耐热木聚糖酶基因xyn11EM在大肠杆菌中的表达

将人工合成经密码子优化的11家族耐热木聚糖酶基因xyn11~(EM)克隆至表达质粒p ET-28a(+)中,获得重组质粒p ET-28a-xyn11~(EM)。将其转化Escherichia coli BL21(DE3),构建表达耐热木聚糖酶的重组工程菌E.coli BL21/xyn11~(EM)。用IPTG诱导表达重组木聚糖酶Xyn11~(EM)(re Xyn11~(EM)),酶活性可达47.5 U/m L。SDS-PAGE分析显示,re Xyn11~(EM)的表观相对分子质量为24 800。re Xyn11~(EM)的最适反应温度为70℃,在70℃以下稳定。最适反应p H为6.5~7.0,在p H5.0~8.0范围内稳定。大多数金属离子和EDTA对该重组酶的活性影响不大。re Xyn11~(EM)的Km和Vmax值分别为7.2 mg/m L和54.7 U/mg。结果表明xyn11~(EM)成功在E.coli中实现了异源表达,其良好的热稳定性具有较好的工业应用潜力。     

宇佐美曲霉阿魏酸酯酶A基因的克隆表达及酶学性质研究

本研究通过RT-PCR技术从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001中克隆了编码阿魏酸酯酶A的成熟肽cDNA(AusfaeA),构建重组表达质粒pPIC9K-AusfaeA,将其经SacⅠ线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/AusfaeA,用甲醇诱导表达重组阿魏酸酯酶(reAusFaeA)。SDS-PAGE显示,纯化后的reAusFaeA为单一条带,其表观相对分子质量为36 000;以阿魏酸甲酯为底物,经高效液相色谱法测定,该酶的酶活为29.4 U/mg;reAusFaeA的最适反应温度为45℃,并在45℃以下稳定;最适反应pH为5.0,在pH 4.0~6.0范围内稳定;多数测定的金属离子及EDTA对该酶的活性影响不大。结果表明在P.pastoris中成功实现了AusfaeA的异源表达,该重组酶优良的酶学性质表明其具有较大的工业应用潜力。     

圆弧青霉PG37碱性脂肪酶的发酵工艺条件

研究了圆弧青霉PG3 7碱性脂肪酶的发酵工艺条件 ,优化了PG3 7的摇瓶最适产酶条件 .其中 ,发酵培养基的组成为 (g/dL) :豆饼粉 3 .0 ,玉米浆 3 .0 ,磷酸氢二钾 1 .0 ,硫酸镁 0 .1 ,大豆磷脂0 .5,柠檬酸钠 0 .0 5,花生油 0 .2 ;发酵培养基起始 pH 7.5,发酵温度 (2 9± 1 )℃ ,摇床转速 2 50r/min ,发酵周期 96h ,发酵期间于 3 6,54,72h分别流加 0 .4 g/dL花生油 .在此条件下 ,PG3 7的脂肪酶产率为 2 0 60 μmol/ (min·mL) .PG3 7在 2 5L的实验室小罐中的产酶水平为 1 90 0 μmol/ (min·mL) .     

转基因食品及其安全性研究进展

随着生物技术的发展，转基因食品逐渐走进我们的生活。本文概述了转基因食品及其类型。简要回顾了转基因食品的国内外发展现状，探讨了国际上倍受关注的转基因食品安全性问题，详细阐述了转基因食品的功能及其检测技术，最后对转基因食品的发展前景进行了展望。     

富马酸的固定化细胞(酶)转化

<正> 固定化细胞(酶)技术是生物工程领域中的一项新兴技术,近二十多年来发展迅猛,其应用研究已涉及到食品与发酵工业、医药工业、化学分析、环境保护、能源开发等各个领域。固定化细胞(酶)生产技术是有机合成和酶催化反应相结合的新技术,具有成本低、周期短、能耗低及工艺简单等优点。本文将就富马酸固定化细胞转化技术作一综述介绍。     

