煤层底板突水危险性评价的FDAHP-TOPSIS模型

针对我国华北型煤田煤层开采过程中严峻的底板突水问题,考虑多因糽影响煤层底板突水的发生,提出采用模糊德尔菲层次分析法(FDAHP)与逼近理想解排序法(TOPSIS)的基本理论建立煤层底板突水风险评价模型.以山东新汶煤田良庄井田与孙村井田11煤层底板奥灰突水危险性评价为例,选取断层强度指数、断层端点与尖灭点密度、含水层水压...     

一株空肠弯曲菌噬菌体vB＿Cj＿QDYZ的生物学特性和全基因组分析

空肠弯曲菌是一种重要的人畜共患病原菌,能引起人类细菌性腹痛腹泻。随着空肠弯曲菌耐药性日益严重,亟需筛选能高效裂解空肠弯曲菌的噬菌体,为应用噬菌体防治空肠弯曲菌污染提供理论基础。该研究分离一株能高效裂解空肠弯曲菌的噬菌体,将其命名为vB＿Cj＿QDYZ。电镜结果显示该噬菌体有一个正二十面体的头部(直径约100.81 nm)和一条可伸缩的尾部(长度约65.90 nm)。噬菌体vB＿Cj＿QDYZ的温度耐受范围为30～60℃,在pH值为3～12时效价较稳定。噬菌体的最佳感染复数为0.01,一步生长曲线表明,噬菌体的潜伏期是60 min,裂解期是150 min,爆发量是45 PFU/cell。噬菌体的基因组全长为130 627 bp, G+C含量为26%,共有165个开放阅读框,3个tRNA。基因组中不含毒力基因、抗生素耐药基因及过敏原基因。比较基因组学表明噬菌体vB＿Cj＿QDYZ可能是来自Eucampyvirinae亚科,Fletchervirus属的新成员。噬菌体vB＿Cj＿QDYZ是一株裂解能力较强、热稳定性和pH稳定性良好的空肠弯曲菌噬菌体,具有开发为新型空肠弯曲菌抗菌剂的潜力。     

鳆发光杆菌荧光素酶的提取、分离与纯化

建立了从鳆发光杆菌中提取纯化荧光素酶的方法。鳆发光杆菌25℃培养12h,经过超声破碎、硫酸铵沉淀等步骤后得到粗酶液,再通过DEAE Sepharose CL-6B、DEAE Sephadex A-50进一步纯化,得到电泳纯的荧光素酶,通过SDS-PAGE测得其有两个亚基,分子量分别为36、41ku。经过硫酸铵沉淀以及两步层析后,荧光素酶的纯化倍数达到100倍以上,证明该实验过程具有较好的纯化效果,为荧光素酶性质的研究和商业化应用提供了技术支持。      

美兰机场二期航站楼指廊建设按下“快进键”

正连日来,海南省重点项目海口美兰机场二期扩建航站楼工程现场呈现出一派如火如荼的建设场景:车辆往来穿梭、机械轰鸣、人头攒动。机场指挥部领导要求北京建工四建在2018年7月10日完成指廊区与中心区交接处结构施工,7月15日完成指廊区登机廊桥桩基础施工,8月5日完成登机廊桥承台基础及电气小间等施工任务,美兰机场二期航站楼指廊建设按下了快进键。     

金黄色葡萄球菌噬菌体qdsa001内溶素的特性预测及克隆表达

为获得噬菌体qdsa001的内溶素,本实验首先利用多种在线软件对内溶素lys56（GenBank：ARQ95812.1）的理化性质、信号肽、跨膜域和结构域等特性进行分析,然后选择克隆表达法制备目的蛋白。将合成的目的基因插入原核表达载体pET-30a中,构建重组质粒pET-30a-lys56,转化至大肠杆菌Rosetta（DE3）中,获得表达稳定的基因工程菌,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG）诱导表达,利用镍琼脂糖亲和层析纯化表达产物。经在线软件预测结果显示,该蛋白分子质量为35.1 kDa,无信号肽和跨膜域,仅含有一个Ami_2结构域。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析显示重组蛋白表达成功,且以可溶性蛋白的形式存在于细胞破碎上清液,分子质量约35?kDa,与预期蛋白大小一致。重组蛋白最佳表达条件为：IPTG浓度0.5?mmol/L,20?℃过夜诱导。     

