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目的:构建菌丝霉素(Plectasin,Pt)的真核重组表达菌株,研究其在酪丁酸梭菌(Clostridium tyrobutyricum)中的表达和抑菌活性,提供一种高效,天然具有抑菌功能的新型食品添加剂和畜类养殖的抗菌制品。方法:先将启动子thl克隆到载体pMTL82151上,得到表达型质粒pMTL82151-thl,然后根据酪丁酸梭菌表达系统对密码子的偏爱性,人工合成优化后的Pt基因,再将产菌丝霉素基因Pt克隆到启动子thl的下游,构建表达质粒pMTL82151-Pt,并接合转化入酪丁酸梭菌(Clostridium tyrobutyricum),通过甲砜霉素抗性筛选阳性重组子,PCR鉴定,SDS-PAGE分析和琼脂孔穴扩散法筛选获得菌丝霉素组成型表达菌株,并进行工程菌酪丁酸梭菌(Clostridium tyrobutyricum)pMTL82151-Pt发酵表达研究。结果:thl基因与质粒pMTL82151连接,得到表达型质粒pMTL82151-thl,将产菌丝霉素基因Pt克隆到启动子thl的下游,成功构建表达质粒pMTL82151-Pt。实现了Pt基因在酪丁酸梭菌(Clostridium tyrobutyricum)中的组成型表达,SDS-PAGE分析显示,在4.4 kDa处有明显的目的条带。工程菌经发酵表达培养后取上清,对金黄色葡萄球菌ATCC25923的半抑制浓度(half-inhibitory concentration IC50)为12.74 μg/mL。结论:本研究中成功将菌丝霉素在酪丁酸梭菌中表达,为以后大批量生产和推广菌丝霉素作为食品添加剂和肉食类畜牧养殖中抗生素替代品奠定了基础。 相似文献
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通过对大学生读书会的组织和指导,总结了读书会的理想形态、追求目标和对话原则,探索了图书馆大学生读书会的组织模式和实践方法,将读者服务与大学生教育工作结合起来,突出了图书馆的教育功能。 相似文献
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介绍了细旦粘胶纤维的纺丝,纺纱,织布及印染后整理工艺流程,分析了各工序原料特点和产品要求,对生产设备进行了调整和选择,制定出从细旦粘胶短纤到仿真丝绸成品较合理的工艺参数。 相似文献
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