嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究

从高温土壤中分离得到的一株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,该菌分泌的胞外蛋白酶粗酶液经80%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdax75凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4．36倍,得率为5．3%,经SDS-PAGE电泳测得其分子量为30．6kDa。酶的最适温度与pH实验表明,该酶最适温度为65℃、最适pH为7．5,并且该酶在50℃时表现出1h以上的稳定性。该蛋白酶的活性受到丝氨酸族蛋白酶专一性抑制PMSF和金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,Zn2+能提高酶活性,因此该蛋白酶为Zn2+激活的丝氨酸族蛋白酶。     

酒精糟香菇深层发酵水溶性胞外香菇多糖的研究Ⅰ:分离纯化

采用Sevag法和蛋白酶法结合除去蛋白质,以DEAE-纤维素对香茹多糖进行组别分离,分别以蒸馏水、0.01mol·L~(-1)、0.1mol·L~(-1)和0.2mol·L~(-1)硼砂溶液为洗脱剂进行洗脱得到四个组分,其中主要是组分Ⅰ,占总糖的76.9％。以Sepharose CL-6B凝胶色谱对组分I进行分级分离,在相对粘度1.5、样品上柱体积6mL、洗脱剂流速30mL·h~(-1)的条件下,组分Ⅰ被完全分离为两个组分XGA和XGB,XGA:XGB=1:9,XGB的高效法相色谱图显示为一单一对称峰。说明采用DEAE-纤维素和Sepharose CL-6B凝胶色谱分离纯化香菇多糖是可行的。     

嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08活性中心研究

运用化学修饰方法对一株嗜热芽孢杆菌所产生的耐高温蛋白酶HS08活性中心的结构进行了研究。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性抑制剂PMSF以及金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,色氨酸和精氨酸对酶活性有重要作用,但并不位于酶的活性中心。Zn2+可使该酶活性明显提高,Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此,该酶属于金属离子激活的丝氨酸族蛋白酶。     

超声波辅助与溶剂萃取番木瓜籽油的比较研究

以番木瓜籽为原料,对2种提取番木瓜籽油的工艺和效果进行比较。通过正交试验得到溶剂法提取番木瓜籽油的最佳工艺条件为:溶剂选用石油醚,料液比1∶8(g∶m L),提取时间2 h,提取温度80℃,番木瓜籽油提取率为35.8%;超声波辅助法提取番木瓜籽油的最佳工艺条件为:溶剂选用石油醚,料液比1∶4(g∶m L),超声温度50℃,超声时间20 min,超声功率120 W,番木瓜籽油提取率为38.8%。结果表明,超声波辅助法提取的番木瓜籽油得率比溶剂法高,并且超声波辅助法比溶剂法提取的时间短、温度低,是一种短时高效的提取方法。     

嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08的化学修饰研究

分离纯化了嗜热芽孢杆菌产生的耐高温蛋白酶HS08,以SDS-PAGE凝胶电泳和Superdax75预装柱凝胶过滤,测定蛋白酶HS08的分子质量为30.6ku,同时研究了酶专一性抑制剂对酶活性的影响。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性抑制剂PMSF以及金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,而NBS、WRK、TNBS、Phenylgloxalhydrate等修饰剂对酶活性无明显抑制作用。K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+等金属离子对酶活性影响实验结果表明,Zn2+可使该酶活性明显提高,Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此,该酶属于金属离子激活的丝氨酸族蛋白酶。蛋白酶HS08的酶动力学实验表明,以BSA为底物,PMSF可使蛋白酶HS08最大反应速率Vmax下降50%,而对其米氏常数Km影响不大。     

非水溶性茶蛋白的提取工艺研究

茶叶中含有15%-30%的蛋白质,其中大部分不溶于水,易溶于碱。本文研究了采用碱法从茶叶中提取非水溶性茶叶蛋白的工艺。实验结果表明:当NaOH溶液浓度0.07mol·L-1、温度90℃、时间30min、固—液比1:40时蛋白质的提取率最高为61.1%。通过调节提取液pH值的方法制备粗蛋白,粗蛋白纯度为54.45%。     

耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺

对耐热芽孢杆菌(Thermophilicbacillus)XJT9503保藏、菌种活化、种子培养基和发酵培养基及7,25,250,3000L发酵罐的中试发酵工艺参数进行了研究,确定了耐热芽孢杆菌XJT9503高温中性蛋白酶的中试发酵工艺.在3000L发酵罐上控制罐温为46℃、转速180r/min、通气量4L/(L·min),培养18h后发酵酶活最高达13240U/mL.     

新型酸奶发酵菌种及风味物质的研究

研究了从民间发酵乳制品中分离得到的乳酸菌HL和HS的发酵特性及其在酸奶中形成的风味物质.初步鉴定HL为德氏乳杆菌保加利亚亚种,HS为嗜热链球菌属.实验结果表明,HL和HS的最适生长温度分别为45℃和38℃,当其配比为HL:HS=1:1,发酵条件为:接种量5%(v/v),温度41℃时,凝乳时间为5.4h,在此条件下发酵生产的酸奶风味物质乙醛和双乙酰含量分别为35.5 μg/g和7.05 μg/g,口感质地都较好.