酶法生产L—苹果酸的研究

本研究以保藏菌种文氏曲霉为出发菌株，经诱变选育获ＷＭ－１突变株。该菌株在合适的培养基上培养繁殖，产生大量的富马酸胞内酶，离心制备菌体作为富马酸转化用酶源，将菌体按一定的比例接入富马酸盐转化液，在一定的条件下转化为Ｌ－苹果酸盐，最后通过钙盐法提取得Ｌ－苹果酸成品。ＷＭ－１菌株具有较高的转化能力，转化率达９０％以上，转化液浓度达２０％以上，适合于工业化大生产。     

吐温/缓冲液体系中酶法合成 (R)-对氯环氧苯乙烷

利用环氧化物水解酶突变体Pv EH1Z4X4-59制备了(R)-对氯环氧苯乙烷〔(R)-p CSO〕。以E. coli/pveh1Z4X4-59全细胞作为生物催化剂,在磷酸盐缓冲液体系(Na2HPO4-Na H2PO4,100mmol/L,pH=7.0)中有效拆分250mmol/L对氯环氧苯乙烷(rac-p CSO)制备(R)-p CSO(ees> 99%)。随后,依据6种非离子型表面活性剂对E. coli/pveh1Z4X4-59全细胞酶活力和对映选择性的影响,筛选吐温-20作为最佳添加剂,构建并优化吐温-20/缓冲液反应体系。在最优反应条件下,吐温-20的添加量为4%(体积分数),E. coli/pveh1Z4X4-59全细胞的添加量为200 g/L,反应时间为12 h,初始底物浓度显著提高至800 mmol/L(123.7 g/L),获得(R)-p CSO的ees和产率分别为99%和45.7%(理论产率为50%),时空产率高达4.71 g/(L·h)。反应体系放大至100 mL后,制备4.5 g (R)-p CSO的总收率为36.3%。     

碱性脂肪酶特性的研究

本文对圆弧青霉ＰＧ３７所产碱性脂肪酶的酶学性质进行了研究。结果表明该酶的最适ｐＨ、最适作用温度及耐金属离子等特性非常适合作洗涤剂用酶。     

微生物β-甘露聚糖酶的研究进展

本文阐述β-甘露聚糖酶的来源，微生物生产方法，酶的纯化及酶学特性，同时简要介绍了β-甘露聚糖酶及其水解产物的应用。     

耐热木聚糖酶基因xyn11EM在大肠杆菌中的表达

将人工合成经密码子优化的11家族耐热木聚糖酶基因xyn11~(EM)克隆至表达质粒p ET-28a(+)中,获得重组质粒p ET-28a-xyn11~(EM)。将其转化Escherichia coli BL21(DE3),构建表达耐热木聚糖酶的重组工程菌E.coli BL21/xyn11~(EM)。用IPTG诱导表达重组木聚糖酶Xyn11~(EM)(re Xyn11~(EM)),酶活性可达47.5 U/m L。SDS-PAGE分析显示,re Xyn11~(EM)的表观相对分子质量为24 800。re Xyn11~(EM)的最适反应温度为70℃,在70℃以下稳定。最适反应p H为6.5~7.0,在p H5.0~8.0范围内稳定。大多数金属离子和EDTA对该重组酶的活性影响不大。re Xyn11~(EM)的Km和Vmax值分别为7.2 mg/m L和54.7 U/mg。结果表明xyn11~(EM)成功在E.coli中实现了异源表达,其良好的热稳定性具有较好的工业应用潜力。     

二氢杨梅素生物功效的研究

本实验采用《保健食品检验与评价技术规范》提供的方法,研究了从显齿蛇葡萄茎叶中提取的黄酮类化合物二氢杨梅素的生物功效。实验结果显示:二氢杨梅素毒性很小,其大鼠口服灌胃的最大耐受量为5.0g/kg。二氢杨梅素小鼠灌胃30d后能有效地阻止乙醇导致的肝脏GSH耗竭和MDA升高,能降低TG含量,减轻肝细胞脂肪变性等,该结果表明:二氢杨梅素有较强的抗氧化能力,还能够有效地预防乙醇性肝损伤。因此,二氢杨梅素作为天然的抗氧化剂具有良好的开发前景。     

魔芋葡甘露聚糖的酶水解工艺条件

研究了利用黑曲霉(Aspergillus niger)E-56菌株所产高活力β-甘露聚糖酶水解魔芋葡甘露聚糖的工艺条件.在单因素试验的基础上,进一步通过正交试验确定酶法制备甘露低聚糖的最佳工艺条件为:魔芋胶质量浓度240 g/L(去离子水配制),加酶量为120 U/g,50 ℃酶解8 h.在该工艺条件下,酶解液中葡甘露低聚糖的平均聚合度(DP)在1.8～1.9范围内.     

重组β-甘露聚糖酶制备低聚葡甘露糖工艺条件的优化

研究了利用自主构建的重组毕赤酵母菌株GS115/Auman26A所产β-甘露聚糖酶水解魔芋粉制备低聚葡甘露糖的工艺条件。以底物魔芋粉的水解率为指标,通过单因素试验确定酶法制备低聚葡甘露糖的酶解条件如下:加酶量60 U/g,酶解温度40℃,魔芋粉质量浓度30 g/L,酶解时间5 h。魔芋粉水解率和酶解液还原糖质量浓度分别为53.3%和10.45 mg/m L。超滤后的酶解产物经高效液相色谱检测可知组分主要以低聚葡甘露糖为主,其中还原性单糖占9.83%,二糖以上的低聚葡甘露糖占90.17%。     

米曲霉木聚糖酶N端引入二硫键对其热稳定性的影响

为提高源自米曲霉Aspergillus oryzae 11家族木聚糖酶(AoXyn11A)的热稳定性,对其相关的氨基酸残基进行定点突变改造。通过对野生型酶AoXyn11A和一种超耐热酶EvXyn11TS的N端氨基酸残基序列进行同源比较,在野生型酶N端引入一个二硫键,获得突变酶AoXyn11AM。野生型酶和突变酶的热稳定性通过同源建模和分子动力学模拟分析评估后,其基因分别在毕赤酵母GS115中进行表达并分析温度对表达产物酶活性的影响。结果表明:突变酶的最适温度由野生型酶的55℃提高至60℃;在50℃和55℃保温30 min,突变酶保留94%和45%保温处理前的酶活性,分别较野生型酶(62.5%和1.4%)有大幅度的提高。突变酶在保留了野生酶其它优良性质的基础上,提高了热稳定性,具有潜在的工业应用价值。