仿生鲶鱼抗菌肽编码序列的设计及克隆

人工合成的仿生鲶鱼抗菌肽DNA序列，经聚合酶链式反应(PCR)扩增后得到带有不同限制性酶切位点的序列XH1、XH2、XH3．将此基因克隆至载体pGEX-5X-3，成功构建了三串联的重组质粒．测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3)，37℃IPTG诱导，获得高效表达，SDS—PAGE扫描分析表明，融合蛋白可达细菌全蛋白总量的30％，融合蛋白以包含体的形式存在于大肠杆菌细胞中．     

茶树菇多糖的初步纯化及其毒理学初步评价

采用Sevage法去除游离蛋白质，H2O2脱色、蒸馏水透析去除无机盐等方法对茶树菇菌丝体多糖和发酵液多糖进行初步纯化，经真空干燥后获得白色粉末。急性毒性试验表明，在大剂量腹腔注射菌丝体多糖和发酵液多糖的情况下。未出现小鼠死亡，也未有明显毒性反应，说明茶树菇多糖无毒性或毒性很小，其最大安全剂量在200ms／ks以上。     

真菌壳聚糖酶研究进展

壳聚糖酶是专一性降解壳聚糖的糖苷水解酶。在对比分析真菌壳聚糖酶和细菌壳聚糖酶的异同的基础上,总结近年来真菌壳聚糖酶在分类、酶学性质、基于分子生物学和生化工程的高产策略的研究进展。通过整理文献发现,来自真核微生物的壳聚糖酶降解产物为壳寡糖与氨基葡萄糖,具有分子质量大、活性较低等特点,针对酶活低这个迫切要解决的问题,讨论了提高产酶的潜在策略。     

定点突变提高菜豆环氧水解酶的对映选择性

为了提高菜豆环氧水解酶（PvEH1）催化对氯环氧苯乙烷（pCSO）的对映选择性,利用定点突变构建了PvEH1^W102L、PvEH1^P137K及PvEH1^I151V三种突变体,分别研究了突变体全细胞动力学拆分rac-pCSO的催化特性,优化了PvEH1^W102L动力学拆分rac-pCSO的初始底物浓度及反应时间,通过分子模拟分析了PvEH1^W102L对映选择性提高的机理。结果表明,最优突变体PvEH1^W102L的E值为25.5,相对酶活为212.6%,分别是PvEH1的11.6倍与2.1倍;PvEH1^W102L动力学拆分150 mmol·L^-1 rac-pCSO,反应4 h后,可获得（R）-pCSO（产率为45.62%,ee_s为96.30%）和（R）-对氯苯基乙二醇（产率为50.91%,ee_p为90.26%）。分子模拟结果分析表明,PvEH1的102位色氨酸（W）突变为亮氨酸（L）降低了酶与（R）-pCSO的结合能力,从而提高了PvEH1^W102L对pCSO的对映选择性。     

β-甘露聚糖酶固态发酵的产业化生产技术

在黑曲霉LW-1-9菌株三角瓶固态发酵试验的基础上,经曲盘(Φ 20.0 cm × 5.0 cm)固态发酵试验,放大到30.m3固态发酵罐(Φ 4.5 m × 2.0 m)的产业化生产规模.固态发酵基料(其中:麸皮700～800 kg,豆饼粉或菜籽饼粉200～300 kg)总量为1 000 kg/批次,料水质量比1: 1 8～2 0,自然pH,并添加魔芋粉3%～5%,玉米浆3%～5%,(NH4)2SO4 1%～1.5%,CaCl2 0.05%0.1%,MgSO4 0.05%～0.1%,KH2PO4 0.3%～0.5%(质量分数,相对于基料);经灭菌、接种后,于32～36 ℃间断通风培养72～84 h,期间分别于第20-24小时和第36-40小时各翻曲1次,并同时补加无菌水180～200 kg.在上述发酵工艺条件下,LW-1-9菌株产业化生产β-甘露聚糖酶,活性可达每克干曲26 725～29 218 IU.     

木聚糖酶EvXyn11TS N端区域对其耐热性贡献的生物信息学分析

系统分析了11家族木聚糖酶EvXyn11~(TS)N端区域对其耐热性的影响。在GenBank数据库中借助BLAST服务器搜寻与EvXyn11~(TS)序列同源性大于55%且温度特性已知的30种木聚糖酶;运用ClustalW2程序和MEGA 5.1软件对31种木聚糖酶进行了多序列比对及进化树构建,从中选择了包含EvXyn11~(TS)在内的8种代表性耐热和中温酶;采用生物学程序软件分析了所选酶在N端的异同点。分析结果表明,EvXyn11~(TS)N端的耐热有利氨基酸含量、β-折叠股A1和氨基酸相互作用等对其耐热性有一定的贡献。     

定点突变改善β-甘露聚糖酶AuMan5A的酶学性质

基于糖苷水解酶5家族(GHF5)β-甘露聚糖酶一级、三维结构的比对和分析,对宇佐美曲霉GHF5β-甘露聚糖酶AuMan5A的关键位点氨基酸实施定点突变以获得酶学性质优良的突变酶AuMan5A~(G320D)。采用大引物PCR技术将AuMan5A基因(Auman5A)中编码Gly~(320)的密码子GGT突变为Asp~(320)的GAC,构建出突变酶基因Auman5A~(G320D)。分别将Auman5A和Auman5A~(G320D)在毕赤酵母GS115中进行了表达,分析了表达产物AuMan5A和AuMan5A~(G320D)的酶学性质。结果表明:AuMan5A~(G320D)的最适温度Topt由突变前的65℃提升至70℃,在70℃的半衰期t_(1/2)~(70)由原酶的10 min延长至25 min;AuMan5A~(G320D)的比活性由突变前的351.2 U/mg提高到1 729.1 U/mg,其催化效率(k_(cat)/K_m)是原酶的9.3倍。将Gly~(320)突变为Asp~(320)不仅改善了AuMan5A的温度特性,而且显著提高了该酶的比活性和催化效率。     

N-端置换提高木聚糖酶AoXyn11A的耐热性

为提高米曲霉(Aspergillus oryzae)糖苷水解酶家族(GHF)11木聚糖酶AoXyn11A的耐热性,将其N-端置换为来源于嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)的同一家族耐热木聚糖酶pXYL11的对应区域。基于木聚糖酶耐热性的理性设计,采用大引物PCR技术将AoXyn11A基因(Aoxyn11A)的5′-端DNA片段置换为pXYL11人工合成基因(xyn11PM)的对应片段,构建出杂合木聚糖酶ATX11A基因(ATx11A)。分别将Aoxyn11A和ATx11A在毕赤酵母GS115中进行了表达,并分析了重组表达产物AoXyn11A和ATX11A的温度特性。结果表明:ATX11A的最适温度T_(opt)由AoXyn11A的50℃提升至65℃,在60℃的半衰期t_(1/2)~(60)为55 min,较AoXyn11A延长了41.3倍;ATX11A在55℃处理3 h保留60%以上的酶活性,而AoXyn11A处理15 min酶活性完全丧失。本研究通过N-端置换显著改善了AoXyn11A的温度特性。     

碱性脂肪酶在洗涤剂中的应用

本文扼要综述了国内外加酶洗涤剂的发展和前景，并重点介绍了碱性脂肪酶在洗涤剂听 应用情况。