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研究了时间分辨荧光标记与检测组合式DNA芯片的方法。首先在薄玻璃片上原位合成寡核苷酸的序列片段,然后将之裁成小片,随后将带有不同DNA片段序列的小片拼接组合成组合式DNA芯片。利用4,7-二氯磺酰苯基.1,10-菲罗啉-2,9-二羧酸(BCPDA)多重标记的亲和素-生物素放大效应,建立了时间分辨荧光检测组合式DNA芯片的方法:芯片上的DNA序列经过杂交后,其互补序列末端的生物素可将多重BCPDA标记的亲和素联接,然后由BCPDA对铕离子(Eu^3+)捕获与解离来实现杂交信号差别,并可实现对正配、单碱基错配、二及三碱基错配的时间分辨荧光信号差别的检测。对BCPDA标记的系列化合物进行了荧光性能表征,并对时间分辨荧光检测与传统荧光检测模式作了比较。 相似文献
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根据大肠杆菌的特异性基因(malB),设计与筛查环介导等温扩增(LAMP)的引物,通过对甜菜碱用量、环引物的浓度、反应温度、dNTPs用量等反应条件的优化,得到较佳的LAMP反应体系,建立了LAMP实时浊度法快速检测大肠杆菌;在较优条件下,先后对9株非大肠杆菌菌株进行特异性检测和5株大肠杆菌的进行同源性检测。此外,结合课题组自行研制的多通道浊度仪,对LAMP扩增产物进行实时浊度监测。结果表明:LAMP实时浊度法检测大肠杆菌的灵敏度达16.010 ng/L,与实时荧光定量PCR的检测限相当。因此,建立与优化LAMP实时浊度法可为食品中大肠杆菌的现场快速检测提供了有力手段。 相似文献
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