荧光假单胞菌噬菌体对大西洋鲑贮藏过程中品质变化情况研究

目的 探究大西洋鲑在4℃贮藏过程中, 外源添加荧光假单胞菌及其噬菌体影响大西洋鲑品质变化相关的常见指标的变化规律, 为噬菌体在实际食品作为保鲜剂的应用提供科学依据。方法 采用色差值、菌落总数(Total viable count, TVC)、挥发性盐基氮(Total volatile basic nitrogen, TVB-N)、质构、硫代巴比妥酸(Thiobarbituric acid, TBA)、pH、剪切力、持水性等致腐能力指标对冷藏温度(4℃)条件下大西洋鲑的新鲜度变化进行综合评价。结果 4℃贮藏期间, 初期微生物生长迅速且数量变化明显, 噬菌体vB_PF_Y1-MI的加入使得鱼肉中TVC下降了大约0.07 lg ( CFU·g-1 ); 大西洋鲑TVB-N含量整体变化趋势明显呈指数型增长, pH值均呈现先下降后上升的变化趋势; 添加荧光假单胞菌组的大西洋鲑TBA值和失水率增加程度较为明显, 经噬菌体处理后增加程度有所降低。结论 噬菌体vB_PF_Y1-MI的加入, 能够降低大西洋鲑鱼肉脂质氧化速率, 可以延缓其腐败变质, 从而延长大西洋鲑保质期。     

多价噬菌体内溶素的阳离子肽修饰及抗菌效果

多价噬菌体vB＿SEqdws-315因具备对沙门氏菌和大肠杆菌的跨谱裂解能力而具有良好的应用潜力,为进一步研究其内溶素Lysin315的抗菌效果,该研究尝试构建其大肠杆菌重组表达载体并进行诱导表达。结果表明,诱导表达得到的重组内溶素Lysin315分子质量接近25 kDa,可以在膜通透剂EDTA的参与下裂解沙门氏菌和大肠杆菌,但无法单独发挥抗菌效果。该实验尝试通过将含5～15个氨基酸的阳离子短肽克隆至内溶素末端以使其摆脱膜通透剂依赖性,实现对目标菌株的直接裂解作用。构建修饰内溶素的大肠杆菌重组表达载体,经诱导表达和亲和层析纯化,获得了高纯度的3种阳离子肽修饰内溶素(Lysin315-5aa、Lysin315-10aa、Lysin315-15aa)。3种修饰内溶素均可以在体外独立发挥抗菌作用。同时,修饰内溶素Lysin315-10aa在4℃和25℃条件下对牛奶中的沙门氏菌(10⁶ CFU/mL)也具有良好的抗菌效果。该研究初步为革兰氏阴性菌噬菌体内溶素的独立应用提供了解决策略。     

城市更新中既有建筑适应性再利用设计探究

在存量时代背景下,基于城市更新的理念对城市中老旧既有建筑的适应性再利用问题进行了分析,总结出既有建筑更新中新旧体量之间的适配方式。同时以浙江省丽水市龙泉国镜药厂遗址中的部分既有建筑为例,进行适应性再利用设计探究,提出注重既有建筑的保护与文脉传承、面貌再利用及功能性适应的设计思路。旨在通过对老旧既有建筑的激活,实践可持续发展的路径与城市文化脉络的传承。     

重组大肠杆菌制备副溶血弧菌噬菌体内溶素Lys qdvp001 CHAP域及诱导条件初步优化

目的:为了利用噬菌体内溶素防控副溶血弧菌,通过克隆表达工程菌pET30a-CHAP制备目的蛋白,并将以包涵体存在的目的蛋白复性得到有活性的噬菌体内溶素蛋白。方法:首先克隆工程菌pET30a-CHAP,经 IPTG的诱导表达后,检测菌液上清中内溶素含量判断表达形式,再进行诱导条件初步优化。通过将表达的pET30a-CHAP包涵体蛋白先用洗涤剂洗涤去除杂蛋白,然后用尿素变性剂溶解,并用Ni²⁺ Sepharose^TM 6 Fast Flow亲和层析柱进行层析纯化,用EDTA、氧化型谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽等为折叠复性促进剂,经过透析制备可溶性的 pET30a-CHAP蛋白,再检测目的蛋白的抑菌活性。结果:本实验确定了重组菌内溶素的表达形式为没有活性的包涵体;初步确定最佳诱导条件为诱导温度为16 ℃,IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导时间为7 h;复性后的内溶素具有抑菌活性。结论:本研究为利用内溶素防控副溶血弧菌以及其他革兰氏阴性细菌提供了制备方法。     

1株T1样噬菌体vB_EcoS_IME18的分离鉴定及其受体分析

以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1 株噬菌体vB_EcoS_IME18（IME18）,通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用Illumina MiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基因组特征;通过筛选噬菌体抗性株分析其耐受原因,利用受体基因沉默突变实验、噬菌体斑点实验和噬菌体吸附实验验证噬菌体受体。结果表明,噬菌体IME18具有二十面体头部和非收缩性尾部,属于长尾噬菌体科,Tunavirinae亚科,T1类噬菌体;噬菌体IME18的最佳感染复数为0.01,潜伏期为5 min,裂解期50 min,爆发量高达223 PFU/cell;在体外,噬菌体IME18能在90 min内有效杀死处于对数期的BL21;噬菌体IME18基因组全长50 354 bp,G＋C含量为45.6%;蛋白FhuA、TonB在噬菌体IME18的吸附和侵染过程中发挥重要作用。