耐热β-甘露聚糖酶基因的克隆与表达及酶学性质

基于生物信息学和基因组学分析的结果,采用RT-PCR技术从宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001中克隆出一种糖苷水解酶(GH)26家族β-甘露聚糖酶(AuMan26A)成熟肽编码基因(Auman26A),成功实现其在毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中的异源表达。重组β-甘露聚糖酶(reAuMan26A)的发酵上清液对角豆胶的酶活性为281.9 U/mL,纯化后比酶活为2281.7 U/mg。其最适反应温度Topt为40℃;在80℃处理60 min后残留酶活性为60%;90℃时的半衰期t1/290为10 min,处理60 min后残留酶活性仍为33%;其最适pH为5.5,在pH 5.0~7.0的范围内较稳定;Fe2+和Fe3+对其有明显的抑制作用,其它所测金属离子和EDTA对其没有明显的影响;所测酶的最适底物为角豆胶,其次是魔芋粉和瓜尔豆胶,其对角豆胶的Km和Vmax值分别为15.25 mg/mL和7 841.9 U/mg。reAuMan26A良好的热稳定性使其在食品、饲料和纺织等工业具有广阔的应用前景。     

黑曲霉液体发酵纤维素酶的研究

在黑曲霉ＤＭ—１液体深层发酵所产纤维素酶系中，β－葡萄糖苷酶活性特别高。系统研究了ＤＭ—１菌株的摇瓶产酶条件及２５Ｌ发酵罐发酵工艺。２５Ｌ发酵罐试验结果表明，在通风量０．４～１．０ｖｖｍ、搅拌转速２５０～５００ｒ／ｍ、发酵温度３１℃及控制发酵液ｐＨ在４．０左右的条件下，发酵１０４小时，其β－葡萄糖苷酶活和ＣＭＣ分别为３３０和２４１ｍｇ葡萄糖／ｍｌ。发酵滤液经硫铵盐析沉淀、过滤或离心及干燥等过程得固体纤维素干酶粉。其中β－葡萄糖苷酶活为１３５００ｍｇ葡萄糖／ｇ，平均收率８０．２％。     

黑曲霉酸性β-甘露聚糖酶的产酶条件

研究了培养基组分和培养条件对黑曲霉菌株Aspergillusniger LW-1固态发酵产β-甘露聚糖酶的影响。在单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman和Box-Behnken实验设计确定的最佳产酶培养基组成和培养条件：麸皮与豆饼粉质量比为7.5∶2.5（g/g）,其它物质相对于固体物料的质量分数分别为魔芋粉4%,KH2PO40.3%,玉米浆5%,CaCl20.1%,MgSO40.1%,（NH4）2SO41%,液固质量比为1.5∶1,自然pH;32℃静置培养84h,期间翻曲1次。最高酶活可达24879IU/g。     

仿生鲶鱼抗菌肽编码序列的设计及克隆

人工合成的仿生鲶鱼抗菌肽DNA序列，经聚合酶链式反应(PCR)扩增后得到带有不同限制性酶切位点的序列XH1、XH2、XH3．将此基因克隆至载体pGEX-5X-3，成功构建了三串联的重组质粒．测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)，37℃IPTG诱导，获得高效表达，SDS—PAGE扫描分析表明，融合蛋白可达细菌全蛋白总量的30％，融合蛋白以包含体的形式存在于大肠杆菌细胞中．     

吐温/缓冲液体系中酶法合成(R)-对氯环氧苯乙烷

利用环氧化物水解酶突变体Pv EH1Z4X4-59制备了(R)-对氯环氧苯乙烷〔(R)-p CSO〕。以E. coli/pveh1Z4X4-59全细胞作为生物催化剂,在磷酸盐缓冲液体系(Na2HPO4-Na H2PO4,100mmol/L,pH=7.0)中有效拆分250mmol/L对氯环氧苯乙烷(rac-p CSO)制备(R)-p CSO(ees> 99%)。随后,依据6种非离子型表面活性剂对E. coli/pveh1Z4X4-59全细胞酶活力和对映选择性的影响,筛选吐温-20作为最佳添加剂,构建并优化吐温-20/缓冲液反应体系。在最优反应条件下,吐温-20的添加量为4%(体积分数),E. coli/pveh1Z4X4-59全细胞的添加量为200 g/L,反应时间为12 h,初始底物浓度显著提高至800 mmol/L(123.7 g/L),获得(R)-p CSO的ees和产率分别为99%和45.7%(理论产率为50%),时空产率高达4.71 g/(L·h)。反应体系放大至100 mL后,制备4.5 g (R)-p CSO的总收率为36.3%。