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人IL-10 cDNA克隆、表达及其生物学活性 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10(Human Interleukin,hIL-10)。方法 用RT-PCR自白血病细胞株K562 RNA扩增hIL-10 cDNA片段(约500bp),克隆至质粒载体pSK(+),并对克隆的DNA片段进行序列分析。用限制酶EcoRI和 BamHI消化pSK/IL-10重组质粒,分离hIL-10片段,并插入原核表达载体pBV220的相应限制酶位点,酶谱分析鉴定重组表达载体pBV/IL-10。转化菌株经42℃诱导,用SDS-PAGE和Westem blot鉴定表达的重组蛋白。表达的重组蛋白经谷胱甘肽复性缓冲液复性,用RT-PCR检测其对外周血单核细胞(PBMC)合成IFN-γ的抑制作用。结果 RT-PCR扩增的DNA片段与hIL-10 cDNA大小一致。重组质粒pSK/IL-10的DNA序列分析显示,克隆的DNA序列与文献报道的hIL-10 cDNA序列一致。SDS-PAGE表明,重组蛋白相对分子质量为18000,其表达量达菌体总蛋白的20%左右。Westem blot分析显示,重组蛋白能特异性地与抗hIL-10抗体结合,复性的重组蛋白能明显抑制PBMC合成IFN-γ。结论 已成功地构建了表达具有生物学活性的重组hIL-10(Recombinant hIL-10,rhIL-10)的工程菌株。 相似文献
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从棉籽粕中分离提取棉籽蛋白粉是棉籽副产品的综合利用方式之一。为开发利用棉籽粕这一重要的蛋白质资源,我们进行了棉籽分离蛋白粉的毒理学、营养学及对小鼠生殖机能影响的研究。本研究进行了大鼠急性毒性实验;亚慢性毒性实验;小鼠两代繁殖试验;以及棉籽分离蛋白粉的营养成分分析,卫生学指标检测和营养评价试验。结果表明:棉籽分离蛋白粉属于无毒物质,给 Wistar 大鼠连续饲喂六个月(最大添加量为30%),对大鼠肝功、肾功血钾及主要脏器的生理生化指标无显著不良影响,实验组与对照组之间无明显差别。繁殖试验结果表明,长期食用棉籽分离蛋白粉(最大添加量20%)对小鼠的受孕率、妊娠率、出生存活率、哺育存活率、仔重等繁殖发育能力无不良影响。从营养成分和氨基酸组成看,棉籽分离蛋白粉是一种品质优良,氨基酸组成较为齐全的蛋白质,其效价(PER)消化率(AD)生物价(BV)等与黄豆粉相似.因此,棉籽分离蛋白粉是一种安全无毒,品质优良的植物蛋白质资源。 相似文献
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