定嗜酸乳杆菌的灵敏度和检出限。结果本方法可通过凝胶电泳和离心后焦磷酸镁白色沉淀检测反应结果,检测时间为5.5 h,灵敏度为62 CFU/m L,人工污染酸奶样品的检出限为120 CFU/m L,12株非嗜酸乳杆菌细菌非特异检测结果均为100%。结论该方法灵敏性好、特异性强、操作简单、耗时短,可适合于酸奶中的嗜酸乳杆菌的快速测定。 相似文献
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以绿豆为原料,研究绿豆多糖最佳提取工艺,在单因素试验的基础上,利用Box-Behnken响应面分析法优化超声辅助复合酶法提取绿豆多糖工艺,同时探究其功能特性。结果表明:绿豆多糖的最佳提取工艺为水提温度95℃、水提时间186 min、超声时间32 min、料液比1∶22(g/mL),在此条件下,多糖得率为5.77%。绿豆多糖功能特性测定结果显示,绿豆多糖持水性2.89 mL/g、持油性3.07 mL/g、乳化性14.69%、乳化稳定性47.36%、起泡性34.32%、泡沫稳定性24.16%,绿豆多糖展现出较强的自由基清除能力,对DPPH·、·OH和O2-·清除率最高为78.41%、88.32%和52.66%。 相似文献
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目的:建立了一种跨越式等温扩增技术(SRCA)结合荧光染料SYBR Green I检测肉制品中猪肉掺假的方法。方法:根据NCBI中猪的线粒体序列,通过DNAMAN等软件设计SRCA的特异性引物,分别采用普通SRCA和荧光可视化SRCA的方法建立肉制品中猪肉成分的检测方法,对9个不同物种的新鲜肌肉组织样本进行实验从而验证SRCA方法的特异性,并对66份未标识猪肉成分商业肉制品进行猪肉成分的检测。结果:SRCA荧光可视法检测猪肉DNA的灵敏度为6.5 fg/μL,与传统PCR方法相比,SRCA荧光可视法的灵敏度提高了1000倍。在人工添加猪肉的混合样品中,SRCA方法检测猪肉含量为0.01%(w/w)。与NY/T 3309-2018行业标准相比,SRCA方法检测肉制品中猪肉的敏感性、特异性和符合率分别为100%、96.66%、98.48%。结论:SRCA是一种检测肉制品中猪肉掺假的灵敏、直观的方法,具有很大的应用潜力。 相似文献
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目前,建筑工程的特点是增加建筑物的高度和屋面的跨度,加大工艺设备和起吊荷载,这就要求采用桁架、拱之类的结构,利用杆、柱等承压构件.一种新型的结构——钢管混凝土结构,其断面既小而且承压能力高,能满足上述要求,最适合于作这种构件.所谓钢管混凝土就是在钢管内充填混凝土,它既合理地利用了钢材,又充分地利用了混凝土抗压能力高的特点,因而能大量地节省建筑材料,降低结构造价. 相似文献
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将CRISPR/Cas12a系统与跨越式滚环等温扩增技术(saltatory rolling circle amplification,SRCA)相结合,建立一种快速、灵敏定量检测海产品中副溶血性弧菌(Vibrio parahemolyticus)的方法(SRCA-Cas12a)。通过SRCA扩增靶标DNA,CRISPR/Cas12a系统识别靶标DNA并裂解单链报告探针,从而建立SRCA-Cas12a检测方法。分析该方法的特异性与灵敏度,并进行加标回收实验和实际样品检测。结果显示该方法可区分副溶血性弧菌和其他食源性致病菌,特异性良好。在最优检测体系下,建立了副溶血性弧菌菌液浓度的对数与荧光信号强度的线性关系,线性方程为y=1.847 2x+2.473 8(R2=0.986 6),检出限为3.6 CFU/mL(RSN=3)。在人工污染样品中副溶血性弧菌的加标回收率为95.5%~104.4%。在实际样品检测中,该方法的敏感性为100.0%、特异性为95.2%、符合率为97.2%。本研究所建立的SRCA-Cas12a方法具有特异性好、检测限低的优点... 相似文献