九种核酸提取裂解剂对PCR扩增效率影响研究

目的 探究6种化学试剂型和3种酶型菌体裂解剂在聚合酶链式反应（PCR）扩增体系中的最大允许终浓度和不同浓度IGEPAL CA-630裂解不同种属菌株的差异。方法配制6种化学试剂型（IGEPAL CA-630、CTAB、SDS、EDTA、异硫氰酸胍和NaOH）和3种酶型（溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶K）及多个不同稀释度的裂解液，添加于荧光定量PCR体系中，分析比较Ct值差异。用IGEPAL CA-630溶液（浓度为1%和0.1%,TE为溶剂）、TE和去离子水分别裂解嗜热链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌，经荧光定量PCR扩增，比较Ct值的差异。结果在PCR体系中，IGEPALCA-630、CTAB、SDS、EDTA异硫氰酸胍和NaOH的最大允许终浓度分别为0.800‰、0.256‰、0.012 8‰、0.8 mmol/L、0.012 8 mol/L和0.64 mmol/L，溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶K的最大允许浓度分别为0.512、1.28和0.512μg/mL。IGEPAL CA-630裂解嗜热链球菌和金黄色葡萄球菌实验中，TE溶液、0.1%和1%IGEPAL CA-630的Ct值依次减...