重组大肠杆菌制备副溶血弧菌噬菌体内溶素Lys qdvp001 CHAP域及诱导条件初步优化

目的:为了利用噬菌体内溶素防控副溶血弧菌,通过克隆表达工程菌pET30a-CHAP制备目的蛋白,并将以包涵体存在的目的蛋白复性得到有活性的噬菌体内溶素蛋白。方法:首先克隆工程菌pET30a-CHAP,经 IPTG的诱导表达后,检测菌液上清中内溶素含量判断表达形式,再进行诱导条件初步优化。通过将表达的pET30a-CHAP包涵体蛋白先用洗涤剂洗涤去除杂蛋白,然后用尿素变性剂溶解,并用Ni²⁺ Sepharose^TM 6 Fast Flow亲和层析柱进行层析纯化,用EDTA、氧化型谷胱甘肽、还原型谷胱甘肽等为折叠复性促进剂,经过透析制备可溶性的 pET30a-CHAP蛋白,再检测目的蛋白的抑菌活性。结果:本实验确定了重组菌内溶素的表达形式为没有活性的包涵体;初步确定最佳诱导条件为诱导温度为16 ℃,IPTG终浓度0.5 mmol/L,诱导时间为7 h;复性后的内溶素具有抑菌活性。结论:本研究为利用内溶素防控副溶血弧菌以及其他革兰氏阴性细菌提供了制备方法。     

虾类食品过敏性疾病诊断方法的建立

作者将斑点胶体金渗滤法用于虾类食品过敏性疾病的诊断,建立一种灵敏、快速、简便的诊断方法,即应用已知羊抗人IgE抗体检测人血清中特异性IgE。现将结果简述如下。1.羊抗人IgE抗体由美国Sigma公司提供。2.虾类过敏原的制备取凡纳对虾,去壳后研磨,制成丙酮粉,再经等电沉淀法纯化     

1株T1样噬菌体vB_EcoS_IME18的分离鉴定及其受体分析

以大肠杆菌BL21为指示菌分离得到1 株噬菌体vB_EcoS_IME18（IME18）,通过电镜观察噬菌体形态,并测定其最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱和体外杀菌效果;使用Illumina MiSeq测序仪完成噬菌体全基因组测序,利用比较基因组学分析噬菌体基因组特征;通过筛选噬菌体抗性株分析其耐受原因,利用受体基因沉默突变实验、噬菌体斑点实验和噬菌体吸附实验验证噬菌体受体。结果表明,噬菌体IME18具有二十面体头部和非收缩性尾部,属于长尾噬菌体科,Tunavirinae亚科,T1类噬菌体;噬菌体IME18的最佳感染复数为0.01,潜伏期为5 min,裂解期50 min,爆发量高达223 PFU/cell;在体外,噬菌体IME18能在90 min内有效杀死处于对数期的BL21;噬菌体IME18基因组全长50 354 bp,G＋C含量为45.6%;蛋白FhuA、TonB在噬菌体IME18的吸附和侵染过程中发挥重要作用。     

嗜盐性蛋白酶产生菌Virgibacillus sp. P-4的筛选鉴定及其特性分析

利用酪蛋白琼脂平板从传统虾酱中分离嗜盐性蛋白酶产生菌,经形态学、生理生化和分子生物学鉴定,确定该菌隶属于枝芽孢杆菌属Virgibacillus sp.P-4,并用此菌为后续研究菌株。结果表明,该菌最适生长温度为30~37℃,最适生长NaCl质量分数为5%~15%;所产胞外蛋白酶在20~50℃条件下酶活力较高且保持稳定,最适反应温度为40℃,当NaCl质量分数为15%时酶活力达到最高,并且所产胞外蛋白酶种类可能不只一种,但不包含巯基蛋白酶;通过分析酶解液中游离氨基酸释放速率,预测其酶切位点为Phe-、Tyr-、Lys-、His-、Pro-及Leu-。     

选择性氧化棉织物对茶多酚的吸附性能研究

采用HNO_3-H_3PO_4-Na NO_2氧化体系对棉织物进行选择性氧化处理,再与茶多酚发生吸附作用得到茶多酚改性单羧基棉织物。通过试验表明选择性氧化可明显提高茶多酚在棉织物上的吸附量,且随氧化程度增加,氧化棉织物的羧基生成量与其对茶多酚吸尽率两者变化规律相似。采用单因素法得到茶多酚吸附改性单羧基棉织物的优化工艺参数:茶多酚浓度为8 g/L,处理温度60℃,处理时间60min。通过SEM分析表明,棉织物氧化后表面产生裂纹,而经茶多酚改性其表面变得较为平整。     

青岛市雨水利用多元化和综合化分析

对青岛的降雨量现状和雨水资源利用现状进行分析,论证了青岛市雨水资源利用的可行性,进行了雨水利用的多元化和综合化分析,并初步分析了青岛市雨水资源利用各利用途径的水质限制条件和成本效益值。对青岛未来雨水资源利用进行展望,提出建设基于雨洪控制的绿色雨水基础设施,运用GSI软件提高雨水利用效率,缓解由于地下水的过分开采而带来的水资源饥荒。