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CTAB法制备超螺旋质粒DNA 总被引:1,自引:0,他引:1
研究了基因治疗用载体质粒DNA的一种非色谱的大规模纯化方法-CTAB沉淀法,并对其进行了工艺优化. 首先采用高纯过滤介质CelPure去除大量杂质,并利用CTAB浓度梯度溶液研究了不同形式DNA(超螺旋质粒DNA、切口质粒DNA、线性质粒DNA、染色体DNA)沉淀能力的差异,选择性地从蛋白质、RNA及其他形式DNA中提取超螺旋质粒DNA. 针对含有pcDNA3的DH5a菌株,确定CTAB完全沉淀超螺旋质粒DNA的浓度为2.0 g/L,由NaCl对不同沉淀的溶解能力,确定溶解沉淀的最优盐浓度为0.75 mol/L. 用此方法得到的超螺旋质粒DNA的纯度达90%以上,收率为78.94%. RNA、蛋白质残量以及内毒素均符合药品质量标准要求. CTAB对质粒DNA的沉淀效果与质粒DNA的初始浓度有关,并且超螺旋质粒DNA浓度的降低与CTAB的添加量呈一定的线性关系. 超螺旋质粒的分子量越小越不易被分离,并且结构特性比分子量在分离过程中更据主导作用. 相似文献
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溢洪道是水利工程泄水建筑物的重要组成部分,将泄槽设计为阶梯状,可以有效增加水流的紊动,造成流动掺气剧烈,增加沿程能量的消耗。针对阶梯溢洪道的结构形式,其堰顶的形状及尺寸大小,对其掺气特性起到很大的影响。运用FLOW-3D软件,对圆弧堰式阶梯溢流坝水流的掺气特性进行数值模拟。结果表明,当圆弧半径相同时,堰上水头越大,圆弧堰式阶梯溢洪道掺气发生点到堰顶的距离越大,掺气水流水深越大,消能率越低。当堰上水头一定时,堰顶圆弧半径越大,圆弧堰式阶梯溢洪道掺气发生点到堰顶的距离越小,消能率越小,掺气水流水深越大。 相似文献
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20世纪七八十年代,为促进滩涂发展,浙江省不少滩涂未经基础处理而进行简单的抛石促淤。现在,滩涂适合围垦的条件已成熟,但筑堤的难度却因未进行基础处理的抛石促淤堤而增加。以西沙门围垦工程海堤为例,分析了利用抛石促淤坝(未经地基处理)建设海堤时,基础处理方案的比选与确定。 相似文献
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文峪河灌区是山西省十大灌区之一,该灌区工程建设于1954年,主干工程现已运行几十年。但因灌区存在长期缺乏建设资金、地方政府财政困难及管理机制不够完善等问题,影响灌区效益的正常发挥,灌区的运行管理改革势在必行。介绍了灌区改革方案及实施计划,可为同类灌区改革提供依据。 相似文献
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在序批式SBR反应器中接种普通活性污泥,通过厌氧/好氧交替的运行方式,以沉降时间作为选择要素,经过人工配水快速实现污泥颗粒化(阶段Ⅰ)、实际生活污水稳定维持(阶段Ⅱ)以及提高ρ(P)/ρ(COD)强化富集聚磷菌(阶段Ⅲ)3个阶段,成功培养出聚磷能力良好的好氧颗粒污泥,并稳定运行352周期.模拟废水水质成份单一且易降解是造成好氧颗粒污泥在阶段Ⅰ后期发生膨胀的主要原因,变换水质为实际生活污水可有效控制丝状菌的过度生长,利于维持系统稳定.成熟的好氧颗粒污泥近似为球形,平均粒径0.8 mm,平均沉降速率为2.0 cm/s,SVI在17~30 mL/g,平均除磷效率在90%以上.采用荧光原位杂交技术(FISH)对颗粒污泥种群结构定量分析,结果表明,聚磷菌约占总菌的51.48%. 相似文献
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基于B/S模式的NCRE网上报名系统可提高工作效率。研究了Struts框架的工作机制及流程。给出了NCRE网上报名系统的功能设计。阐述了基于Struts的报名系统的部分实现。最后给出了系统的开发平台并展示了运行效果。 相似文献