碱性脂肪酶测定方法的研究

通过对PG37圆弧青霉所产的碱性脂肪酶及同类酶的测定方法的研究和比较,对碱性脂肪酶的测定提出了新的方法。该方法较一般方法简单,并能节省部分实验材料。为国内碱性脂肪酶测定标准提供了一定的理论基础。     

黑曲霉纤维素酶的特性研究

在黑曲霉突变株DM-1所产纤维素酶中,β-葡萄糖苷酶活力较高。采用固体发酵培养,其滤纸酶活和β—葡萄糖苷酶活分别为95和1200mg葡萄糖/gDMh。本试验系统研究了该酶的固体发酵培养过程、最适反应温度、热稳定性、最适反应pH以及pH对酶稳定性的影响,为该酶在酿造行业中的广泛应用提供参考依据。     

里氏木霉纤维素酶突变株选育的研究

以里氏木霉WXR－8为出发菌株，经紫外和亚硝基胍诱变处理后，得到一株抗纤维二糖阻遏突变株RM－27。突变株RM－27的纤维素滤纸酶活提高了64．5％。经过发酵条件优化后，采用固体发酵，RM－27菌株发酵144h（培养温度29℃），其滤纸酶活和β-葡萄糖苷酶活分别为600mg和115mg葡萄糖／gDMh。     

发酵法生产酶过程中的染菌对策

针对发酵法生产酶过程中的染菌问题，文章叙述了发酵培养基消毒前ｐＨ调至４．５可有效防止糖化酶发酵染菌，加大种子接种量和缩短发酵时间配以严格无菌操作和管理，可防止α－淀粉酶和碱性脂肪酶发酵过程染菌，一旦发生染菌及时放罐，把发酵染菌造成的损失降低到最小。     

α-淀粉酶对糖化酶测定的影响

本研究以WMC-15糖化酶菌株所产发酵液为供试酶液,系统研究了糖化酶发酵过程中的α-淀粉酶活力以及α-淀粉酶对糖化酶测定结果的影响,有利于更加精确地测定糖化酶活力单位及控制糖化酶发酵过程。     

人溶菌酶-木聚糖酶融合基因在毕赤酵母中的表达

目的在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)-木聚糖酶(Xylanases,XynⅡ)融合基因。方法通过PCR技术将hLY基因与XynⅡ基因连接,中间插入肠激酶识别位点序列;将其克隆至载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-XynⅡ-EKsite-hLY,经SacⅠ线性化后,电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选得到高拷贝转化子,PCR鉴定为阳性的克隆用甲醇进行诱导;表达的融合蛋白经Sephadex G-75凝胶柱层析纯化后,用肠激酶酶切,分别采用改良舒加法和DNS法测定hLY和XynⅡ的活性。结果获得的融合基因序列与理论序列完全一致;重组表达质粒构建正确;融合蛋白的hLY和XynⅡ活性分别为170和158 U/ml,经肠激酶酶切后,hLY的活性为520 U/ml,XynⅡ的活性达244 U/ml。结论已在毕赤酵母中成功表达了XynⅡ-EKsite-hLY融合基因,经肠激酶酶切后的目的蛋白活性均有较大提高。