融合蛋白IFN-IgG Fc在乳酸乳杆菌中的表达及其生物学活性研究

用乳酸菌表达有药用价值的生物学活性多肽,是当前国际上的研究热点之,对开发新的功能性食品具有广阔的前景.本文应用PCR方法将人干扰素IFN-α-2b基因与IgG Fc基因连接,并引入一段柔性连接肽,构建了融合蛋白基因IFN-IgG Fc,将融合蛋白基因克隆到原核表达载体pSC111 AE中,转化乳酸乳杆菌ATCC393进行诱导表达及鉴定,并研究了融合蛋白的生物学活性.结果表明,通过Western-Blot方法在表达上清液检测出干扰素融合蛋白,ELISA测定表明两段多肽能够保持各自的构象,基因工程乳酸菌表达的上清液可以诱导WISH细胞产生明显的抗VSV病毒的活性,其活性为1.71×103IU/ml.本文首次构建并在大肠杆菌和乳酸菌表达了IFN-IgG Fc融合蛋白,获得了能产生人干扰素的乳酸菌株,为基因工程乳酸菌及相关药物的开发研究奠定了基础.     

直线电机驱动的过临界点自锁夹紧绿色装置

新型夹紧装置由直线电机驱动、面积效应力放大和铰杆临界点自锁机构等组成。工作原理是利用直线电机产生驱动力,通过基于帕斯卡原理的面积效应将力放大,然后作用于铰杆并使铰杆过临界点使机构产生自锁,夹紧工件并对其加工。此设计具有无泵无油箱,充分利用直线电机和面积力放大效应装置等的优点,具有基本无污染、能源利用率高、自锁性能好的优点。     

一步式QuEChERS方法结合高效液相色谱-串联质谱法测定牛肉中25种磺胺类药物残留

建立了一种基于一步式QuEChERS自动提取和净化的技术,结合高效液相色谱-串联质谱(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry, HPLC-MS/MS)同时检测牛肉中25种磺胺类药物残留的检测方法.样品经1%乙酸-乙腈提取,以C18、...     

多环芳烃蒽在两种贝类中的检测及生物降解研究

目的 比较月亮贝(Neolamprologuscalliurus)和竹蛏(Solenstrictu)对多环芳烃蒽的富集作用,筛选获得高效蒽降解菌株。方法 采用气相色谱-质谱法(gas chromatohraphy-mass spectromety, GC-MS)检测两种贝类中蒽的含量,采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)比较6种菌株和上述菌株等体积混合得到的菌群对蒽的降解率,并对高效菌株或菌群的降解条件进行优化。结果 两种贝类均能够对蒽进行富集,在0.5和5μg/L蒽处理条件下,月亮贝对蒽的富集比竹蛏高2.75和3.34倍。6种菌株对蒽的降解率可达92.11%～95.90%,而混合菌群对蒽的降解率最高可达97.17%。菌群生物降解蒽的最佳条件为pH 6、温度27℃、降解时间15 d。另外,添加30 mg/L Mg²⁺促进了混合菌群对蒽的降解。结论 月亮贝对蒽的富集高于竹蛏,混合菌群对蒽的降解率最高,添加Mg²⁺可以促进蒽的生物降解。     

紫穗槐蜂蜜理化指标及挥发性成分测定与分析

为研究中国特色紫穗槐蜂蜜的品质特性,采用现有标准方法对紫穗槐蜜的理化指标(水分、酸度、淀粉酶值、5-羟甲基糠醛、还原糖、蔗糖)进行测定。采用顶空固相微萃取气相色谱-质谱技术对紫穗槐蜜的挥发性成分进行测定。通过对理化指标和挥发性成分进行分析,结果表明,8批紫穗槐蜂蜜样品水分含量为15.5%～17.8%,酸度为14.8～25.8 mL/kg,淀粉酶值为27.2～70.6 mL/(g·h),5-羟甲基糠醛含量不超过28.7 mg/kg,还原糖含量为65.9%～71.1%,蔗糖含量不超过2.42%,各项指标均符合国家和行业标准要求。紫穗槐蜂蜜中共发现挥发性物质78种,主要包括醛类、醇类、酸类、萜烯类、芳香类等,含量较高的物质为苯乙醇、苯乙醛、壬醛等。综合而言,紫穗槐蜂蜜具有酶值高、挥发性成分丰富的特点。     

浅谈食品微生物检测实验室的质量控制

微生物引起的食品安全问题屡禁不止,相较于化学方面的危害,生物因素危害的检测对保障食品安全的意义更加重大。由于生物指标的特殊性,检测更容易受环境的影响,食品中生物参数的检测需要在各方面都有良好的质量控制,应在有相应洁净度和压力要求的微生物实验室内进行。本文依据国家标准对微生物检测实验室的要求和各类食品中微生物指标的检测经历,并结合多年的食品微生物实验室管理经验,从微生物实验室的人员控制、试剂控制、环境控制和设备校准等方面概述了微生物实验室的质量控制,对保障微生物检验结果的科学性和准确性,规范实验室的管理,建立食品微生物检测实验室的质量控制标准等方面有积极意义。     

QuEChERS-气相色谱质谱法测定苹果中45种农药残留

建立了QuEChERS-气相色谱质谱法同时测定苹果中45种农药残留检测方法,样品以1%乙酸乙腈提取,经25 mg PSA、25 mg C₁₈和7.5 mg GCB净化,GC-MS选择离子监测(SIM)模式下检测,基质匹配外标法定量。检测结果表明,45种农药在10~200 μg/L质量浓度范围内线性关系良好,各农药的线性相关系数均大于0.995;在30、50和100 μg/kg添加水平下,45种农药的回收率在69.3%~116%之间,相对标准偏差在0.7%~7.9%之间;方法的检出限在1.5~15.0 μg/kg之间,定量限在5.0~50.0 μg/kg之间。该方法准确度高、精密度好、步骤简单、操作快捷、成本低廉,适用于苹果中农药残留的检测。     

烟草NtWRKY71基因克隆与表达分析

【背景和目的】WRKY转录因子作为一类植物特有蛋白,不仅参与植物抗病、抗逆等防御反应,而且在植物分枝发育过程中发挥重要作用。为鉴定烟草分枝发育相关的WRKY转录因子。【方法】以拟南芥分枝发育相关转录因子AtWRKY71序列为参考,在烟草基因组中进行鉴定和克隆。利用生物信息学方法分析烟草NtWRKY71理化性质和进化关系。通过qPCR和芯片表达谱分析了NtWRKY71时空表达特征和激素诱导表达模式,利用本氏烟草瞬时表达系统进行亚细胞定位分析。【结果】烟草NtWRKY71基因的蛋白编码序列为930 bp,编码一个由309个氨基酸组成的WRKY蛋白。烟草NtWRKY71含有保守的WRKY蛋白结构域。进化分析显示NtWRKY71与野生烟草WRKY71、土豆WRKY71以及拟南芥WRKY71进化关系较近。基因表达分析表明,NtWRKY71在雄蕊、雌蕊以及根中大量表达;另外,NtWRKY71受赤霉素、生长素和水杨酸的诱导上调表达。亚细胞定位实验表明,NtWRKY71定位在细胞核中。【结论】烟草NtWRKY71为拟南芥分枝调控基因AtWRKY71的同源基因,其表达受到多种激素的调控。研究结果为深入解...     

基于烟草热解差异度分析的烟叶替代方法

为便于卷烟配方维护,基于热重分析手段,建立120种烟叶的热重数据库,采用标准均方根误差NRMSE评价烟草样品之间的热解差异度。在配方烟叶间开展烟叶替代实验,针对某牌号卷烟A中9种需要被替代的单等级烟叶,通过热解差异度计算,在120种烟叶中选择与被替代单等级烟叶热解差异度最小的烟叶,形成基于热解差异度替代方案,并与人工替代方案进行对比。结果表明:(1)基于热解差异度替代方案的卷烟与原始配方卷烟热解差异度更为接近,NRMSE为3.44%,而人工替代方案的卷烟热解差异度NRMSE为4.88%。(2)基于热解差异度替代方案的卷烟与人工替代方案的卷烟相比,其与原始配方卷烟的常规化学成分和感官特性更接近,两种替代方案的卷烟与原始配方卷烟的物理指标以及焦油、烟碱和CO释放量较接近。(3)在验证实验中,针对某牌号卷烟B中5种需要被替代的单等级烟叶,通过热解差异度计算形成3种替换方案,其感官评吸和烟气分析结果表明,最佳替代方案可满足应用要求,进一步说明基于热解差异度的替代方法可达到人工替代的水平。     

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱测定牛奶中6种玉米赤霉烯酮类毒素

建立QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱同时检测牛奶中6 种玉米赤霉烯酮类毒素残留量的检测方法。样品用1%乙酸-乙腈提取,乙腈饱和正己烷除脂,C18、N-丙基乙二胺和无水硫酸镁净化,在ZORBAX SB-C18色谱柱上分离,以5 mmol/L NH4Ac溶液和乙腈作为流动相进行梯度洗脱,电喷雾离子源负离子模式扫描,多反应监测测定,基质匹配外标法定量分析。牛奶中6 种玉米赤霉烯酮类毒素在0.1～50 μg/L质量浓度范围内呈线性关系,相关系数均高于0.995;检出限为0.05～0.1 μg/kg,定量限为0.25～0.5 μg/kg。牛奶中6 种玉米赤霉烯酮类毒素的3 个加标水平的平均回收率范围为91.8%～114.5%,相对标准偏差在3.2%～14.4%之间（n=6）。